一、猪活体脑片钙离子荧光强度的测定及对停循环后脑缺血损伤的评价（论文文献综述）
姜思媛[1]（2021）在《针刺抑制GFAP、AQP-4表达以提高脑梗死溶栓安全性的实验研究》文中研究说明目的:观察针刺对急性脑梗死大鼠溶栓后神经行为学、脑梗死体积、血脑屏障（BBB）通透性、脑含水量的影响,明确针刺提高脑梗死溶栓安全性的效应;并从星形胶质细胞的途径探讨其作用机制。方法:本实验分为两部分。实验一:针刺提高脑梗死溶栓安全性的效应研究。本研究采用改良的大鼠自体血栓栓塞法制备脑梗死模型,选用“醒脑开窍”针刺法为介入手段,尾静脉注射阿替普酶（rt-PA）为溶栓方法。将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、4.5h溶栓组、6h溶栓组、针刺+4.5h溶栓组、针刺+6h溶栓组,造模24h后观察针刺对各组大鼠神经行为学、脑梗死体积、BBB通透性、脑含水量的影响,明确针刺提高脑梗死溶栓安全性的效应。实验二:针刺提高脑梗死溶栓安全性的机制研究。模型制备、介入手段、溶栓方法同实验一。在实验一的基础上,将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、6h溶栓组、针刺+6h溶栓组,造模24h后取材。运用Real-time PCR和Western Blot法分别检测各组大鼠大脑皮层中星形胶质细胞相关指标（胶质纤维酸性蛋白GFAP、水通道蛋白4AQP-4）的mRNA和蛋白表达,探讨针刺提高脑梗死溶栓安全性的作用机制。结果:1.各组大鼠神经行为学评分比较:造模后24h进行评分,模型组的神经行为学评分高于假手术组（P<0.01）。4.5h溶栓组、针刺+4.5h溶栓组的神经行为学评分差异无统计学意义（P>0.05）,均低于模型组（均P<0.01）。针刺+6h溶栓组的神经行为学评分均低于模型组和6h溶栓组（P＜0.05,P<0.01）。2.各组大鼠脑梗死体积百分比比较:模型组的脑梗死体积百分比高于假手术组（P<0.01）。4.5h溶栓组、针刺+4.5h溶栓组的脑梗死体积百分比差异无统计学意义（P>0.05）,均低于模型组（均P<0.01）。针刺+6h溶栓组的脑梗死体积百分比均低于模型组和6h溶栓组（均P<0.05）。3.各组大鼠BBB通透性比较:模型组的EB含量高于假手术组（P<0.01）。4.5h溶栓组、针刺+4.5h溶栓组的EB含量差异无统计学意义（P>0.05）,均低于模型组（均P<0.01）。6h溶栓组的EB含量高于模型组（P<0.01）。针刺+6h溶栓组的EB含量均低于模型组和6h溶栓组（均P<0.01）。4.各组大鼠脑含水量百分比比较:模型组的脑含水量百分比高于假手术组（P<0.01）。4.5h溶栓组、针刺+4.5h溶栓组的脑含水量百分比差异无统计学意义（P>0.05）,均低于模型组（均P<0.01）。6h溶栓组的脑含水量百分比高于模型组（P＜0.01）。针刺+6h溶栓组的脑含水量百分比均低于模型组和6h溶栓组（P<0.05,P＜0.01）。5.各组大鼠大脑皮层GFAP的mRNA表达比较:根据Real-time PCR结果显示,模型组GFAP的mRNA表达水平高于假手术组（P＜0.01）。针刺+6h溶栓组GFAP的mRNA表达水平均低于模型组和6h溶栓组（均P＜0.01）。6.各组大鼠大脑皮层AQP-4的mRNA表达比较:根据Real-time PCR结果显示,模型组AQP-4的mRNA表达水平高于假手术组（P<0.01）。针刺+6h溶栓组AQP-4的mRNA表达水平均低于模型组和6h溶栓组（均P＜0.01）。7.各组大鼠大脑皮层GFAP的蛋白表达比较:根据Western Blot结果显示,模型组GFAP的蛋白表达水平高于假手术组（P<0.01）。针刺+6h溶栓组GFAP的蛋白表达水平均低于模型组和6h溶栓组（P<0.05、P＜0.01）。8.各组大鼠大脑皮层AQP-4的蛋白表达比较:根据Western Blot结果显示,模型组AQP-4的蛋白表达水平高于假手术组（P＜0.05）。针刺+6h溶栓组AQP-4的蛋白表达水平均低于模型组和6h溶栓组（P<0.05、P<0.01）。结论:1.在急性脑梗死4.5h时间窗内进行单纯溶栓治疗或针刺配合溶栓治疗,均具有较理想的脑保护效应且作用相仿。2.4.5h时间窗外进行脑梗死溶栓治疗,更易产生出血性转化、脑水肿等溶栓副作用。本研究表明,针刺及时介入后,在脑梗死发病6h进行溶栓,能够减轻溶栓并发症,仍具有安全性的效应。3.针刺能够下调缺血脑组织中GFAP、AQP-4的mRNA和蛋白的表达,表明针刺可通过抑制星形胶质细胞活化来实现提高溶栓安全性的效应。
王雪娇[2]（2020）在《小胶质细胞在系统性红斑狼疮自身抗体诱导的脑认知障碍中的作用及机制的研究》文中研究说明目的:系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE）是一种多系统受累的慢性自身免疫性疾病。临床表现多种多样,累及肾脏出现蛋白尿,血尿乃至肾衰竭;心血管系统受累则常出现心包炎,心内膜炎及冠状动脉损害。当SLE患者出现无菌性脑炎,脑血管病变,头痛,急性意识错乱,认知功能减退,情绪障碍及精神病等中枢神经系统（central nervous system,CNS）受累症状时,称之为神经精神性狼疮,即狼疮脑病（neuropsychiatric SLE,NPSLE）。目前有关NPSLE的病理机制仍不清楚。已有临床研究发现抗核糖体P蛋白自身抗体（autoantibodies against ribosomal P protein,Anti-P）等来自SLE患者血清中的自身抗体与NPSLE的神经精神症状密切相关。在动物实验中发现这些自身抗体可攻击大脑海马区神经元从而造成空间记忆功能的损害。然而既往有关NPSLE研究大多只检验了自身抗体对大脑神经元的直接作用,而在CNS中发挥免疫和神经调节作用的小胶质细胞却很少受到关注。目前已有越来越多的证据表明,小胶质细胞介导的神经炎症反应在多种神经精神疾病中都起着重要作用。为了深入探讨小胶质细胞与NPSLE的相关性,我们在本研究中以正常小鼠为模型开展一系列在体实验,检验SLE患者来源的Anti-P IgG（immunoglobulin G,IgG）等致病因素对脑组织细胞形态,神经电生理活动和认知行为功能的影响,着重探讨小胶质细胞介导的炎症反应的发生发展过程,并验证通过抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,m TOR）的途径能否缓解神经炎症反应,从而达到治疗Anti-P IgG诱导的神经功能障碍的目的。研究方法:1、收集SLE患者血清或健康对照者血清,通过在体脑内微量注射的方法,将其注射到小鼠侧脑室内（intracerebroventricular,ICV）,通过在体荧光显微成像的方法观察脑微血管内白细胞贴壁滚动和粘附情况,以评价微血管内炎症反应的程度。2、通过注射含有热灭活H37Ra结核分枝杆菌的完全弗氏佐剂（complete Freund’s Adjuvant,CFA）和百日咳毒素（pertussis toxin,PTx）的方法提高小鼠脑血屏障（blood brain barrier,BBB）的通透性,然后经尾静脉注射SLE患者来源的Anti-P IgG（immunoglobulin G）,使其能够通过BBB进入到CNS中。3、在小鼠大脑初级听皮层（the primary auditory cortex,A1）植入电极,记录A1对40 Hz click-train刺激反应的脑电图（electroencephalogram,EEG）信号,以评价听觉稳态反应（auditory steady-state response,ASSR）。4、制作脑组织切片,使用神经元特异性核蛋白（neuron-specific nuclear protein,NeuN）、离子钙接头蛋白（ionized calcium binding adapter molecule,Iba-1）和胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）分别对神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞进行特异性免疫荧光染色,以评价不同类型细胞的密度和形态的变化。通过TUNEL法来检测脑组织中神经细胞的凋亡情况。检测趋化因子[chemokine（C-C motif）ligand 2,CCL2和CCL5]和粘附分子[P-选择素（P-Selectin）和细胞间黏附分子-1（intercellular cell adhesion molecule,ICAM-1）]表达情况。5、使用集落刺激因子-1受体（colony-stimulating factor-1 receptor,CSF1R）抑制剂PLX3397选择性消除小鼠脑内小胶质细胞,观察在没有小胶质细胞存在的情况下Anti-P IgG对小鼠脑神经活动的影响。6、将亲和纯化的Anti-P IgG或健康对照IgG注射到正常小鼠左右腹侧海马CA1区。48 h后,通过社交行为实验来评价Anti-P Ig G对小鼠社会认知记忆功能的影响。并通过嗅觉测试和旷场试验来评价小鼠嗅觉功能和运动能力。7、用qRT-PCR方法检测脑组织中细胞因子[肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor,TNF-α）、白介素-1（interleukin,IL-1）和IL-6,干扰素-γ（interferon,IFN-γ）],趋化因子（CCL2和CCL5）和神经营养因子（IL-4和IL-10）的表达水平。8、检验预先使用米诺环素和雷帕霉素（rapamycin,Rapa）预处理小鼠能否减轻上述组织学,电生理和行为学检测的异常表现。