一、禽白血病病毒囊膜基因gp85片段的克隆与鉴定（论文文献综述）
高可丽[1]（2021）在《表达ALV-J Gp85蛋白的侵入型乳酸菌的构建及免疫保护效果评价》文中认为
王萌[2]（2021）在《一株E亚群禽白血病病毒的分离鉴定及致病性分析》文中研究说明
郭雨欣,游广炬,李晓齐,高丽,郑世军,王永强[3]（2021）在《2株J亚群禽白血病病毒毒株的分离鉴定及全基因组序列分析》文中指出为了解我国J亚群禽白血病病毒（ALV）的流行特点和进化趋势,本试验从河北某鸡场疑似禽白血病的临床发病鸡的病料组织中,分离得到2株ALV-J毒株,分别命名为CAU2019和CAU2020。通过聚合酶链式反应（PCR）技术分段扩增分离株的全病毒基因组,连接pEASY-Blunt Zero载体后进行序列测定,并对获得的基因组序列与ALV各亚群毒株序列进行序列比对及遗传进化分析。结果表明,2个分离株与ALV各亚群毒株的gag和pol段基因相对保守,而LTR、gp85及gp37段基因变异较大。此外,CAU2019在3′UTR处有2段长度为30 bp和11 bp的不连续的碱基缺失,CAU2020在3′UTR处有1段长度为29 bp的碱基缺失。由gp85和LTR基因构建的遗传进化树可知,2个分离株在遗传关系上与J亚群毒株JS16JH9亲缘关系最近。结果表明本试验分离的2株病毒均为J亚群禽白血病病毒毒株,并且为国内ALV-J流行株的突变株。
闫泽一[4]（2020）在《禽白血病病毒单克隆抗体识别抗原表位的鉴定与分析》文中研究说明禽白血病（Avian leukosis,AL）是由禽白血病病毒（Avian leukosis virus,ALV）引起的鸡的一种传染性肿瘤性疾病。它在全世界广泛存在,并引起鸡免疫抑制、肿瘤、生长发育迟缓和死亡,每年给家禽业造成巨大经济损失。迄今为止,尚无有效的疫苗或药物针对此病。ALV是一种逆转录病毒,根据致病性和抗体中和特性在鸡群中分为七个亚群（ALV-A/B/C/D/E/J/K）。虽然内源性的ALV-E不引起严重损害,因为其基因组已广泛插入宿主鸡的细胞基因组中,所以它会干扰外源ALV的测定。另外,由于外源ALV的高变异性以及新亚群、新毒株的不断出现,使得检测外源ALV变得越来越困难。目前缺乏针对ALV-A检测的单克隆抗体,而且对其抗原表位也了解甚少。本研究制备出针对ALV-A的单克隆抗体,并鉴定其抗原表位,为单抗的应用提供了科学依据,为建立ALV-A的检测方法提供了新生物材料。本研究首先利用设计的引物从ALV-A-SDAU09C1病毒的全基因组DNA中扩增gp85基因,将其插入pET-32a表达载体中,将构建好的重组质粒导入大肠杆菌中,诱导表达gp85蛋白,并进行纯化。选取健康的6周龄雌性Balb/c小鼠,用纯化的gp85蛋白进行免疫,三免后取小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,利用ELISA和IFA两种方法筛选出阳性的杂交瘤细胞,并克隆培养阳性杂交瘤细胞。对单克隆抗体进行ELISA效价测定、western blot鉴定。然后用同样的方法表达纯化了14段截短的重叠的gp85蛋白,利用western blot的方法,用完整的gp85蛋白作为阳性对照,鉴定抗体与gp85分段蛋白的反应性,确定抗原表位。再对初次筛选的抗原多肽截短合成,结合ELISA方法鉴定最佳线性表位。最后通过生物信息技术分析构象表位和特性,利用单抗介导的IFA分析单抗与不同亚群毒株的结合作用。结果显示,利用设计的引物成功扩增出1005 bp的gp85基因序列,在大肠杆菌中诱导表达的gp85融合蛋白大小为46 KD。利用免疫获得的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合后成功筛选出一株阳性杂交瘤细胞,命名为A18GH。给小鼠腹腔注射阳性杂交瘤细胞以使其产生腹水。通过抗体纯化柱将腹水纯化,其SDS-PAGE电泳结果显示纯度较高,并测得其抗体亚类为IgG1,测得其效价为1:210,western blot结果显示单抗可特异性结合原核表达的gp85蛋白以及在细胞中表达病毒蛋白。而后分别对分段表达的gp85蛋白和合成的多肽进行与单抗反应性的鉴定,综合蛋白的western blot结果和多肽的ELISA结果可得,其抗原表位为146-ATRFLLR-152。通过对抗原表位的空间结构分析得出,构象表位为亲水性、抗原指数和可及性均较高的一段弯曲线性结构,其在A亚群中高度保守,其次在K亚群中含有4个相同的氨基酸,而在其他亚群中同源性较低。利用IFA的方法鉴定单抗可以识别的ALV亚群,其结果显示,单抗与ALV-A-SDAU09C1毒株产生较强反应,与ALV-K-JS11C1毒株产生较弱反应,不与ALV-B-SDAU09C2和ALV-J-NX0101毒株反应。以上结果表明,成功筛选出一株分泌抗ALV-A单克隆抗体的杂交瘤细胞株A18GH,并制备出ALV-A单克隆抗体,鉴定其抗原表位为146-ATRFLLR-152。
崔真毓[5]（2020）在《广西不同黄羽肉鸡品系种公鸡中禽白血病病毒分离鉴定及一株重组毒株基因组解析》文中进行了进一步梳理禽白血病是由禽白血病病毒（Avian leukosis virus,ALV）引起的,以免疫抑制、生长迟缓和多器官组织肿瘤为主要特征的病毒性传染病,近年来我国黄羽肉鸡和纯地方品系鸡群中ALV相关报道已有多。目前尚无有效的商品化疫苗和药物可用于控制禽白血病,对种鸡群实施严格的禽白血病净化被认为是控制禽白血病最有力的措施。在实施禽白血病净化过程中,公鸡及其精液在ALV传播中的作用不仅是一个重要的理论问题,也是关乎净化效果的实际技术问题,了解公鸡及其精液中ALV的感染和带毒状况、精液和血液中ALV感染状态的相关性对于实施禽白血病净化具有重要意义。本研究分别采用血浆和精液实施病毒分离对广西地区12个黄羽肉鸡品系的种公鸡开展了ALV的分离鉴定和调查,并对其中一株重组ALV开展了基因组测序和分析,以期为相应鸡群实施净化提供必要的基础数据。为了解拟开展禽白血病净化的12个黄羽肉鸡品系种公鸡中ALV感染状况,本研究分别采用血浆病毒分离鉴定和精液病毒分离鉴定并一一对应的方式对12个黄羽肉鸡品系的种公鸡开展了ALV的分离鉴定和流行病学调查。结果显示,12个品系种公鸡经血浆病毒分离阳性率分别为0.74%（1/135）、3.46%（8/231）、1.37%（1/73）、3.78%（9/238）、8.12%（38/468）、5.33%（73/1370）、5.45%（9/165）、2.13%（1/47）、0（0/29）、2.5%（1/40）、1.72%（3/174）、2.5%（5/200）,精液病毒分离阳性率分别为0.74%（1/135）、1.73%（4/231）、1.37%（1/73）、1.26%（3/238）、1.71%（8/468）、6.64%（91/1370）、4.24%（7/165）、0（0/47）、0（0/29）、0（0/40）、5.17%（9/174）、1.50%（3/200）,通过大量数据对比发现在多个品系中同一只公鸡血液病毒分离和精液病毒分离结果并不完全一致,多数鸡群血液病毒分离阳性率高于精液病毒分离阳性率,部分鸡群精液病毒分离阳性率高于血液病毒分离阳性率,分别对其中4个鸡场的6株ALV分离株gp85基因测序分析显示其均为J亚群ALV（ALV-J）。本研究结果表明在广西地区多个黄羽肉鸡品系种公鸡中仍存在ALV的流行,需要实施进一步的净化措施加以控制。在测序过程中初步发现野毒株GXRJ01株疑似为一株天然重组野毒株,为深入了解其分子特征,本探究通过多对相互重叠的引物对其不同基因区域分段扩增后测序,经拼接获得了GXRJ01株的全基因组,该分离株env基因与ALV-J代表株BR119的同源性高达98.7%,但其长末端重复序列（LTR）与E亚群ALV（ALV-E）的代表株同源性介于94.9%-98.4%,推测GXRJ01株很有可能是ALV-J gp85基因和ALV-E的LTR部分发生自然重组产生的野毒株。上述研究进一步显示了广西地区黄羽肉鸡品系中ALV基因的复杂性和多样性,推测黄羽肉鸡鸡群中可能存在多种亚群毒株的混合感染继而提升了重组毒株产生的几率,提示应尽快开展严格的净化措施以避免ALV在上述鸡群中的持续流行与重组几率。本研究采用血浆病毒分离鉴定和精液病毒分离鉴定两种方式同步实施完成了12种不同黄羽肉鸡品系种公鸡中ALV感染状况的调查,摸清了在上述品系种公鸡中ALV带毒状况并通过比较发现了血浆和精液病毒分离鉴定结果的不对应性。此外还发现并解析了一株ALV天然重组野毒株的基因组序列,相关研究结果对推动黄羽肉鸡品系禽白血病净化提供了新的理论数据支撑。
邢立晓[6]（2020）在《K亚群禽白血病病毒细胞受体及受体结合域鉴定》文中认为K亚群禽白血病是由K亚群禽白血病病毒（Subgroup K Avian Leukosis Virus,ALV-K）引起的一种禽类肿瘤病。ALV-K是一种新的病毒亚群,2012年首次发现于我国本地鸡群。随后,在我国南方多个地方品种鸡群中分离发现该病毒。该病毒感染后,可损伤免疫系统,引起严重免疫抑制,并能诱导产生神经胶质瘤。然而,目前ALV-K侵入宿主细胞机制以及侵入后引起的致病机制尚不清楚。病毒囊膜蛋白上的受体结合域与细胞受体相互作用是介导禽白血病病毒感染的首要步骤。为阐明ALV-K的侵入机制,本研究鉴定了ALV-K的细胞受体和gp85上的受体结合域。为鉴定ALV-K的细胞受体,本研究首先将ALV-K gp85与其他常见外源性ALV gp85蛋白进行氨基酸序列同源性分析,发现ALV-K gp85与ALV-A同源性最高,为80.8%。然后进行了交叉干扰实验,结果表明A亚群ALV（ALV-A）gp85蛋白能够抑制ALV-K的感染,同样ALV-K gp85蛋白也能抑制ALV-A的感染,存在交叉干扰现象,因而推测ALV-K可能利用ALV-A的细胞受体Tva进入细胞。为验证这一假说,本研究利用Co-IP和Pull-down实验检测了ALV-K gp85与Tva的互作,结果表明,ALV-K gp85蛋白能与可溶性的Tva（soluble Tva,sTva）相互作用。受体结合实验结果表明ALV-K gp85能高效结合跨膜表达的Tva,结合率在90%以上。受体阻断实验结果表明,sTva浓度从1.6μg/mL开始可显着阻断病毒进入。受体重建实验结果表明RCAS-K-GFP能够进入表达Tva的非易感细胞（293T）并复制产生较强的GFP荧光。以上结果充分表明Tva是ALV-K的细胞受体,能够介导ALV-K进入宿主细胞,启动感染。有文献报道ALV-A、B、C和E亚群的gp85与细胞受体的相互作用主要发生在宿主决定区hr1（host range region1,hr1）和hr2。为进一步鉴定ALV-K的受体结合域,本研究采用HA标签逐段替换策略,将hr1（T120～E160）分别按照从前往后顺序依次进行5次替换,hr2（Q194～K240）进行3次替换,共构建了8组可溶性表达质粒。将野生型gp85及HA替换的gp85蛋白进行圆二色谱测定,结果表明HA2和HA6～8替换的gp85蛋白二级结构与野生型gp85差异较大。受体结合实验结果表明,HA2和HA6～8替换的gp85蛋白均丧失了与Tva结合的能力,结合率低于30%。病毒阻断实验结果类似于受体结合试验,HA2和HA6～8替换的gp85蛋白均不能有效封闭DF-1细胞表面受体进而阻断病毒进入。以上结果证明,位于ALV-K gp85中间1/3区域的hr1中的HA2（C129～I137）和hr2对应的HA6～8（Q194～K240）区域的氨基酸构成gp85上的受体结合域。为进一步鉴定ALV-K gp85蛋白结合受体的关键氨基酸,比较了上述受体结合域内不同亚群ALV毒株gp85相应氨基酸序列,根据亚群间不同、亚群内保守的原则,确定了8组潜在关键氨基酸位点。为验证这些位点在受体结合中的作用,在gp85-HA2和HA6～8蛋白基础上回复突变上述氨基酸,构建了8组gp85-HA回复突变体质粒。受体结合实验结果表明,gp85-HA6R198、gp85-HA6R200C201G202与Tva相对结合能力分别可以达到60%和75%。这些结果表明ALV-K gp85的R198和R200C201G202位氨基酸在结合受体中发挥关键作用。本研究鉴定了ALV-K的细胞受体及gp85受体结合域,并鉴定出决定ALV-K结合Tva受体的关键氨基酸。这些研究结果为阐明ALV-K侵入宿主细胞机制及抗病毒靶点筛选奠定了基础。
葛成[7]（2020）在《河北地区禽白血病流行病学调查与gp85蛋白表达及免疫效果评价》文中指出禽白血病（Avian Leukosis,AL）是由禽白血病病毒（Avian leukosis virus,ALV）引起对家禽危害较大的一种以垂直及水平方式进行传播的肿瘤性疾病。该病发病率为3%?5%,病程长,严重增加家禽养殖业的损失。目前对于该病没有有效的药物及疫苗。因此,本研究对河北地区AL展开流行病学调查,及主要流行亚群gp85基因进行了原核表达及真核表达,并对其进行了免疫效果的初步研究。研究内容和结果如下:1.河北地区种鸡ALV p27携带情况、流行亚群及其分子特征分析本研究通过对河北地区种鸡场采集种蛋和肛拭子样本（共包含6个地区的7个种鸡场3496份样品,其中地方品种2533份、引进品种159份、培育品种804份）,利用p27抗原ELISA试剂盒检测ALV p27携带情况,结果显示2018-2019年河北地区种鸡场的阳性率达85.71%,个体平均阳性率达13.79%,地方品种阳性率达18.91%,引进品种阳性率为1.26%,培育品种阳性率仅为0.12%;采用PCR方法检测2018-2019年主要流行亚群,结果显示J亚群检出率为13.79%,E亚群检出率为13.70%,A亚群检出率为0.09%,K亚群检出率为2.23%;对主要流行亚群ALV-J gp85基因测序分析,显示分离株与参考株的同源性达98.50%100.00%,且主要围绕HPRS-103发生变异。