结果:1、我们利用活体显微成像的方法观察到:ICV注射SLE血清后导致小鼠脑微血管中出现白细胞贴壁滚动和粘附现象。免疫组织切片染色结果显示SLE血清可以使小鼠大脑皮层和海马的Iba-1染色的小胶质细胞密度增加,并呈现激活状态。同时脑组织中炎性介质、趋化因子和粘附分子表达水平显着升高。应用米诺环素治疗后白细胞的贴壁滚动和粘附现象也有所减轻,并且脑组织中小胶质细胞活化明显减少,炎症分子水平降低。2、注射到外周循环血中的Anti-P IgG可以通过打开的BBB进入脑内,促使ASSR增强的同时激活脑组织中的小胶质细胞,但未造成明显的神经细胞凋亡。当脑内小胶质细胞被消除时,Anti-P IgG可导致ASSR严重降低并同时出现明显的神经细胞凋亡。3、在腹侧海马CA1区内注射Anti-P IgG可以造成小鼠的社会认知能力损害,而嗅觉和运动功能并未受到影响。同时伴有vCA1区内神经元损伤、星形胶质细胞和小胶质细胞激活,白细胞介素（IL-1β、IL-6）和TNF-α等炎症因子的产生增加,而IL-4和IL-10的产生减少。预先应用Rapa治疗可以缓解Anti-P Ig G引起的社会认知功能障碍,减少神经病变及星形胶质细胞和小胶质细胞的活化,同时还减少了促炎细胞因子的产生并且增加了抗炎细胞因子的产生。结论:1、我们的研究提示SLE患者血清来源的致病因素可以引起小胶质细胞活化,以及白细胞与脑微血管粘附等炎症反应,这可能是造成SLE患者BBB功能受损,外周循环中的自身抗体大量进入CNS的一个重要原因。2、SLE患者来源的Anti-P IgG可引起ASSR等脑神经电活动出现异常,而在小胶质细胞存在的情况下这种异常电活动可以恢复,但是如果失去了小胶质细胞的保护则会出现不可逆的神经损伤。3、小胶质细胞介导的神经炎症反应可能参与了Anti-P Ig G诱导的社会认知行为障碍,Rapa可以通过抑制神经炎症反应而发挥对神经功能的保护作用。
张凯[3]（2019）在《基于PET分子影像的普鲁士蓝纳米酶治疗脑缺血的基础研究》文中认为缺血性脑卒中是全球主要致死性疾病之一,占全球死亡病因的5.2%。缺血性脑卒中通常是由血栓或栓子阻断大脑动脉血流供应,引起短暂或永久的脑血流减低所致。短暂性脑血供减少或丧失会触发脑缺氧-再灌注损伤,诱发大量活性氧/氮（reactive oxygen and/or nitrogen species,ROS/RNS 或 RONS）的产生。大量产生的RONS被认为是介导脑缺血-再灌注后神经元损伤最主要的因子,靶向RONS的抗氧化剂也由此成为一种能保护神经元免受RONS损伤和改善缺血性脑卒中预后的理想药物。目前,以新型纳米材料为基础合成的抗氧化纳米酶,因具有稳定的酶样活性、较强的抗氧化性质、良好的生理稳定性和较低的合成成本等优势引起了广泛关注。普鲁士蓝是一种美国食品药品监督管理局批准的铯和铊中毒的解毒剂,具有良好的生物安全性。基于普鲁士蓝合成的纳米粒因具有磁/光性能、可控的理化性质以及多孔结构等优势,已被开发为多模态显像探针、药物载体和光热转换剂等,在生物医学研究领域受到广泛关注。此外,普鲁士蓝纳米粒因其具有过氧化氢酶、超氧阴离子歧化酶和过氧化物酶等多酶样活性,可作为有效的RONS清除剂。然而,其能否起到保护神经元、改善缺血性脑卒中等RONS相关疾病预后的作用,尚无研究报道。正电子发射计算机断层显像（positron emission tomography,PET）是一种无创的可在细胞和分子水平上在体显示机体生物活动的新型分子影像技术。18氟-脱氧葡萄糖（18F-fluorodeoxyglucose,18F-FDG）PET成像能够反映机体细胞水平的葡萄糖代谢情况和细胞的活性,已用于多种神经系统疾病的诊断和疗效评估。本研究旨在通过提出绿色安全、简单便捷的合成方法,合成新型空心普鲁士蓝纳米酶（hollow Prussian blue nanozymes,HPBZs）,并将其应用于缺血性脑卒中,从纳米技术、体外细胞和活体动物水平,探究其神经元保护作用及相关机制;同时,基于18F-FDG PET成像,活体评估HPBZs在缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用和效果,为普鲁士蓝纳米粒的临床转化提供研究基础。第一部分HPBZs合成、表征以及性能检测本部分研究通过研发Bi3+介导的无模板空心纳米粒合成方法,成功制备了HPBZs。该方法合成路径简单,无需复杂的预处理和苛刻的合成条件。制备的HPBZs为直径约65 nm、大小均一、分散均匀的空心纳米粒,在生理环境下能够维持稳定的水合动力学直径,表现出良好的生物学稳定性。此外,HPBZs具有多酶样活性、可变的价态和较强的氧化还原性能,不仅能够将毒性ROS转化为无毒的水分子和氧气,而且能够有效地清除RNS。同时,空心结构赋予HPBZs更大的比表面积,增大HPBZs与RONS接触面积,从而提高HPBZs清除RONS的效能。本部分研究结果为HPBZs在缺血性脑卒中中清除大量产生的RONS从而发挥神经保护作用提供了实验依据。第二部分HPBZs发挥细胞保护作用的体外细胞实验研究该部分主要研究了 HPBZs在体外细胞水平的保护作用,并进一步探讨其发挥细胞保护作用的机制。首先,我们建立了体外细胞氧化应激模型,结果显示,HPBZs能够抵抗氧化应激损伤,保护神经元;随后构建了氯化钴诱导的体外细胞缺氧模型,结果显示HPBZs能够降低RONS水平,调控凋亡蛋白p53和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,从而保护缺氧受损的神经元;此外,我们还构建了体外炎症模型,结果表明HPBZs能够通过减少炎症介质环氧合酶-2和诱导型一氧化氮合酶的表达,抑制炎症因子IL-1β的释放,发挥体外细胞抗炎作用。综上所述,HPBZs可能通过减少RONS、抵抗细胞凋亡和抑制炎症反应,从而发挥细胞保护作用。第三部分HPBZs发挥神经保护作用的动物实验研究该部分主要研究了 HPBZs对缺血性脑卒中大鼠的神经元保护作用,并进一步探索其发挥神经元保护作用的机制。我们采用经典的致大鼠大脑中动脉梗阻线栓法构建了脑缺血-再灌注损伤大鼠模型,并于脑缺血-再灌注前2天、脑缺血-再灌注后1小时、4小时或8小时侧脑室注射HPBZs（40 μg/mL,10μL）,结果显示,脑缺血-再灌注前2天或缺血-再灌注后1小时侧脑室注射HPBZs可显着减少大鼠脑梗面积、改善大鼠脑缺血区葡萄糖代谢和促进大鼠神经行为学功能恢复;进一步分子生物学实验结果提示HPBZs可能通过降低脑内RONS水平、抑制神经胶质细胞增生和抵抗神经元凋亡,发挥神经元保护作用以拮抗缺血诱导的神经元损伤。同时,初步的活体生物安全性评估（包括18F-FDG PET成像、神经行为学测试以及2,3,5-三苯基氯化四氮唑染色分析）结果显示,HPBZs具有良好的生物安全性。
黄钦[4]（2018）在《皮层扩散性抑制影响双侧皮层感觉响应的光学成像研究》文中研究表明皮层扩散性抑制（Cortical Spreading Depression,CSD）是一个由神经元大规模去极化和紧接着的神经活动的抑制所组成的连续过程。它在传播过程中会突然破坏细胞内外离子平衡,反映为胞外直流电位的暂时翻转,而在传播之后会长时间抑制神经元自发活动,反映为皮层脑电信号的减弱及刺激诱发的皮层响应缺失。已有许多研究结果证实皮层扩散性抑制是偏头痛先兆的潜在神经基础,并且在脑卒中、蛛网膜下腔出血以及脑外伤等临床疾病的组织二次损伤中扮演不容忽视的角色。本文发展了一种带荧光校正的多模式光学成像系统,针对电压敏感染料（Voltge sensitive dye,VSD）染色小鼠及特异细胞类型的钙荧光转基因小鼠,分别对皮层扩散性抑制传播过程及传播前后的双侧皮层感觉响应进行了成像。本文的主要内容和得出的结论如下:（1）提出了一套具备荧光校正功能的多模式光学成像系统,它结合了双波长内源信号光学成像以及钙离子荧光成像,可以对血红蛋白和胞内钙离子浓度进行同时监测,并且能对钙离子荧光信号进行荧光校正。利用三种特异细胞类型标记的GCa MP6f转基因小鼠,对皮层扩散性抑制传播过程进行了血红蛋白及胞内钙离子荧光的同步监测,结果显示血红蛋白浓度变化在不同转基因小鼠上没有差异,但钙离子荧光相对变化幅度各不相同。Thy1,Som以及Vip小鼠在CSD传播过程中的相对荧光变化都呈现先升高、接着降低至原基线荧光强度以下、再缓慢恢复至原基线水平的三相变化,但三者荧光升高的幅度不同,Thy1小鼠为201±89%,Som小鼠为39±18%,Vip小鼠只有14±9%。经过荧光校正,皮质区域的相对荧光变化幅度均减小,但Thy1小鼠减小的程度微弱,校正前后差异不显着,Som及Vip小鼠校正前后改变程度较大,更有进行荧光校正的必要。在血管区域,校正前相对荧光变化幅度均显着高于皮质区域,校正后两种区域荧光变化幅度相同,荧光校正能显着减弱荧光变化图样中的血管伪迹。（2）利用VSD成像以及四种特异类型的转基因小鼠钙成像,对正常生理状态下的双侧皮层感觉响应进行了描绘,得到了后肢及胡须刺激下的双侧皮层感觉响应图样及其时空变化特性。VSD成像以及Thy1,Vglut2小鼠的钙成像均显示刺激能产生双侧皮层的感觉响应;而Som小鼠只能在刺激的对侧皮层产生响应,同侧皮层则不能;Vip小鼠在两种刺激方式下均不能稳定产生感觉响应。VSD成像的感觉响应在响应时间、达峰时间及持续时间上均最短;Thy1及Vglut2小鼠的感觉响应在三种时间特性指标上均无显着差异;Som及Vip小鼠响应时间长于Thy1及Vglut2小鼠,但持续时间短于Thy1及Vglut2小鼠。Thy1,Vglut2,Som三种小鼠在双侧皮层的激活区域相同,但在激活面积上Thy1小鼠最大,Vglut2小鼠其次,Som小鼠最小。后肢与胡须这两种不同的刺激方式得到的感觉响应时空特性不同,后肢刺激的达峰时间和持续时间短于胡须刺激;后肢刺激在对侧皮层的激活区域比胡须刺激更靠内侧,在同侧皮层响应则较为局域化。（3）观测了右侧皮层传播的CSD对双侧皮层感觉响应造成的不同影响。对于VSD成像,右侧皮层在同侧后肢和皮层表面刺激下,仍然能产生感觉响应,只是幅度有所降低,但在对侧后肢刺激下,皮层响应几乎完全消失。对于钙离子荧光成像,不同特异类型的转基因小鼠双侧皮层感觉响应受到了不同影响,Vglut2小鼠显示出对CSD极高的耐受性,双侧皮层感觉响应几乎都不受影响。而Thy1及Som小鼠则显示出对CSD的耐受性较低,Thy1小鼠在CSD影响一侧皮层的感觉响应显着减弱,未影响一侧皮层的感觉响应没有变化;Som小鼠受影响一侧皮层的感觉响应缺失。综合VSD成像的结果,分析了CSD后双侧皮层感觉响应发生不同变化的原因可能是CSD对神经元树突,胞体等不同组成部分产生的影响不同。