2.ALV-J gp85原核表达及免疫保护力评价为克隆出ALV gp85基因,设计引物,构建pET-32a-gp85表达载体,将重组载体转化入BL21大肠杆菌工程菌中,成功表达目的蛋白,蛋白分子质量约54kDa,Western blot方法表明该蛋白具有良好的免疫原性。将原核表达蛋白以100μg、150μg、200μg/只剂量进行免疫,免疫后第7、14、21、28d采血,通过ELISA方法检测特异性gp85抗体水平,结果显示,免疫各组各期的血清gp85抗体水平均显着高于对照组（P<0.05）,以150μg免疫组的各期抗体水平最高,与100μg、200μg免疫组比较均达显着水平（P<0.05）。第35d天以3 TCID50攻毒,利用ELISA p27抗原试剂盒检测其抗原携带情况,进而分析其保护率,结果表明,在攻毒21d时,100μg免疫组保护力最低,150μg免疫组保护力次之,200μg免疫组保护力为26.67%。3.ALV-J gp85真核蛋白在293T细胞中的表达及免疫效果评价为获得293T细胞表达的gp85蛋白,本研究将gp85基因导入表达质粒pEGFP-N1,得到重组质粒pEGFP-N1-gp85,转染293T细胞,经倒置荧光显微镜观察和Western blot鉴定,获得gp85真核蛋白,分子质量约为60 kDa。将pEGFP-N1-gp85真核质粒以100μg、150μg、200μg/只剂量进行免疫,免疫后第7、14、21、28d采血,利用ELISA方法检测特异性gp85抗体水平,利用MTT法检测T淋巴细胞转化率,第35d天以3 TCID50攻毒,检测ALV p27抗原携带情况,进而分析其保护率。结果显示,免疫各组各期的血清gp85抗体水平及外周血T淋巴细胞转化率均显着高于对照组（P<0.05）,以150μg免疫组的各期抗体水平最高,与100μg、200μg免疫组比较均达显着水平（P<0.05）。在攻毒试验21d时,100μg免疫组保护力最低,200μg免疫组保护力次之,150μg免疫组保护力为53.33%。表明该真核质粒适宜免疫剂量为150μg。
赵震东[8]（2020）在《南通地区禽白血病的流行病学调查及其净化的初步研究》文中研究指明禽白血病病毒（Avian leukosis virus,ALV）是可引起禽类多种肿瘤及免疫抑制性疾病的反转录病毒。根据其囊膜蛋白特征,该病毒可分为A-K共11个亚群。其中A,B,J亚群较为常见,且J亚群目前在国内最为常见。ALV-J感染主要造成鸡造血细胞恶性增生,引起髓细胞瘤、血管瘤及严重的免疫抑制,对国内外养禽业造成巨大经济损失。随着国内ALV净化工作的推进,鸡群ALV-J的感染及其发病率显着下降。ALV-K是近年来在国内地方品种鸡中分离鉴定出的新型禽白血病病毒。由于ALV-K病毒复制能力较弱,鸡群中ALV-K感染往往不易被检测出来,正挑战目前ALV通用检测及净化技术。本研究对南通地区送检的疑似ALV感染病料进行检测,分离鉴定到一株K亚群禽白血病病毒,并利用ALV-A/B抗体、ALV-J抗体及ALV抗原（p27）检测试剂盒对南通地区8个规模化地方品系祖代种鸡场开展了 ALV流行病学检测,且对两个品系的种鸡鸡群三个世代进行了禽白血病检测净化跟踪研究。1.南通地区禽白血病流行病学调查为了解南通地区ALV感染状态,本研究在对南通地区送检的疑似ALV感染病料进行PCR检测、病毒分离鉴定的基础上,利用商品化的ALV-A/B抗体和ALV-J抗体检测试剂盒以及本实验室研制的ALV抗原检测试剂盒对南通地区8个规模化地方品系祖代鸡鸡场开展了 ALV流行病学检测。研究结果表明,从疑似病料中分离到一株ALV-K,命名为NT181121。8个鸡场A/B亚型抗体阳性检出率为87.5%（7/8）,各鸡场阳性率分别为 4%（2/50）、4%（2/50）、0%（0/50）、4%（2/50）、2%（1/50）、6%（3/50）、12%（6/50）以及 4%（2/50）,总体个体阳性率为 4.5%（18/400）;J亚型抗体阳性检出率为100%（8/8）,各鸡场阳性率分别为20%（10/50）、36%（18/50）、14%（7/50）、6%（3/50）、50%（25/50）、6%（3/50）、22%（11/50）以及 26%（13/50）,总体个体阳性率为22.5%（90/400）;血样ALV抗原阳性检出率为100%（8/8）,各鸡场阳性率分别为 14%（7/50）、22%（11/50）、8%（4/50）、24%（12/50）、26%（13/50）、10%（5/50）、24%（12/50）以及 18%（9/50）,总体个体阳性率为18.25%（73/400）。以上对南通地区8个规模化鸡场外源性ALV感染现状调查结果显示ALV感染在南通地区已非常普遍。2.两个品系种鸡群禽白血病净化的初步研究针对南通地区ALV感染普遍性问题,在采用ALV净化的金标准方案基础上,本研究结合本实验室研制的禽白血病病毒p27抗原夹心ELISA检测试剂盒,对南通地区两个地方品系种鸡群（代号分别为3号和6号）进行了三个代次的ALV检测与净化研究。研究结果表明,通过三个代次的ALV检测、净化淘汰,3号和6号品系种鸡群泄殖腔棉拭样品和全血样品病毒检测阳性率均显着下降。3号品系种鸡群ALVp27抗原阳性率由净化前38.4%下降到4.7%,抗凝血的病毒分离由净化前11.2%降为1.46%;6号品系种鸡群ALVp27抗原阳性率由净化前19.8%降为6.3%,抗凝血的病毒分离由净化前6.3%降为0.8%。以上结果表明这两个地方品系种鸡群经过三个代次的净化,取得了初步的净化成效。
郑高颖[9]（2020）在《CD4+CD25+调节性T细胞在J亚群禽白血病病毒诱导鸡免疫耐受中的作用机制研究》文中进行了进一步梳理J亚群禽白血病病毒（Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J）诱导鸡免疫耐受是肿瘤发生的先决条件。然而,病毒诱导免疫耐受的原因和致病机制尚不完全明确。先前研究显示,ALV-J可以导致免疫器官中淋巴细胞的严重耗竭,提示T、B淋巴细胞受到了严重的损伤与抑制,也提示免疫抑制性作用在机体中占主导作用。而且有大量研究表明,CD4+CD25+调节性T细胞（Regulatory T cells,Tregs）在维持机体的免疫耐受中发挥着重要的调控作用,参与多种慢性感染性疾病的发展过程。那么,Tregs是否参与了ALV-J诱导的免疫耐受,且通过何种方式发挥作用?