郑晨[5]（2017）在《GLYX-13对脑缺血性神经元损伤保护性机制的研究》文中认为研究目的:谷氨酸和过度激活的NMDA受体结合所介导的兴奋毒损伤作用是脑卒中等脑组织缺血性疾病主要的病理生理机制。在过去的几十年中,NMDA受体阻滞剂被广泛的用于脑卒中、阿尔兹海默症等神经精神性疾病的干预性研究中,然而由于其严重的神经系统副作用,多数NMDA受体阻滞剂在相关临床研究中均以失败告终。近年来相关研究表明在脑卒中发生后的数小时乃至数日内的脑组织中普遍存在神经元受损以及NMDA受体功能减退等表现,鉴于此本研究另辟蹊径试图通过调节NMDA受体活性这一手段抑制兴奋毒损伤作用并提升和改善脑卒中后的NMDA受体功能。本论文中所研究的干预性药物GLYX-13（rapastinel）是一种NMDA受体甘氨酸位点的调节剂,有相关研究表明该药物对神经元具有保护性且毒副作用较小,然而至今国内外尚无GLYX-13改善缺血性神经元损伤作用机制的研究报道。据此,本研究在小鼠在体大脑中动脉阻塞模型（Middle Cerebral Artery Occlusion,MCAO模型）以及离体脑片氧葡萄糖剥夺模型（Oxygen Glucose Deprivation,OGD模型）的基础上,通过观察GLYX-13对脑组织缺血/缺氧后有无神经保护效应及其对NMDA受体功能和突触可塑性的影响,探讨该药物对缺血性神经元损伤的保护性作用机制及其途径,为临床治疗脑卒中提供创新思路和方法。研究方法:1.探索GLYX-13对在体MCAO模型小鼠的神经保护性作用,研究方法如下:（1）实验动物分组:2月龄体重20-25g雄性C57BL/6小鼠随机分为3组,即假手术组（Sham）、MCAO模型给予生理盐水对照组（Vehicle）、MCAO模型给予GLYX-13干预组（GLYX-13）。（2）MCAO模型小鼠的制备:采用硅胶线栓法阻塞小鼠右侧大脑中动脉供应区血流,线栓阻塞血流时间为60min。（3）MCAO模型脑血流量检测:应用激光多普勒血流检测仪对造模前后小鼠的大脑中动脉中央供应区血流量进行检测,只有造模后脑血流量小于或等于造模前基线水平20%的小鼠方能被纳入后续研究。（4）应用GLYX-13干预:于MCAO术后两小时经腹腔注射给予GLYX-13干预组小鼠10mg/kg的GLYX-13。（5）神经功能学评分:参考Longa神经功能学评分对以上3组小鼠进行神经功能评估。（6）脑组织梗塞范围的检测:应用TTC染色检测3组小鼠的脑组织梗塞范围。（7）脑组织海马神经元损伤程度检测:应用脑组织石蜡切片HE染色以及Fluoro Jade C染色检测3组小鼠海马神经元的损伤。2.探讨GLYX-13对缺血性神经元损伤的保护性作用机制,研究方法如下:（1）脑组织中NMDA受体含量及其磷酸化水平的检测:应用Western blot检测再灌注4h以及24h后3组小鼠脑组织中NR2A、NR2B、p-NR2A（Tyr1325）以及p-NR2B（Tyr1472）的表达。（2）电生理脑片全细胞膜片钳实验（1）实验分组:4周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为4组,即对照组（Con）、脑片OGD模型组、脑片OGD同时给予GLYX-13干预组（OGD+GLYX-13）、脑片OGD同时给予GLYX-13和NMDA受体甘氨酸位点全效激动剂D-serine干预组（OGD+GLYX-13+D-serine）。（2）离体脑片OGD模型的制备:用于模拟脑组织缺血后能量供应缺乏这一情况,采用被95%N2+5%CO2的混合气所饱和的人工脑脊液（ACSF）来灌流脑片,并且这种ACSF中的10mmol/L的葡萄糖被同浓度的蔗糖所替代。对脑片施加OGD的持续时间为5min。（3）诱发性的兴奋性突触后电流（EPSC）的检测:电刺激海马脑片shaffer侧枝并应用电生理脑片全细胞膜片钳技术分别记录4组脑片海马CA3-CA1 shaffer collateral通路EPSC、NMDA-EPSC以及NR2A和NR2B亚型所介导的EPSC的幅值。（3）在体MCAO模型脑组织梗塞范围的检测:应用TTC染色检测GLYX-13+D-serine处理组、GLYX-13+NVP-AAM077（特异性NR2A亚型拮抗剂）处理组以及GLYX-13+Ro256981（特异性NR2B亚型拮抗剂）处理组小鼠的脑组织梗塞体积,并将其结果与本研究第二章节中的TTC染色结果进行比较,进一步证实GLYX-13很可能是通过调节NMDA受体NR2亚基组分这一途径从而发挥对病理性突触可塑性的抑制作用以及神经保护作用这一猜想。研究结果:1.GLYX-13对在体MCAO模型小鼠的神经保护性作用（1）GLYX-13改善了小鼠缺血再灌注24h后的神经功能学评分:GLYX-13干预组小鼠的神经功能评分显着低于盐水对照组（n=12,***p<0.001）。（2）GLYX-13减少了小鼠脑缺血再灌注24h后的脑梗塞体积:与盐水对照组相比,GLYX-13干预组小鼠的脑梗塞体积显着减少（n=12,###p<0.001）。（3）GLYX-13减轻了小鼠缺血再灌注24h后患侧海马神经元的损伤:与盐水对照组相比,GLYX-13干预组小鼠患侧海马CA3区以及DG区Fluoro Jade C阳性神经元的数量显着减少（###p<0.001,n=5）,此外CA1区Fluoro Jade C阳性神经元的数量也低于盐水对照组（#p<0.05,n=5）。2.GLYX-13通过差异性调节NMDA受体NR2亚基进而对损伤脑组织发挥神经保护性作用。（1）Western blot实验结果:GLYX-13显着地下调了MCAO小鼠再灌注4h后脑组织中的p-NR2B（Tyr1472）的表达（#p<0.05,n=6）并且上调了p-NR2A（Tyr1325）的表达（#p<0.05,n=6）;此外缺血再灌注24h后的小鼠受损伤影响其脑组织中NR2A型NMDA受体的表达明显减少而GLYX-13的干预有效地预防了NR2A亚型的损失（#p<0.05,n=6）使得该亚型所介导的正常神经生理功能得以维持。（2）脑片全细胞膜片钳实验结果:（1）GLYX-13通过激活NMDA受体的甘氨酸辅助激动位点对抗脑组织缺氧时所产生的病理性的突触可塑性增强（post-ischemic Long Term Potentiation,i-LTP）:长达5min的OGD使得海马CA1区锥体神经元在恢复能量供应后的EPSC的幅值显着持续增高（n=5,**p<0.01）,并且这种由OGD所诱导的EPSC病理性增益的现象可被特异性的NMDA受体拮抗剂AP-5所阻断,即证实了这种i-LTP的产生需要NMDA受体的参与。而GLYX-13干预组经历同样时长的OGD后其海马CA1区锥体神经元在恢复能量供应后的EPSC的幅值明显低于单纯OGD损伤组（n=5,##p<0.01）,并且D-serine能够完全抵消GLYX-13对于i-LTP的抑制效应。（2）GLYX-13参与调节脑组织能量剥夺条件下NMDA受体亚基的组成:给予海马脑片长达5min的OGD处理后,海马CA1区锥体神经元含有NR2B亚基的NMDA受体所介导的EPSC的幅值显着增高并同时伴随着总的NMDA-EPSC幅值的增高（n=5,**p<0.01）,而含有NR2A亚基的NMDA受体介导的EPSC的幅值只有轻微增高,与对照组的差异不具有统计学意义。值得注意的是GLYX-13干预组NR2B-EPSC以及NMDA-EPSC的幅值显着低于单纯OGD损伤组（n=5,##p<0.01）。（3）在体MCAO模型TTC染色结果:（GLYX-13+Ro256981）处理组与单纯GLYX-13干预组相比未能表现出额外的神经保护性效应（n=6,p>0.05）;而（GLYX-13+NVP-AAM077）处理组和（GLYX-13+D-serine）处理组分别与MCAO模型盐水对照组相比并未表现出神经保护性效应（n=6,p>0.05）。即NMDA受体甘氨酸位点全效激动剂以及NR2A亚基的特异性拮抗剂的应用均能够消除GLYX-13对缺血性神经元损伤的改善作用。这便进一步证实了GLYX-13是通过作用于NMDA受体的甘氨酸辅助激动位点调节NMDA受体的NR2亚基构成从而发挥对缺血性神经元损伤的保护性作用。结论:1、GLYX-13对MCAO模型小鼠具有神经保护性。2、GLYX-13通过对NMDA受体NR2亚基的差异性调节对脑缺血性神经元损伤发挥保护性作用。
蒋权[6]（2017）在《FKBP25蛋白生物功能解析及其在脑缺血损伤中的作用研究》文中提出研究背景:脑卒中在当今社会是影响人类健康的主要疾病之一,具有较高的发病率、致残率和死亡率。缺血性卒中占脑卒中60%～70%,但是临床上仍缺乏有效治疗缺血性卒中的药物和有效的药物靶标分子。缺血后脑组织通常会受到损伤,从而影响机体其它正常功能的发挥。神经血管单元作为一个由神经元、胶质细胞、血管组成的复杂有机体单位,在脑卒中发生过程中每个组成单位都存在内在关联性并发生不同程度的反应。而基于神经血管单元深入发掘脑缺血损伤过程中的分子事件,以期发现病理过程中特异性强、敏感度高的药物靶标分子,为脑缺血保护及防治等课题的开展提供基础。脯氨酸异构酶（Peptidyl-prolylcis-trans isomerase）FKBP3（又名 FKBP25）是FK506-binding proteins（FKBPs）家族的成员之一,含有 peptidylprolylcis/trans isomerase（PPlase）的活性结构域。脯氨酸是组成人体蛋白质20种基本氨基酸中唯一的亚氨基酸,同时为蛋白质构象中顺反异构的转换提供了可能。目前已知的脯氨酸异构酶在多种组织中都有表达,参与多条信号通路,尤其是在蛋白质折叠、受体信号传递、蛋白质转运以及转录等方面发挥着至关重要的作用,但是有关FKBP25蛋白是否参与脑缺血引起的神经血管单元损伤过程及其调控规律和相关细胞信号转导机制仍不清楚。研究目的:本研究课题以神经血管单元中脑微血管内皮细胞和神经元为主要切入点,深入探索FKBP25在脑缺血中脑微血管应激损伤病理分子事件中的变化规律。一、阐明脑微血管缺血损伤进程中相关细胞应激信号激活传导对FKBP25稳态失衡的生物学变化规律及分子机制,考证脑血管内皮细胞脯氨酸异构酶FKBP25是以何种调控模式参与脑缺血损伤中脑血管的病理进程;二、考察FKBP25通过脯氨酸异构催化作用对脑内神经元发挥何种神经药理学效应。三、基于FKBP25酶活性结构域特点,设计特异性的脯氨酸异构酶荧光分子探针,为进一步解析FKBP25功能提供可视化检测技术。本研究将为探索脑缺血中药物作用的新型蛋白质靶标分子提供新思路,为治疗以脑缺血病变为基础的脑系疾病提供实验依据。研究方法和结果:本研究基于前期蛋白质组学质谱分析脑血管内皮细胞损伤前后的差异性表达蛋白群,结果显示FKBP25可能是调控脑血管内皮细胞缺血性损伤的重要蛋白之一。首先,通过蛋白质免疫印迹、免疫荧光、转盘式共聚焦显微镜等分子生物学手段和成像方法在细胞水平考察脑血管内皮细胞缺血损伤后FKBP25及其它相关应激蛋白表达的变化规律,结果表明FKBP25在脑血管内皮细胞缺血损伤早期阶段快速被激活,同时在缺血相关联的硝化应激的刺激下发生入核现象。利用免疫共沉淀、质谱鉴定、荧光共振能量转移（FRET）等技术手段,发现60S ribosomal protein L7（RPL7）是与FKBP25发生相互作用的候选蛋白之一。在细胞和动物水平分别对FKBP25过表达后,从细胞凋亡率、PARP蛋白降解程度、动物神经功能障碍评分、血管紧密连接蛋白完整性等方面进行评价,结果表明FKBP25能改善脑缺血引起的损伤发挥保护作用。第二,体外构建并纯化重组蛋白FKBP25,离体电生理记录发现FKBP25能有效减小锥体神经元钙电流,而脯氨酸异构酶抑制剂Rapamycin能抑制FKBP25酶活性从而减弱对钙电流的影响,通过使用离子通道特异性的激动剂和抑制剂,表明FKBP25可能参与调控L型钙离子通道的开放和关闭。第三,对脯氨酸异构酶新型检测荧光探针进行评价,通过酶动力学曲线记录和活细胞成像等技术手段,证实荧光探针可快速、高效、准确的对脯氨酸异构酶进行响应。结论:我们发现脯氨酸异构酶FKBP25参与血管内皮细胞缺血损伤应激反应,调控FKBP25蛋白表达能减轻脑缺血引起的神经血管单元损伤,进一步分子机制研究发现硝化应激及缺血损伤可诱发FKBP25发生浆核穿梭现象,并与RPL7蛋白相互作用而行使其功能。此外,神经元中FKBP25基于自身脯氨酸异构活性区域影响细胞钙电流,从而调节神经元的生理状态。同时,我们发展合成了能快速响应脯氨酸异构酶的可视化荧光探针（PPI-CT6）,为在病理过程中监测该类酶活动提供新方法。
马佳[7]（2017）在《不同时期蛛网膜下腔出血时活体脑片钙离子的变化》文中认为蛛网膜下腔出血（Subarachnoid hemorrhage）在临床上主要是因颅内病变血管破裂,大量血液进入蛛网膜下腔引起脑组织受损的临床综合征。脑血管痉挛（Cerebral vasospasm,CVS）是SAH后一系列并发症之一,发作常见且后果严重。CVS根据发作时间可分为早发性和迟发性。早发性CVS,是指在SAH后3天内发作的脑血管痉挛。然而,这种CVS发作时间较短,且带来的脑损伤是可逆转的,故在临床中不容易发现。迟发性脑血管痉挛（Delayed cerebral vasospasm,DCVS）相比则更严重,其发作时间在72h后,它造成的脑损伤是难以逆转的,损伤更严重,致死致残率更高。若是想降低SAH后的致死致残率,最重要的是将SAH后的CVS控制在早期的可逆性损伤,防止其进一步发展为不可逆的DCVS。钙离子作为细胞内重要的第二信使,广泛而精细的调节着神经细胞间和细胞内部的信号传导。SAH后血管壁细胞内外钙离子浓度存在变化,这表明了在SAH后钙离子动态平衡出现了紊乱。SAH后具体的离子失衡机制尚不十分明确,然而许多因素,例如炎性因子的激活,自由基的活化和缺氧诱导等已被证明在SAH后可改变钙通道的表达,引起胞内钙失衡。目的:通过线栓穿刺法建立大鼠蛛网膜下腔出血模型,结合双光子显微镜活体成像技术和Fluo 4-AM钙离子染色剂,在显示器上动态观察造模大鼠神经细胞内钙离子荧光强度变化。双光子显微镜下荧光信号的强弱即反映了钙离子失衡的程度。通过研究钙离子失衡曲线,解释临床SAH后CVS双向性的某些机制,为临床不同时期应用钙离子拮抗剂提供理论指导。方法:1健康的育龄3-6个月50只SD雄性大鼠,体重控制在270-330g。将50只大鼠随机分组,正常组大鼠共5只,假手术组大鼠共5只,手术造模组大鼠共40只,按造模后开颅顺序依次分为术后3h、6h、12h、24h、48h、72h、5d、7d组共8组,每组大鼠共5只。手术组行经颈内动脉血管内穿刺法制作蛛网膜下腔出血模型,空白对照组不进行任何处理,假手术组不刺破大脑中动脉与前动脉分叉处直接拔出,剩余操作同手术组。2大鼠清醒后于术后24h进行神经功能学评分,评分标准为Garcia法。记录大鼠评分表现并进行统计学分析。3神经学评分完毕后快速断头取脑,对各组鼠脑进行大体组织形态学观察。拍照后保持脑组织活性连续震荡切片,切片完毕后用Fluo 4-AM进行荧光染色。将染色过的脑片完整置入TPLSM的物镜下观测槽内,拍照并记录不同组脑片同一部位的钙离子分布情况差异,并用相关软件（LAS AF Lite）分析相对荧光强度。4统计各组数据,数据分析使用SPSS 21.0软件。各组数据平均值以均数±标准差表示,同一脑区不同时间点比较及同一时间点不同脑区比较均采用单因素方差分析（ANOVA）进行数据检验,各组间互相比较采用SNK-T检验;检验水准P<0.05时,存在统计学差异。结果:1大鼠蛛网膜下腔出血术后神经学评分手术组大鼠出现一系列阳性表现。假手术组上述表现均为阴性。且存在统计学差异。2各组脑组织出血大体观察正常组及假手术组:未见蛛网膜下腔出血,大脑半球无水肿。术后3h:蛛网膜下腔弥漫出血,色鲜红,量较大,大脑无水肿。术后6h:蛛网膜下腔弥漫出血,出血范围较前增大,色鲜红,大脑无水肿。术后12h:蛛网膜下腔弥漫出血,出血范围较前增大,色较前暗红,术侧大脑半球可见水肿。术后24h:蛛网膜下腔弥漫出血,出血范围较前无明显变化,色较前暗红,术侧大脑半球可见水肿。术后48h:蛛网膜下腔的血液凝结成块,成暗红色,压迫脑干,术侧大脑半球可见水肿。术后72h:蛛网膜下腔出血较前减少,偶见血凝块,术侧大脑半球可见水肿。术后5d组:蛛网膜下腔出血基本吸收完毕,偶见Willis环有少量暗红色血块包裹。术后7d组:蛛网膜下腔血液基本消失。3钙离子在大鼠各脑区中分布的变化统计学分析3h组:皮质的[Ca2+]i显着高于皮质下和髓质,存在统计学差别（P<0.05）。6h组:皮质的[Ca2+]i明显高于皮质下和髓质,存在统计学差别（P<0.05）。12h组:皮质[Ca2+]i>皮质下[Ca2+]i>髓质[Ca2+]i,存在统计学差别（P<0.05）。24h组:皮质[Ca2+]i>皮质下[Ca2+]i>髓质[Ca2+]i,存在统计学差别（P<0.05）。48h组:皮质下[Ca2+]i>皮质[Ca2+]i>髓质[Ca2+]i,存在统计学差别（P<0.05）。72h组:皮质下[Ca2+]i>皮质[Ca2+]i>髓质[Ca2+]i,存在统计学差别（P<0.05）。5d组:皮质下[Ca2+]i>皮质[Ca2+]i>髓质[Ca2+]i,存在统计学差别（P<0.05）。7d组:皮质下[Ca2+]i高于皮质和髓质,存在统计学差别（P<0.05）。结论:1本实验采用了大鼠经颈内动脉血管内插线模型,此方法手术操作创伤小,可重复性好,较为完美的模拟了临床上前交通动脉瘤破裂导致的蛛网膜下腔出血,是目前SAH造模的首选方法。2 SAH后CVS主要分两个阶段,SAH早期CVS在出血后15min-3h内即可发生,主要因致痉因子、炎性因子等导致血管平滑肌持续性痉挛,而DCVS多在SAH后48-72h开始发生,主要因长期缺氧导致细胞程序性死亡导致。双光子荧光显微镜下皮质钙离子在CVS急性期荧光强度持续性上升,直至72h最高峰,之后荧光强度开始下降。本实验大鼠脑内钙离子超载的双向性与临床CVS双向性基本一致。3 SAH后皮质钙离子荧光强度在各时间点均高于髓质,且具有统计学意义。这是因为皮质神经细胞上T型钙通道高表达,在静息电位即可触发钙通道内流。皮质上还存在扩散性的皮质去极化抑制。