因此,为解析Tregs在ALV-J诱导免疫耐受中的作用,本研究通过建立ALV-J免疫耐受模型,从多个角度评估了免疫应答能力的损伤,利用分子生物学技术,系统研究和阐述了ALV-J先天感染下CD4+CD25+Tregs在鸡免疫器官及血液中的动态变化及其与细胞因子、病毒载量变化之间的关系,以期揭示CD4+CD25+Tregs在ALV-J诱导的免疫耐受中可能发挥的作用及其病理机制。为模拟ALV-J诱导的机体持续性免疫耐受过程,通过在6胚龄尿囊腔注射ALV-J,建立了先天感染动物模型,通过ELISA与qPCR方法检测到感染鸡体内持续带毒且不产生特异性抗体,确定成功建立免疫耐受模型,以便后续试验展开。通过大体剖检观察与免疫指数检测以及病理组织学观察,对鸡免疫器官的损伤进行评估。大体剖检结果显示,ALV-J感染组鸡的胸腺、法氏囊和脾脏等免疫器官发育不良,表现为体积较小且免疫指数显着降低等特征。病理学组织检查结果进一步显示感染组鸡胸腺、法氏囊中的间质结缔组织较多,而淋巴小结或淋巴滤泡发育不良,淋巴细胞数量较正常组少,提示ALV-J感染后淋巴细胞损伤严重。为进一步探究ALV-J对淋巴细胞的损伤,通过流式细胞术（Flow cytometry,FCM）、免疫荧光（Immunofluorescence,IF）和免疫组化（Immunohistochemistry,IHC）等方法检测了法氏囊B细胞数量及脾脏中B细胞的数量分布、发育分化能力,结果显示感染组鸡法氏囊与脾脏B细胞数量显着减少,脾脏中IgM+和IgG+浆细胞数量显着减少。上述结果提示,ALV-J抑制了B细胞的增殖以及发育分化。为探究T细胞在ALV-J感染后的免疫功能变化,通过FCM和qPCR方法连续分析和监测了鸡血液及免疫器官中CD4+、CD8+T细胞亚群比例和细胞因子表达量的变化,FCM结果显示,ALV-J感染后免疫器官和血液的CD4+T细胞亚群比例显着下降,尤其在7日龄下降最为显着;而CD8+T细胞亚群比例在早期的血液和脾脏、盲肠扁桃体显着下降,但是在胸腺、法式囊显着上升,后期时各器官均与对照组无差异。qPCR结果显示,ALV-J感染后IL-2、IL-4的表达量持续降低,IFN-γ表达量早期有升高也有降低趋势,在45日龄几乎与对照组无差异,IL-10表达量的持续升高。上述结果提示ALV-J抑制了T细胞的增殖与功能,对CD4+T细胞的抑制较严重,且机体免疫抑制功能占主导。上述实验结果提示ALV-J感染后免疫负调控的细胞亚群被激活,为解析CD4+CD25+Tregs在ALV-J诱导免疫耐受中的作用,运用FCM连续监测了760日龄鸡免疫器官及血液中CD4+CD25+Tregs频率的变化规律,结果显示,ALV-J感染后血液与免疫器官中Tregs频率显着升高,尤其是在幼龄时期（715日龄）,随着日龄的增长,Tregs频率仍然维持着在某些免疫器官中的波动性增长。进一步通过FCM分选出CD4+CD25+Tregs亚群,qPCR检测细胞中IL-10、TGF-β、CTLA-4的转录水平,结果显示,胸腺、法氏囊、脾脏的IL-10、TGF-β、CTLA-4均显着上升,且与CD4+CD25+Tregs数量升高趋势几乎相同,而盲肠扁桃体的Tregs数量升高趋势仅与IL-10的转录水平升高趋势一致,TGF-β、CTLA-4的转录水平仅在个别日龄升高。以上结果提示,ALV-J感染导致免疫器官和血液的CD4+CD25+Tregs持续增殖,并通过分泌IL-10、TGF-β等细胞因子以及表达CTLA-4等表面抑制性因子发挥免疫抑制功能;且不同免疫器官的Tregs活化的能力强弱不同。为进一步探究不同免疫器官中Tregs免疫功能的差异是否与病毒相关,通过qPCR对免疫器官中ALV-J病毒载量进行动态监测。结果显示,ALV-J的病毒载量变化趋势与Tregs频率与功能变化趋势呈正相关,而且Tregs免疫抑制功能较低的盲肠扁桃体的病毒载量较其他免疫器官最低。以上现象提示,ALV-J可以诱导机体的Tregs大量增殖,但是Tregs功能的激活需要达到一定的病毒载量。也提示ALV-J可以在Tregs中复制,为验证该推论,通过FCM检测了CD4+CD25+Tregs中ALV-J的表达情况,结果显示,约50%的Tregs表面表达ALV-J的SU蛋白。也证明了ALV-J可以在Tregs中复制,即ALV-J可直接作用于Tregs。综上所述,CD4+CD25+Tregs在体内的持续增殖活化是ALV-J诱导持续性免疫耐受的重要原因,胸腺、脾脏、法氏囊等免疫器官的Tregs发挥重要免疫抑制功能。ALV-J可直接作用于Tregs,诱导机体的Tregs大量增殖,但是Tregs功能的激活需要达到一定的病毒载量。不过,ALV-J与Tregs互相作用的分子机制仍需更深入的研究。
严立福,黎丽珍,郑晓翠,陈建,冯开荣,曹伟胜[10]（2020）在《七彩山鸡F亚群禽白血病病毒的分离与鉴定》文中研究说明为了解广东某七彩山鸡种禽场禽白血病流行情况,通过接种DF-1细胞、ELISA抗原检测、聚合酶链式反应（PCR）、囊膜基因克隆测序等方法分离并鉴定出两株ALV-F,分别命名为FGD1801和FGD1802。为进一步了解分离株遗传进化特点,利用PCR方法扩增出env基因并测序,同时与各亚群参考毒株的gp85核苷酸序列进行对比。结果显示:这两个分离株env基因gp85片段长度都为1 080 bp,预计编码360个氨基酸,FGD1801和FGD1802分离株gp85基因核苷酸序列的相似性为92.8%,与A、B、E、J和K亚群共26株ALV参考毒株相似性在47.0%～64.5%之间,而与F亚群参考株的相似性在92.0%～92.5%,显着高于其他亚群,且位于同一进化分支上。研究表明,从七彩山鸡分离的FGD1801和FGD1802属于ALV-F,是我国华南地区新发现的ALV亚群。
二、禽白血病病毒囊膜基因gp85片段的克隆与鉴定（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、禽白血病病毒囊膜基因gp85片段的克隆与鉴定（论文提纲范文）
（3）2株J亚群禽白血病病毒毒株的分离鉴定及全基因组序列分析（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 病鸡剖检及病毒分离鉴定 |
| 1.3 ALV全病毒DNA的制备 |
| 1.4 全病毒基因组 |
| 1.5 克隆测序 |
| 1.6 全基因组序列拼接及分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 病鸡剖检 |
| 2.2 病毒的分离及鉴定 |
| 2.3 全病毒基因组序列PCR扩增 |
| 2.4 分离毒株基因组序列测定 |
| 2.5 分离株与现有毒株序列同源性分析 |
| 3 讨论 |
（4）禽白血病病毒单克隆抗体识别抗原表位的鉴定与分析（论文提纲范文）
| 符号说明 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 禽白血病 |
| 1.1.1 禽白血病概述 |
| 1.1.2 禽白血病病原学 |
| 1.1.3 禽白血病的致病性及危害 |
| 1.1.4 禽白血病鉴别诊断 |
| 1.1.4.1 组织病理学检查 |
| 1.1.4.2 病毒分离和鉴定 |
| 1.1.4.3 ELISA法 |
| 1.1.4.4 IFA法 |
| 1.1.4.5 PCR法 |
| 1.1.5 禽白血病预防控制 |
| 1.2 禽白血病病毒单克隆抗体及其识别抗原表位 |
| 1.2.1 单克隆抗体研制原理概述 |
| 1.2.2 单克隆抗体研制应用概述 |
| 1.2.3 禽白血病病毒单克隆抗体 |
| 1.2.4 禽白血病病毒单克隆抗体应用及其制约因素 |
| 1.3 抗原表位 |
| 1.3.1 抗原表位概述 |
| 1.3.2 抗原表位鉴定及其应用 |
| 1.3.3 禽白血病病毒单克隆抗体抗原表位及其特性 |
| 1.3.4 禽白血病病毒单克隆抗体抗原表位研究存在的问题 |
| 1.4 研究的目的意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 病毒和细胞来源 |
| 2.1.2 菌种和载体质粒 |
| 2.1.3 引物 |
| 2.1.4 主要试剂 |
| 2.1.5 实验动物 |
| 2.1.6 主要仪器 |
| 2.1.7 实验地点 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 ALV-A gp85 基因扩增 |
| 2.2.2 ALV-A gp85 重组表达质粒构建 |
| 2.2.3 ALV-A gp85 分段扩增和表达 |
| 2.2.4 ALV-A单克隆抗体制备 |
| 2.2.5 ALV-A单克隆抗体特性分析 |
| 2.2.6 ALV-A单克隆抗体线性识别抗原表位western blot分析 |
| 2.2.7 ALV-A单克隆抗体线性识别抗原表位的ELSIA分析 |
| 2.2.8 ALV-A单克隆抗体线性识别抗原表位生物信息分析 |
| 2.2.9 ALV-A单克隆抗体介导的IFA |
| 2.3 研究平台 |
| 2.4 数据处理与统计分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 ALV-A单克隆抗体制备 |
| 3.1.1 ALV-A gp85 蛋白基因的扩增与重组表达质粒的构建 |
| 3.1.2 gp85 重组蛋白的诱导表达及纯化 |
| 3.1.3 阳性杂交瘤细胞的筛选以及染色体数目的鉴定 |
| 3.1.4 腹水的制备 |
| 3.1.5 抗体的纯化 |
| 3.2 ALV-A单克隆抗体亚类鉴定 |
| 3.3 ALV-A单克隆抗体特性分析 |
| 3.4 ALV-A单克隆抗体识别抗原表位鉴定 |
| 3.5 ALV-A单克隆抗体识别抗原表位的生物信息分析 |
| 3.6 ALV-A单克隆抗体介导的IFA |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 6 创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
（5）广西不同黄羽肉鸡品系种公鸡中禽白血病病毒分离鉴定及一株重组毒株基因组解析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩写对照表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 ALV研究进展 |
| 1.1.1 ALV的形态 |
| 1.1.2 ALV的理化特性 |
| 1.1.3 ALV基因组 |
| 1.1.4 ALV的分类 |
| 1.1.5 ALV-J的发现 |
| 1.1.6 ALV致病性 |
| 1.2 ALV流行病学 |
| 1.2.1 ALV传播方式 |
| 1.2.2 ALV-J的流行病学和净化 |
| 1.2.3 ALV临床症状与病理变化 |
| 1.2.4 ALV检测和诊断 |
| 1.3 禽白血病研究现状与展望 |
| 1.4 禽白血病的综合防控 |
| 1.5 本研究目的与意义 |
| 第二章 广西地区不同黄羽肉鸡品系种公鸡中禽白血病流行病学调查 |
| 2.1 材料与试剂 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 细胞 |
| 2.1.3 主要仪器设备 |
| 2.1.4 主要试剂及配制方法 |
| 2.1.5 鸡群背景及样品采集 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 血液样品采集 |
| 2.2.2 血液样品处理 |
| 2.2.3 DF-1细胞复苏 |
| 2.2.4 血浆样品病毒分离鉴定 |
| 2.2.5 应用ELISA检测细胞培养上清ALV-p27 抗原 |
| 2.2.6 精液样品的采集 |
| 2.2.7 精液样品的处理 |
| 2.2.8 精液样品接种病毒 |
| 2.2.9 ELISA试剂盒检测公鸡精液ALV-p27 抗原 |
| 2.2.10 部分毒株gp85基因的测序 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 以公鸡血液为样品标准的各品系ALV分离鉴定结果 |
| 2.3.2 以公鸡精液为样品标准的各品系ALV分离鉴定结果 |
| 2.3.3 分别以血浆样品和精液样品实施病毒分离的结果对比 |
| 2.3.4 部分分离毒株的gp85序列分析与亚群鉴定 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 ALV-J天然重组毒GXRJ01 株的分离鉴定与基因组分析 |
| 3.1 材料与试剂 |
| 3.1.1 样品来源 |
| 3.1.2 细胞 |
| 3.1.3 主要试剂 |
| 3.1.4 主要仪器 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 血浆样品的采集与处理 |
| 3.2.2 用于基因组测序的引物合成 |
| 3.2.3 病毒RNA提取 |
| 3.2.4 病毒RNA的 RT-PCR |
| 3.2.5 扩增产物的回收及纯化 |
| 3.2.6 PCR产物与T载体连接 |
| 3.2.7 DH5α感受态细胞的制备 |
| 3.2.8 连接产物的转化 |
| 3.2.9 重组克隆细菌的筛选 |
| 3.2.10 质粒的提取 |
| 3.2.11 质粒的酶切鉴定 |
| 3.2.12 阳性单克隆的测序与序列分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 血浆样品细胞培养病毒分离结果 |