赵金生[8]（2015）在《活血开窍颗粒对脑梗死临床疗效及脑保护作用机制研究》文中研究指明目的:1.研究活血开窍颗粒治疗脑梗死急性期患者的临床疗效及安全性,为活血开窍颗粒的推广应用提供临床依据。2.制备大鼠大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型。研究活血开窍颗粒不同剂量对MCAO模型大鼠的脑梗死体积、神经功能改善程度及脑组织病理学变化的影响。确立活血开窍颗粒疗效及安全性最佳的剂量,为后续实验研究奠定基础。3.探讨活血开窍颗粒发挥其临床疗效可能存在的神经保护作用机制,研究活血开窍颗粒对MCAO模型大鼠造模后不同时间点（2h、24h、48h）脑梗死区单磷酸腺苷激活的蛋白激酶（adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK）的表达情况、脑源性神经营养因子（brain derived neurophic factor,BDNF）含量以及星形胶质细胞（Astrocytes,AS）增殖情况的影响。材料与方法:1.在天津市南开医院中西医结合脑病科开展活血开窍颗粒对脑梗死急性期患者临床疗效的临床随机对照试验（randomized controlled trial,RCT）,将符合纳排标准的患者随机分为治疗组和对照组各40人,治疗组为活血开窍颗粒联合常规药物治疗组,对照组为常规药物治疗组,疗程为14d。治疗前后分别对患者神经功能缺损、日常生活能力、脑梗死体积、脑血流量及血流变学进行测定,比较治疗前后两组各指标的差异。2.采用Zea-Longa经典线栓法建立大鼠MCAO模型,将大鼠随机分为6组:活血开窍颗粒高、中、低剂量组,尼莫地平阳性药物对照组,MCAO模型对照组及假手术（Sham）组。采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑（2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride,TTC）染色法测定脑梗死体积并验证MCAO造模的稳定性,苏木-伊红染色法（Hematoxylin-eosin staining,HE）观察各组脑组织病理学改变,并观察各组大鼠不同时间段（6h,24h,48h）神经肌肉功能学评分。3.Zea-Longa法建立大鼠MCAO模型,将SD大鼠随机分为4组:活血开窍颗粒高剂量组、尼莫地平阳性药物对照组、MCAO模型组及Sham组。治疗组及阳性药物对照组大鼠于造模前3d分别用药物灌胃预处理,大鼠造模后分三个不同时间点2h、24h、48h分别取材后,采用Western Blot和RT-PCR法测定缺血区脑组织匀浆AMPK和p AMPK的表达情况;免疫组化染色法测定大鼠缺血区海马部位脑组织BDNF、GFAP及缝隙连接蛋白（connexin,Cx）含量的变化,从而探讨活血开窍颗粒发挥其临床疗效可能存在的神经保护作用机制。结果:1.与对照组相比,活血开窍颗粒组患者治疗前后NIHSS评分、日常生活能力评分差异有统计学意义（P<0.05）;治疗后两组患者脑梗死体积均有一定程度的缩小,小面积脑梗死（Cerebral infarction,CI）患者治疗组与对照组相比,梗死体积差异具有统计学意义（P<0.05）;而在中面积CI与大面积CI亚组中,两组患者治疗前后差异虽无统计学意义,但活血开窍颗粒仍有降低脑梗死体积的趋势;治疗前后大脑前动脉及大脑中动脉血流量参数差绝对值差异具有统计学意义（P<0.05）;治疗组全血粘度高切指数及血浆粘度与对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）,其余指标差异无统计学意义。2.成功制备Zea-Longa的经典线栓法MCAO大鼠模型,且模型制备稳定性较高;与MCAO模型对照组相比,活血开窍颗粒各剂量组在造模后的24h和48h均能降低脑缺血大鼠神经功能评分及脑梗死比例（P<0.01）;脑组织病理染色示各剂量组与模型对照组比较,坏死神经细胞减少,锥体细胞形态结构趋于正常,水肿较轻,细胞核较规则,尤以活血开窍颗粒35.2g生药/kg（高剂量组）更为明显。3.活血开窍颗粒组及尼莫地平阳性药物对照组大鼠缺血区脑组织匀浆中AMPK及p AMPK表达量较MCAO模型对照组明显降低,模型对照组在造模后2h、24h至48h三个时间点脑组织匀浆中AMPK及p AMPK的表达量均呈现逐渐增多的趋势;而活血开窍颗粒组大鼠脑组织AMPK在造模后24h内达到高峰,之后表达量逐渐减少;而p AMPK在活血开窍颗粒组中则表现出逐渐降低的趋势;免疫组化可见活血开窍颗粒组大鼠缺血区海马部位BDNF含量较MCAO模型对照组明显增多,且随着时间的推移,BDNF含量呈逐渐增多的趋势;同时,活血开窍颗粒还可抑制AS的过度增殖,在各时间点活血开窍颗粒组AS含量较MCAO模型对照组均减少,且随着造模后时间的推移,AS的含量呈现逐渐递减的趋势;并且,活血开窍颗粒还可抑制Cx43的过度表达,造模后各个时间点较MCAO模型对照组Cx43含量均降低,且随时间的推移,Cx43表达量逐渐增多。
申林娜,王家平,朱榆红[9]（2011）在《胸主动脉夹层动脉瘤的神经系统并发症及处理》文中认为胸主动脉夹层动脉瘤是一类起病急、病死率高的极其凶险和危重的疾病。由于胸主动脉夹层的神经系统并发症较常见,甚至以首发症状为临床表现者也较多。因此,为了提高对胸主动脉夹层的认识和识别,避免误诊所造成灾难性后果的同时积极治疗胸主动脉夹层。胸主动脉夹层腔内隔绝术的神经系统并发症（如截瘫、脑卒中）也较常见。本文将对胸主动脉夹层合并的神经系统表现、症状和腔内隔绝术治疗胸主动脉夹层围手术期所出现的神经系统并发症的临床表现、预防措施及处理方法进行阐述。
盛艳梅[10]（2010）在《基于“钙信号通路—血脑屏障”偶联的中药脑神经保护有效组分筛选方法研究》文中指出目的：选择临床抗脑缺血损伤疗效确切的中药（灯盏细辛、川芎、石菖蒲）,研究其化学组分的脑神经保护作用、钙信号通路调节作用以及透血脑屏障能力,揭示三者的关联性,探讨建立基于“钙信号通路-血脑屏障”偶联的中药脑神经保护有效组分筛选新方法的可行性。方法：1.采用MTT法测量药物对原代培养的大鼠大脑皮层神经细胞存活率的影响,筛选脑神经保护活性组分；2.采用激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）技术检测活性组分对谷氨酸、KC1致体外培养的皮层神经细胞内钙荧光强度变化的影响,筛选出具有钙信号通路调节作用的活性组分；3.采用大鼠脑微血管内皮细胞、星型胶质细胞共培养技术,建立血脑屏障体外模型,结合HPLC技术检测活性组分的透血脑屏障程度；4.采用线栓法阻塞大脑中动脉（MCA）复制大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,进行整体动物的药效学验证。以行为观察、脑梗死比率、血清中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、一氧化氮合酶（N0S）等为指标,评价活性组分对脑缺血的保护作用。结果：1.灯盏细辛注射液、灯盏乙素、咖啡酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、川芎挥发油、川芎嗪、阿魏酸、石菖蒲挥发油、α-细辛醚等在一定剂量范围内都能不同程度促进体外培养的皮层神经细胞存活。2.灯盏细辛注射液、3,5-二咖啡酰奎宁酸、川芎挥发油、川芎嗪、阿魏酸以及石菖蒲挥发油等都能抑制谷氨酸、KCl引起的神经细胞内钙超载。灯盏乙素、α-细辛醚只对谷氨酸引起的细胞内钙超载有抑制作用。3.灯盏细辛注射液、3,5-二咖啡酰奎宁酸、川芎挥发油、川芎嗪、石菖蒲挥发油、α-细辛醚均可透过BBBM,灯盏乙素不能透过BBBM。其结构修饰物灯盏乙素乙酯能透血脑屏障,且具有脑神经保护作用和钙信号通路调节作用。4.研究表明3,5-二咖啡酰奎宁酸、川芎挥发油可通过增加模型大鼠SOD、GSH-Px、NOS活性,降低MDA含量,发挥脑缺血保护作用。5.综合分析表明,灯盏细辛注射液、3,5-二咖啡酰奎宁酸、川芎挥发油、川芎嗪、石菖蒲挥发油、α-细辛醚等样品的钙信号通路调节作用与其脑神经保护作用密切相关,且透血脑屏障能力是影响其发挥抗脑缺血损伤作用的关键因素。结论：本研究结果提示药物的钙信号通路调节作用、透血脑屏障能力及脑神经保护作用与其抗脑缺血损伤作用之间存在很好的关联性,建立基于“钙信号通路-血脑屏障”偶联的中药脑神经保护有效组分筛选新方法具有可行性,为治疗脑缺血创新药物的研制提供了新思路。
二、猪活体脑片钙离子荧光强度的测定及对停循环后脑缺血损伤的评价（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、猪活体脑片钙离子荧光强度的测定及对停循环后脑缺血损伤的评价（论文提纲范文）
（1）针刺抑制GFAP、AQP-4表达以提高脑梗死溶栓安全性的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1. 祖国医学对中风病的认识 |
| 1.1 中风病的病名沿革 |
| 1.2 中风病的病因病机 |
| 1.3 中风病的治疗方法 |
| 1.3.1 中药治疗 |
| 1.3.2 针灸治疗 |
| 2. 现代医学对脑梗死的认识 |
| 2.1 流行病学 |
| 2.2 危险因素 |
| 2.3 发病机制 |
| 2.4 治疗方法 |
| 2.4.1 他汀类药物 |
| 2.4.2 神经保护剂 |
| 2.4.3 溶栓及血管内介入治疗 |
| 3. 本研究科学假说提出的理论依据 |
| 3.1 溶栓治疗的优势及时间窗的局限性 |
| 3.2 BBB损伤是脑梗死溶栓并发症的病理基础 |
| 3.2.1 BBB结构及功能 |
| 3.2.2 BBB损伤机制及溶栓并发症 |
| 3.3 抑制星形胶质细胞活化是减少脑梗死溶栓后BBB损伤的关键靶点 |
| 3.3.1 星形胶质细胞结构及功能 |
| 3.3.2 星形胶质细胞活化及BBB损伤 |
| 3.3.3 GFAP、AQP-4与星形胶质细胞密切相关 |