| 3.3.2 用于病毒全基因序列测定的毒株 |
| 3.3.3 全基因组序列与其他亚群的序列比对及遗传进化分析 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文 |
（6）K亚群禽白血病病毒细胞受体及受体结合域鉴定（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 主要符号对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 禽白血病病毒病原学 |
| 1.1.1 ALV的病毒学特征 |
| 1.1.2 ALV的基因组 |
| 1.1.3 ALV的分类 |
| 1.1.4 ALV的致病机理 |
| 1.2 禽白血病病毒流行病学 |
| 1.2.1 ALV-J的流行病学 |
| 1.2.2 ALV-K的流行病学 |
| 1.3 禽白血病病毒侵入机制 |
| 1.4 禽白血病病毒各亚群细胞受体研究进展 |
| 1.4.1 ALV-A的细胞受体研究进展 |
| 1.4.2 ALV-B/D/E的细胞受体研究进展 |
| 1.4.3 ALV-C的细胞受体研究进展 |
| 1.4.4 ALV-J的细胞受体研究进展 |
| 1.4.5 不同亚群ALV的细胞受体拓扑结构比较 |
| 1.5 禽白血病病毒各亚群gp85受体结合域研究进展 |
| 1.5.1 ALV-A gp85 受体结合域研究进展 |
| 1.5.2 ALV-B/C gp85 受体结合域研究进展 |
| 1.6 本研究目的与意义 |
| 第二章 K亚群禽白血病病毒细胞受体鉴定 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 病毒 |
| 2.1.2 细胞、质粒及引物 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 实验仪器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 ALV-K gp85 真核表达质粒的构建 |
| 2.2.2 A、K和 J亚群ALV gp85 和可溶性Tva蛋白制备 |
| 2.2.3 RCAS-K-GFP和 RCAS-K-luciferase重组病毒的拯救 |
| 2.2.4 Tva蛋白跨膜表达情况检测 |
| 2.2.5 A和 K亚群ALV gp85 交叉干扰实验 |
| 2.2.6 ALV-K gp85与s Tva蛋白相互作用检测 |
| 2.2.7 受体结合实验 |
| 2.2.8 可溶性受体阻断实验 |
| 2.2.9 受体重建实验 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 ALV-K gp85 真核表达质粒的鉴定 |
| 2.3.2 A、K和 J亚群ALV gp85和s Tva蛋白的表达与纯化 |
| 2.3.3 RCAS-K-GFP和 RCAS-K-luciferase重组病毒拯救结果 |
| 2.3.4 Tva蛋白跨膜表达 |
| 2.3.5 A和 K亚群ALV gp85 蛋白交叉干扰病毒进入 |
| 2.3.6 ALV-K gp85与s Tva蛋白相互作用 |
| 2.3.7 ALV-K gp85 结合跨膜表达的Tva |
| 2.3.8 s Tva蛋白阻断RCAS-K-luciferase重组病毒侵入 |
| 2.3.9 跨膜表达的Tva介导RCAS-K-GFP重组病毒进入 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 K亚群禽白血病病毒gp85上的受体结合域鉴定 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 质粒、病毒与细胞 |
| 3.1.2 主要实验试剂 |
| 3.1.3 主要实验仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 HA替换ALV-K gp85 真核表达质粒的构建 |
| 3.2.2 HA替换ALV-K gp85 蛋白的表达与纯化 |
| 3.2.3 ALV-K gp85-HA突变体蛋白二级结构差异检测 |
| 3.2.4 ALV-K gp85-HA突变体蛋白与Tva结合力检测 |
| 3.2.5 ALV-K gp85-HA突变体蛋白封闭Tva能力检测 |
| 3.2.6 不同ALV-K毒株间受体结合域氨基酸序列比对 |
| 3.2.7 ALV-K gp85-HA回复突变体真核表达质粒的构建 |
| 3.2.8 ALV-K gp85-HA回复突变体蛋白的表达与纯化 |
| 3.2.9 ALV-K gp85-HA回复突变体与Tva结合力检测 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 HA替换ALV-K gp85 真核表达质粒的鉴定 |
| 3.3.2 HA替换ALV-K gp85 蛋白的表达与纯化 |
| 3.3.3 ALV-K gp85-HA突变体蛋白二级结构差异检测结果 |
| 3.3.4 ALV-K gp85-HA突变体蛋白与Tva结合力检测结果 |
| 3.3.5 ALV-K gp85-HA突变体蛋白封闭Tva能力检测结果 |
| 3.3.6 不同ALV-K毒株间受体结合域氨基酸序列比对结果 |
| 3.3.7 ALV-K gp85-HA回复突变体真核表达质粒的鉴定 |
| 3.3.8 ALV-K gp85-HA回复突变体蛋白的表达与纯化 |
| 3.3.9 ALV-K gp85-HA回复突变体与Tva结合力检测结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 全文结论 |
| 参考文献 |
| 附录A |
| 附录B |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（7）河北地区禽白血病流行病学调查与gp85蛋白表达及免疫效果评价（论文提纲范文）
| 缩略词 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 禽白血病病原学 |
| 1.1.1 ALV的分类 |
| 1.1.2 ALV结构特征 |
| 1.1.3 ALV理化特性 |
| 1.2 ALV基因组及蛋白结构 |
| 1.2.1 Gag基因编码的蛋白 |
| 1.2.2 Pol基因编码的蛋白 |
| 1.2.3 Env基因编码的蛋白 |
| 1.3 AL流行病学 |
| 1.3.1 AL的宿主范围 |
| 1.3.2 ALV的传播途径 |
| 1.4 AL的临床症状及病理变化 |