| 3.4 “针刺抑制星形胶质细胞活化提高脑梗死溶栓安全性”科学假说的提出 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 针刺提高脑梗死溶栓安全性的效应研究 |
| 1. 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要仪器和设备 |
| 1.3 主要试剂 |
| 2. 方法 |
| 2.1 动物分组 |
| 2.2 模型制备 |
| 2.3 激光多普勒血流仪检测脑血流量 |
| 2.4 神经行为学评分方法 |
| 2.5 溶栓及针刺干预方法 |
| 2.6 脑梗死体积百分比的测定方法 |
| 2.7 BBB通透性的测定方法 |
| 2.8 脑含水量的测定方法 |
| 2.9 统计学处理 |
| 3. 结果 |
| 3.1 模型制备过程中脑血流变化 |
| 3.2 各组大鼠神经行为学评分比较 |
| 3.3 各组大鼠脑梗死体积百分比比较 |
| 3.4 各组大鼠BBB通透性比较 |
| 3.5 各组大鼠脑含水量比较 |
| 实验二 针刺提高脑梗死溶栓安全性的机制研究 |
| 1. 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要仪器和设备 |
| 1.3 主要试剂 |
| 2. 方法 |
| 2.1 动物分组 |
| 2.2 模型制备 |
| 2.3 激光多普勒血流仪检测脑血流量 |
| 2.4 神经行为学评分方法 |
| 2.5 溶栓及针刺干预方法 |
| 2.6 样本的获取与保存 |
| 2.7 Real-time PCR检测mRNA表达 |
| 2.8 Western Blot检测蛋白表达 |
| 2.9 统计学处理 |
| 3. 结果 |
| 3.1 各组大鼠GFAP的mRNA表达 |
| 3.2 各组大鼠AQP-4的mRNA表达 |
| 3.3 各组大鼠GFAP的蛋白表达 |
| 3.4 各组大鼠AQP-4的蛋白表达 |
| 第三部分 讨论 |
| 1. 自体血栓栓塞性模型的选择及评价 |
| 1.1 实验动物的选择 |
| 1.2 脑梗死模型的选择与评价 |
| 2. 干预方法的选择 |
| 2.1 针刺方法的选择 |
| 2.2 溶栓药物的选择 |
| 3. 星形胶质细胞相关指标的选择 |
| 4. 针刺提高脑梗死溶栓安全性的效应分析 |
| 5. 针刺抑制星形胶质细胞活化提高脑梗死溶栓安全性的机制探讨 |
| 第四部分 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
（2）小胶质细胞在系统性红斑狼疮自身抗体诱导的脑认知障碍中的作用及机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器及耗材 |
| 2.2 实验材料和方法 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 血清收集和Anti-P IgG的纯化 |
| 2.2.3 小鼠侧脑室套管植入及微量注射 |
| 2.2.4 米诺环素给药处理 |
| 2.2.5 小鼠脑血管活体显微成像 |
| 2.2.6 小鼠听皮层电极植入手术过程 |
| 2.2.7 电生理记录和声音刺激 |
| 2.2.8 BBB开放,Anti-P IgG注射及脑电图记录 |
| 2.2.9 电生理数据采集与分析 |
| 2.2.10 建立小胶质细胞消除模型 |
| 2.2.11 小鼠腹侧海马套管植入手术 |
| 2.2.12 海马vCA1区局部微量注射 |
| 2.2.13 Rapa给药处理 |
| 2.2.14 行为测试 |
| 2.2.15 脑组织取材及切片制作 |
| 2.2.16 免疫荧光染色 |
| 2.2.17 实时荧光定量PCR检测脑组织内细胞因子表达水平 |
| 2.2.18 数据分析 |
| 实验一 :侧脑室注射SLE血清对小鼠脑小胶质细胞及微血管内白细胞活动的影响 |
| 3 结果 |
| 3.1 ICV注射SLE血清后激活小胶质细胞 |
| 3.2 SLE血清触发白细胞向CNS募集 |
| 3.3 SLE血清注射导致脑微血管内皮细胞活化 |
| 3.4 SLE血清诱导脑组织内炎症因子和趋化因子水平升高 |
| 3.5 米诺环素治疗缓解了SLE血清诱导的小胶质细胞活化及炎症反应 |
| 实验二 :SLE患者Anti-P IgG对大脑听觉稳态反应的损害及小胶质细胞的保护作用 |
| 4 结果 |
| 4.1 Anti-P IgG造成ASSR反应一过性增强 |
| 4.2 Anti-P IgG激活小胶质细胞 |
| 4.3 当小胶质细胞缺失时Anti-P IgG造成ASSR不可逆损害 |
| 4.4 小胶质细胞缺失后Anti-P IgG导致神经元数量减少 |
| 实验三 :Anti-P IgG对腹侧海马CA1 区介导的社会认知功能的影响 |
| 5 结果 |
| 5.1 Anti-P IgG损害小鼠社会认知记忆能力 |
| 5.2 Anti-P IgG对嗅觉和运动功能无显着影响 |
| 5.3 Anti-P IgG导致海马神经元数量减少及胶质细胞活化 |
| 5.4 Anti-P IgG增加促炎细胞因子的产生 |
| 5.5 Rapa缓解Anti-P IgG导致的社交认知记忆障碍 |
| 5.6 Rapa缓解Anti-P IgG导致的神经数量减少及胶质细胞活化 |
| 5.7 Rapa抑制Anti-P IgG诱导的促炎细胞因子产生 |
| 6 讨论 |
| 6.1 SLE患者血清诱导的小胶质细胞活化及微血管内白细胞响应 |
| 6.2 ASSR与 Anti-P IgG诱导的神经电生理活动异常 |
| 6.3 小胶质细胞对Anti-P IgG诱导的神经损伤的保护作用 |
| 6.4 Anti-P IgG与社会认知功能障碍 |
| 6.5 Rapa对 Anti-P IgG诱导的脑功能障碍的防治作用 |
| 7 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）基于PET分子影像的普鲁士蓝纳米酶治疗脑缺血的基础研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩写词表 |
| 第一部分 HPBZs合成、表征以及性能检测 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 HPBZs的合成 |
| 3.2 HPBZs的合成机制 |
| 3.3 HPBZs的表征 |
| 3.4 HPBZs多酶样活性和清除RONS性能 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二部分 HPBZs发挥细胞保护作用的体外细胞实验研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 HPBZs细胞毒性检测 |
| 3.2 HPBZs保护体外氧化应激损伤细胞效应 |
| 3.3 HPBZs体外保护缺氧受损神经元效应 |
| 3.4 HPBZs体外抗细胞凋亡效应 |
| 3.5 HPBZs体外抗炎症效应 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三部分 HPBZs发挥神经保护作用的动物实验研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 HPBZs在体神经保护作用 |
| 3.2 HPBZs体内抗细胞凋亡效应 |
| 3.3 HPBZs体内抗炎效应 |
| 3.4 HPBZs治疗时间窗 |
| 3.5 HPBZs体内生物安全性初步研究 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 总结 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 作者简历 |
（4）皮层扩散性抑制影响双侧皮层感觉响应的光学成像研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 皮层扩散性抑制现象概述 |
| 1.2 皮层扩散性抑制的研究意义 |
| 1.3 皮层扩散性抑制的研究现状 |
| 1.4 皮层扩散性抑制的光学成像方法 |
| 1.5 本文主要研究内容 |
| 2 皮层扩散性抑制的多模式光学成像及荧光校正方法 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 荧光校正理论模型与方法 |
| 2.3 多模式光学成像系统设计方案 |
| 2.4 材料与方法 |
| 2.5 实验结果 |
| 2.6 讨论 |
| 2.7 本章小结 |
| 3 正常状态下双侧皮层感觉响应的宽场荧光成像 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 本章小结 |
| 4 皮层扩散性抑制后双侧皮层感觉响应的宽场荧光成像 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 本章小结 |
| 5 总结与展望 |
| 5.1 本文主要内容和结论 |
| 5.2 本文的主要创新 |
| 5.3 研究展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 攻读博士学位期间发表论文目录 |
（5）GLYX-13对脑缺血性神经元损伤保护性机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 研究背景及研究现状 |
| 1.1.1 缺血性神经元损伤发生机制的研究现状 |
| 1.1.2 以NMDA受体及其亚基为靶点的脑卒中治疗药物研究现状 |
| 1.1.3 甘氨酸位点部分激活剂GLYX-13的潜在神经保护性效应 |
| 1.2 研究目的及其意义 |
| 1.3 论文研究的主要内容 |
| 第二章 GLYX-13对脑缺血性神经元损伤的保护性作用 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 对象和方法 |
| 2.2.1 实验动物及分组 |
| 2.2.2 主要仪器设备及耗材 |
| 2.2.3 实验药品及试剂 |
| 2.2.4 主要溶液及缓冲液的配制 |
| 2.2.5 实验方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 GLYX-13改善了小鼠在缺血再灌注24h的神经功能评分 |
| 2.3.2 GLYX-13减少了小鼠脑缺血再灌注24h后的脑梗塞体积 |
| 2.3.3 GLYX-13减轻了小鼠缺血再灌注24h后患侧海马神经元的损伤 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 在体脑缺血动物模型的选取 |
| 2.4.2 气体麻醉剂异氟烷对MCAO小鼠模型的影响 |
| 2.4.3 NMDA受体阻滞剂临床应用的局限性 |
| 2.4.4 NMDA受体调节剂GLYX-13的潜在神经保护性 |
| 2.4.5 GLYX-13对海马不同脑区神经元保护性的差异 |
| 2.5 本章小结 |
| 2.5.1 GLYX-13改善了小鼠脑缺血再灌注24h后的神经功能 |
| 2.5.2 GLYX-13减少了小鼠脑缺血再灌注24h后的脑梗塞体积 |
| 2.5.3 GLYX-13减轻了小鼠脑缺血再灌注24h后患侧海马神经元的损伤 |
| 第三章 GLYX-13对脑缺血性神经元损伤的保护性机制研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 对象和方法 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 主要仪器设备及耗材 |
| 3.2.3 实验药品及试剂 |
| 3.2.4 主要溶液及缓冲液的配制 |
| 3.2.5 实验方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 在体MCAO模型小鼠脑组织中NMDA受体NR2亚基表达的Westernblot实验结果 |
| 3.3.2 离体OGD模型电生理脑片全细胞膜片钳记录实验结果 |
| 3.3.3 GLYX-13对在体MCAO模型小鼠通过提高NR2A的亚基组份并且降低NR2B 的亚基组份从而发挥神经保护性作用 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 离体脑片氧葡萄糖剥夺模型的研究意义 |
| 3.4.2 膜片钳技术是研究药物对离子通道作用机制的核心技术 |
| 3.4.3 NR2A亚基的促神经元存活作用以及NR2B亚基的促神经元死亡效应 |
| 3.4.4 GLYX-13的药物安全性 |
| 3.4.5 GLYX-13对脑缺血性疾病的神经保护性分子机制 |
| 3.5 本章小结 |
| 3.5.1 GLYX-13下调MCAO小鼠再灌注4h后p-NR2B（Tyr1472）表达的同时上调 p-NR2A（Tyr1325）的表达 |
| 3.5.2 GLYX-13减少了缺血再灌注24h后NR2A亚基的丢失 |
| 3.5.3 GLYX-13通过结合NMDA受体的甘氨酸辅助激动位点抑制病理性的突触可塑性增强 |
| 3.5.4 GLYX-13参与调节脑组织能量剥夺条件下NMDA受体NR2亚基的组成 |
| 3.5.5 GLYX-13对在体MCAO模型小鼠通过提高NR2A的亚基组份并且降低NR2B的亚基组份从而发挥神经保护性作用 |
| 第四章 总结与展望 |
| 4.1 主要研究工作总结 |
| 4.2 论文创新点 |
| 4.3 研究工作展望 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 缺血性神经元损伤分子机制及其药物干预研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）FKBP25蛋白生物功能解析及其在脑缺血损伤中的作用研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 前言 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 1 脑血管内皮细胞缺血损伤后脯氨酸异构酶FKBP25变化规律研究 |
| 1.1 实验材料与试剂 |
| 1.1.1 细胞株 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 实验仪器 |
| 1.1.4 溶液配制 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 细胞培养 |
| 1.2.2 构建诱导血管内皮细胞损伤缺糖缺氧(Oxygen glucosedeprivation, OGD)模型 |
| 1.2.3 细胞总蛋白提取和定量 |
| 1.2.4 细胞核蛋白提取 |
| 1.2.5 蛋白质免疫印迹 |
| 1.2.6 细胞免疫荧光 |
| 1.2.7 Time-lapse记录细胞反应 |
| 1.2.8 免疫共沉淀 |
| 1.2.9 Trizol法提取RNA |
| 1.2.10 RNA逆转录 |
| 1.2.11 质粒构建 |
| 1.2.12 慢病毒构建及包装 |
| 1.2.13 统计学分析 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 脑血管内皮细胞缺氧低糖损伤过程中脯氨酸异构酶FKBP25的变化规律 |
| 1.3.2 硝化应激信号诱导脑血管内皮细胞FKBP25发生核转移 |
| 1.3.3 FKBP25蛋白N段1-108氨基酸序列影响其在细胞中的定 |
| 1.3.4 与FKBP25相互作用的蛋白的发现及确认 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 2 FKBP25调控可干预脑缺血引起的神经血管单元损伤 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 细胞培养 |
| 2.1.2 主要实验试剂 |
| 2.1.3 实验仪器 |
| 2.1.4 慢病毒构建 |
| 2.1.5 实验动物 |
| 2.1.6 溶液配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 流式细胞仪检测细胞凋亡 |
| 2.2.2 小鼠脑室慢病毒注射 |
| 2.2.3 小鼠大脑中动脉缺血/再灌注模型(transient middle cerebral arteryocclusion, tMCAO) |
| 2.2.4 小鼠神经功能障碍评分 |
| 2.2.5 脑组织免疫荧光 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 FKBP25过表达可改善OGD引起的血管内皮细胞凋亡 |
| 2.3.2 慢病毒过表达FKBP25对缺血性脑损伤的保护作用研究 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 3 FKBP25对脑内神经元钙通道电流的作用 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 实验仪器 |
| 3.1.4 溶液配制 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 急性脑片的准备 |
| 3.2.2 电生理记录 |
| 3.2.3 数据统计与分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 脯氨酸异构酶FKBP25重组蛋白抑制神经元钙通道电流 |
| 3.3.2 FKBP25对神经元钙通道电流的抑制作用主要由L-型钙通道介导 |
| 3.3.3 FKBP25蛋白截断体106-224氨基酸序列决定其在神经元中的作用 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 4 对脯氨酸异构酶实现快速可视化的荧光探针研究 |
| 4.1 实验材料与试剂 |
| 4.1.1 细胞株 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 实验仪器 |
| 4.1.4 溶液配制 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 大肠杆菌蛋白裂解 |
| 4.2.2 细胞裂解液 |
| 4.2.3 考马斯亮蓝凝胶染色 |
| 4.2.4 双酶偶联法检测脯氨酸异构酶活性 |
| 4.2.5 荧光探针测定脯氨酸异构酶活性 |
| 4.2.6 Time-lapse记录细胞荧光值变化 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 双酶偶联法体外检测脯氨酸异构酶FKBP25活性 |
| 4.3.2 荧光探针的设计理念及基本特性 |
| 4.3.3 小分子荧光探针对脯氨酸异构酶重组蛋白和细胞蛋白裂解液的反应敏感性 |
| 4.3.4 脯氨酸异构酶荧光探针的特异性研究 |
| 4.3.5 活细胞中荧光探针对脯氨酸异构酶的荧光响应变化 |