| 1.5 AL的检测诊断方法 |
| 1.5.1 病毒的分离鉴定 |
| 1.5.2 酶联免疫吸附试验 |
| 1.5.3 核酸斑点杂交试验 |
| 1.5.4 免疫荧光技术 |
| 1.5.5 快速检测试纸条 |
| 1.5.6 PCR技术 |
| 1.6 AL的防制 |
| 1.6.1 灭活疫苗 |
| 1.6.2 活疫苗 |
| 1.6.3 基因工程疫苗 |
| 1.7 本课题研究的目的及意义 |
| 第二章 河北地区种鸡ALVp27携带情况、流行亚群及分子特征分析 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 样品来源 |
| 2.1.2 主要仪器设备 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 样品的处理 |
| 2.2.2 样品中ALVp27抗原检测 |
| 2.2.3 ALp27阳性样品亚群检测 |
| 2.2.4 ALV-J gp85 分子特征分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 ALVp27携带情况 |
| 2.3.2 ALV亚群检测情况 |
| 2.3.3 ALV-J gp85 序列分析 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 ALV-J囊膜蛋白gp85 原核表达及免疫效力评价 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 菌株、表达载体、ALV-J病毒及试验动物 |
| 3.1.2 主要仪器 |
| 3.1.3 主要试剂 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 ALV基因组的提取 |
| 3.2.2 ALV-J gp85 引物的设计及合成 |
| 3.2.3 ALV-J gp85 基因克隆与纯化 |
| 3.2.4 重组表达质粒pET-32a-gp85 的构建 |
| 3.2.5 原核蛋白gp85 的表达及Western blot检测 |
| 3.2.6 重组蛋白gp85特异性免疫效果测定 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 gp85 基因克隆与原核表达质粒pET-32a-gp85 的构建 |
| 3.3.2 重组蛋白gp85的表达验证 |
| 3.3.3 pET-32a-gp85 蛋白表达的可溶性分析及纯化 |
| 3.3.4 Western blot分析重组蛋白gp85 的免疫原性 |
| 3.3.5 gp85蛋白免疫对雏鸡血清特异性抗体gp85的影响 |
| 3.3.6 不同剂量免疫攻毒后鸡ALVp27阳性数及保护率分析 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 ALV-J gp85 真核蛋白在293T细胞中的表达及免疫效果评价 |
| 4.1 试验材料 |
| 4.1.1 质粒、病毒及细胞株 |
| 4.1.2 主要仪器 |
| 4.1.3 主要试剂 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 引物的设计合成及gp85基因扩增 |
| 4.2.2 pMD-18T-gp85 基因的克隆、测序 |
| 4.2.3 重组质粒pEGFP-N1-gp85 的构建 |
| 4.2.4 细胞转染 |
| 4.2.5 pEGFP-N1-gp85 重组蛋白在293T细胞中的表达 |
| 4.2.6 Western blot检测pEGFP-N1-gp85 的表达情况 |
| 4.2.7 ALV-J gp85 真核蛋白的免疫效果评价 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 ALV-J gp85 基因扩增 |
| 4.3.2 重组质粒的双酶切鉴定 |
| 4.3.3 pEGFP-N1-gp85在293T细胞中的表达 |
| 4.3.4 Western blot分析pEGFP-N1-gp85在293T细胞中的表达 |
| 4.3.5 血清抗体特异性检测 |
| 4.3.6 血清抗体水平检测 |
| 4.3.7 外周血T淋巴细胞转化率测定 |
| 4.3.8 不同剂量免疫攻毒后鸡ALVp27阳性数及保护率 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 论文受资助情况 |
| 致谢 |
（8）南通地区禽白血病的流行病学调查及其净化的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第1章 禽白血病概述 |
| 1.1 病原学 |
| 1.1.1 ALV的分类 |
| 1.1.2 禽白血病病毒结构 |
| 1.1.3 禽白血病病毒对理化因素的抵抗力 |
| 1.1.4 禽白血病病毒的致病性及致病机理 |
| 1.2 禽白血病的传播方式与流行情况 |
| 1.3 禽白血病的诊断与检测 |
| 1.3.1 病毒的分离鉴定 |
| 1.3.2 酶联免疫吸附试验(ELISA) |
| 1.3.3 免疫荧光技术(IFA) |
| 1.3.4 聚合酶链式反应(PCR)技术 |
| 1.3.5 血清型检测 |
| 1.4 禽白血病的预防与控制 |
| 1.4.1 免疫接种 |
| 1.4.2 禽白血病抗性鸡的培育 |
| 1.4.3 禽白血病净化 |
| 第2章 南通地区禽白血病的流行病学调查 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 细胞和检测试剂盒 |
| 2.1.2 样品来源 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.1.4 主要试剂耗材 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 病鸡样品检测 |
| 2.2.2 规模化鸡场样品的检测 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 主要病变观察 |
| 2.3.2 病毒分离间接免疫荧光结果 |
| 2.3.3 多重PCR鉴定 |
| 2.3.4 env基因PCR扩增 |
| 2.3.5 gp85基因序列分析 |
| 2.3.6 gp37基因序列分析 |
| 2.3.7 禽白血病抗体检测结果 |
| 2.3.8 禽白血病病毒p27抗原夹心ELISA检测试剂盒检测结果 |
| 2.4 讨论 |
| 第3章 两个品系种鸡群禽白血病净化的初步研究 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 地方种鸡群 |