| 4.3.6 荧光探针对血管内皮细胞FKBP25过表达的荧光反应 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 作者简历及在读期间所取得的科研成果 |
（7）不同时期蛛网膜下腔出血时活体脑片钙离子的变化（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 钙离子在蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛中机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）活血开窍颗粒对脑梗死临床疗效及脑保护作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、活血开窍颗粒对脑梗死急性期患者临床疗效及安全性的研究 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 一般资料 |
| 1.1.2 试验方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 纳入患者基线比较 |
| 1.2.2 治疗前后神经功能评分比较 |
| 1.2.3 治疗前后日常生活能力评分比较 |
| 1.2.4 治疗前后脑梗死体积的比较 |
| 1.2.5 治疗前后脑血流量改善的比较 |
| 1.2.6 治疗前后血流变学指数的比较 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 中医对中风病病因病机的认识 |
| 1.3.2 活血开窍颗粒方药组方及药理研究 |
| 1.3.3 活血开窍颗粒的疗效分析 |
| 1.3.4 随机对照试验质量分析 |
| 1.4 小结 |
| 1.5 结论 |
| 二、活血开窍颗粒不同剂量对MCAO模型大鼠神经功能、脑梗死比例及脑组织病理形态学的影响 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验对象及材料 |
| 2.1.2 实验方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 MCAO模型制备情况 |
| 2.2.2 活血开窍颗粒不同剂量对大鼠神经功能的影响 |
| 2.2.3 活血开窍颗粒不同剂量对大鼠脑梗死比例的影响 |
| 2.2.4 各组大鼠脑组织病理形态学测定结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 Zea-Longa线栓法制备MCAO模型大鼠的稳定性 |
| 2.3.2 选取尼莫地平作为阳性药物对照组的原因 |
| 2.3.3 活血开窍颗粒对MCAO大鼠脑梗死体积及组织病理的影响 |
| 2.4 小结 |
| 2.5 结论 |
| 三、活血开窍颗粒对MCAO模型大鼠脑保护作用机制的探讨 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 实验对象及材料 |
| 3.1.2 实验方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 活血开窍颗粒对大鼠脑组织AMPK及 pAMPK表达的影响 |
| 3.2.2 活血开窍颗粒对大鼠脑组织BDNF含量的影响 |
| 3.2.3 活血开窍颗粒对大鼠脑组织AS含量的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 活血开窍颗粒对AMPK蛋白含量的影响 |
| 3.3.2 活血开窍颗粒对BDNF的影响 |
| 3.3.3 活血开窍颗粒对AS的影响 |
| 3.3.4 活血开窍颗粒对Cx43表达的影响 |
| 3.4 小结 |
| 3.5 结论 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 附录 |
| 综述:能量代谢关键调节因子AMPK在脑梗死中的作用 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
（9）胸主动脉夹层动脉瘤的神经系统并发症及处理（论文提纲范文）
| 1 TAD的病因和病理 |
| 1.1 常见相关因素 |
| 1.2 基本病理变化 |
| 2 TAD的分型与分期 |
| 3 TAD的神经系统症状 |
| 3.1 TAD累及大脑的临床表现 |
| 3.2 TAD累及脊髓的临床表现 |
| 3.3 TAD累及周围神经的临床表现 |
| 4 胸主动脉夹层EVGE的神经系统并发症的预防措施及处理方法 |
| 4.1 EVGE的主要神经系统并发症——截瘫 |
| 4.1.1 预防措施: |
| 4.1.2 处理方法: |
| 4.2 EVGE的主要神经系统并发症——缺血性脑卒中[19] |
| 4.2.1 预防措施: |
| 4.2.2 处理方法: |
| 4.3 EVGE的其他神经系统并发症 |
| 5 展望 |
（10）基于“钙信号通路—血脑屏障”偶联的中药脑神经保护有效组分筛选方法研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写词对照表 |
| 引言 |
| 第一章 脑神经保护活性组分筛选研究 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.4 小结与讨论 |
| 第二章 钙信号通路调节作用研究 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 主要溶液及其配制 |
| 2.2.2 建立大脑皮层神经细胞内钙超载损伤模型 |
| 2.2.3 药物对谷氨酸诱导的大脑皮层神经细胞内钙超载的影响 |
| 2.2.4 药物对KCl诱导的大脑皮层神经细胞内钙超载的影响 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 药物对谷氨酸诱导大脑皮层神经细胞内钙超载的影响 |
| 2.3.2 药物对KCl诱导的大脑皮层神经细胞内钙超载的影响 |
| 2.4 小结与讨论 |
| 第三章 透血脑屏障研究 |
| 3.1 材料 |
| 3.2 方法与结果 |
| 3.2.1 试剂配制 |
| 3.2.2 体外血脑屏障模型的建立 |
| 3.2.3 药物透血脑屏障试验研究 |
| 3.3 小结与讨论 |
| 第四章 灯盏乙素结构修饰物的相关研究 |
| 4.1 脑神经保护作用研究 |
| 4.1.1 方法与结果 |
| 4.2 透血脑屏障研究 |
| 4.2.1 方法与结果 |
| 4.3 钙信号通路调节作用研究 |
| 4.3.1 方法与结果 |
| 第五章 脑缺血整体动物模型的药效学验证研究 |
| 5.1 材料 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 线栓的制备 |
| 5.2.2 MCAO模型的制备 |
| 5.2.3 药物配制及给药方案 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.3.1 大鼠一般状态评分 |
| 5.3.2 大鼠神经功能缺失体征评分 |
| 5.3.3 大鼠脑梗死比率(TTC染色) |
| 5.3.4 大鼠血液生化指标 |
| 5.4 小结与讨论 |
| 第六章 研究结果的综合分析 |
| 6.1 钙信号调节与脑神经保护作用的相关性分析 |
| 6.2 透BBB能力与脑缺血保护作用的关联性分析 |
| 6.3 钙信号调节与脑缺血保护作用的相关性分析 |
| 结论 |
| 7.1 总结 |
| 7.2 创新点 |
| 7.3 不足与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 文献综述一 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 |
| 参考文献 |
| 公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
四、猪活体脑片钙离子荧光强度的测定及对停循环后脑缺血损伤的评价（论文参考文献）
- [1]针刺抑制GFAP、AQP-4表达以提高脑梗死溶栓安全性的实验研究[D]. 姜思媛. 南京中医药大学, 2021(01)
- [2]小胶质细胞在系统性红斑狼疮自身抗体诱导的脑认知障碍中的作用及机制的研究[D]. 王雪娇. 中国医科大学, 2020(01)
- [3]基于PET分子影像的普鲁士蓝纳米酶治疗脑缺血的基础研究[D]. 张凯. 浙江大学, 2019(03)
- [4]皮层扩散性抑制影响双侧皮层感觉响应的光学成像研究[D]. 黄钦. 华中科技大学, 2018(06)
- [5]GLYX-13对脑缺血性神经元损伤保护性机制的研究[D]. 郑晨. 天津医科大学, 2017(01)
- [6]FKBP25蛋白生物功能解析及其在脑缺血损伤中的作用研究[D]. 蒋权. 浙江大学, 2017(10)
- [7]不同时期蛛网膜下腔出血时活体脑片钙离子的变化[D]. 马佳. 河北医科大学, 2017(05)
- [8]活血开窍颗粒对脑梗死临床疗效及脑保护作用机制研究[D]. 赵金生. 天津医科大学, 2015(05)
- [9]胸主动脉夹层动脉瘤的神经系统并发症及处理[J]. 申林娜,王家平,朱榆红. 中国实用神经疾病杂志, 2011(03)
- [10]基于“钙信号通路—血脑屏障”偶联的中药脑神经保护有效组分筛选方法研究[D]. 盛艳梅. 成都中医药大学, 2010(12)