| 3.1.2 细胞和检测试剂盒 |
| 3.1.3 主要试剂耗材 |
| 3.1.4 主要仪器 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 禽白血病净化方案的制定 |
| 3.2.2 待检样品的采集 |
| 3.2.3 禽白血病病毒p27抗原检测 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 第一代次种鸡群ALV感染情况 |
| 3.3.2 第二代次种鸡群ALV感染情况 |
| 3.3.3 第三代次种鸡群ALV感染情况 |
| 3.3.4 鸡群初步净化效果 |
| 3.4 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（9）CD4+CD25+调节性T细胞在J亚群禽白血病病毒诱导鸡免疫耐受中的作用机制研究（论文提纲范文）
| 符号说明 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 禽白血病病毒概述 |
| 1.1.1 禽白血病病毒特征及分类 |
| 1.1.2 J亚型禽白血病病毒的致病特性 |
| 1.2 J亚群禽白血病病毒诱导的免疫耐受及研究进展 |
| 1.2.1 J亚群禽白血病诱导的免疫耐受 |
| 1.2.2 J亚群禽白血病诱导的免疫耐受研究进展 |
| 1.3 调节性T细胞在介导免疫耐受中的作用 |
| 1.3.1 调节性T细胞的分类及作用特点 |
| 1.3.2 调节性T细胞在机体免疫系统中的调节作用 |
| 1.3.3 调节性T细胞在感染性疾病中的调节作用 |
| 1.4 本研究的目的及意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 病毒 |
| 2.1.2 细胞 |
| 2.1.3 实验动物 |
| 2.1.4 主要试剂 |
| 2.1.5 主要缓冲液 |
| 2.1.6 主要仪器 |
| 2.1.7 试验地点 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 病毒分离 |
| 2.2.2 细胞的传代培养 |
| 2.2.3 病毒的纯化与扩增 |
| 2.2.4 病毒滴度的测定 |
| 2.2.5 鸡胚内病毒接种 |
| 2.2.6 ALV-J p27 抗原检测 |
| 2.2.7 抗ALV-J抗体检测 |
| 2.2.8 免疫指数检测 |
| 2.2.9 鸡免疫器官病理组织学观察 |
| 2.2.10 免疫组织化学检测 |
| 2.2.11 免疫荧光检测 |
| 2.2.12 流式细胞术的分析与分选 |
| 2.2.13 荧光定量PCR |
| 2.2.14 ALV-J绝对荧光定量PCR体系的建立 |
| 2.2.15 生物统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 ALV-J先天感染免疫耐受鸡模型的建立 |
| 3.2 ALV-J对鸡免疫器官的损伤及评估 |
| 3.2.1 免疫器官的形态学评估 |
| 3.2.2 病理组织学观察 |
| 3.3 ALV-J感染对B细胞增殖与功能的影响 |
| 3.4 ALV-J感染对T细胞增殖与功能的影响 |
| 3.4.1 ALV-J感染后血液与免疫器官CD4+、CD8+T细胞比例变化规律 |
| 3.4.2 ALV-J对 T细胞分泌细胞因子能力的影响 |
| 3.5 ALV-J感染后CD4+CD25+调节性T细胞频率的变化规律 |
| 3.6 ALV-J对 CD4+CD25+调节性T细胞分泌抑制性因子能力的影响 |
| 3.7 ALV-J感染鸡病毒载量的变化规律 |
| 3.7.1 ALV-J绝对荧光定量检测体系的建立 |
| 3.7.2 ALV-J感染鸡免疫器官病毒载量的变化规律 |
| 3.8 ALV-J对 CD4+CD25+调节性T细胞具有嗜性 |
| 4 讨论 |
| 4.1 ALV-J先天感染诱导的持续性免疫耐受 |
| 4.2 ALV-J感染后免疫功能低下 |
| 4.3 ALV-J诱导的免疫耐受状态下CD4+CD25+调节性T细胞持续增殖活化 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 |
（10）七彩山鸡F亚群禽白血病病毒的分离与鉴定（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 样品来源及处理 |
| 1.2 主要试剂及仪器 |
| 1.3 病毒分离与鉴定 |
| 1.4 引物设计 |
| 1.5 ALV的env基因扩增 |
| 1.6 分离株gp85核苷酸序列与各个亚群参考毒株相似性比较 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 病毒分离结果 |
| 2.2 ALV阳性样品env基因扩增结果 |
| 2.3 两个ALV-F分离株gp85核苷酸序列与各个亚群参考毒株相似性比较及遗传进化树分析 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
四、禽白血病病毒囊膜基因gp85片段的克隆与鉴定（论文参考文献）
- [1]表达ALV-J Gp85蛋白的侵入型乳酸菌的构建及免疫保护效果评价[D]. 高可丽. 长江大学, 2021
- [2]一株E亚群禽白血病病毒的分离鉴定及致病性分析[D]. 王萌. 东北农业大学, 2021
- [3]2株J亚群禽白血病病毒毒株的分离鉴定及全基因组序列分析[J]. 郭雨欣,游广炬,李晓齐,高丽,郑世军,王永强. 中国兽医杂志, 2021(06)
- [4]禽白血病病毒单克隆抗体识别抗原表位的鉴定与分析[D]. 闫泽一. 山东农业大学, 2020
- [5]广西不同黄羽肉鸡品系种公鸡中禽白血病病毒分离鉴定及一株重组毒株基因组解析[D]. 崔真毓. 广西大学, 2020(02)
- [6]K亚群禽白血病病毒细胞受体及受体结合域鉴定[D]. 邢立晓. 中国农业科学院, 2020
- [7]河北地区禽白血病流行病学调查与gp85蛋白表达及免疫效果评价[D]. 葛成. 河北科技师范学院, 2020(12)
- [8]南通地区禽白血病的流行病学调查及其净化的初步研究[D]. 赵震东. 扬州大学, 2020
- [9]CD4+CD25+调节性T细胞在J亚群禽白血病病毒诱导鸡免疫耐受中的作用机制研究[D]. 郑高颖. 山东农业大学, 2020(10)
- [10]七彩山鸡F亚群禽白血病病毒的分离与鉴定[J]. 严立福,黎丽珍,郑晓翠,陈建,冯开荣,曹伟胜. 中国家禽, 2020(04)