一、143例Sigma系列起搏器临床分析（论文文献综述）
陈雅婷[1]（2021）在《人诱导多能干细胞向Nkx2.5-窦房结样起搏细胞诱导分化的实验研究》文中提出背景和目的:随着人口老龄化增加,病态窦房结综合征的发病率逐年上升,植入电子起搏器是临床上SSS的主要治疗手段,但存在诸多局限性。本实验应用hiPSC作为新的种子细胞,通过添加外源性小分子物质调控窦房结发育生物学信号通路的阶段性级联反应,促进hiPSC向窦房结样起搏细胞诱导分化,为构建心脏生物起搏器提供新的借鉴和新思路,也为将来采用患者自体体细胞构建的hiPSC诱导分化为SANLPCs奠定理论基础和实验准备,以期实现临床上SSS的个体化治疗。方法:（1）采用mTeSRTM1干细胞培养体系扩增培养hiPSC,应用光学显微镜观察hiPSC的细胞形态学特征、绘制hiPSC的生长曲线和倍增曲线。（2）应用细胞免疫荧光染色法检测干细胞特征性蛋白标志物中转录因子（Oct4、Sox2）和核蛋白（Nanog）的表达来鉴定hiPSC的多能性。（3）特殊条件下,通过添加外源性小分子物质调控窦房结发育生物学信号通路的阶段性级联反应,促进hiPSC向窦房结样起搏细胞诱导分化。（4）应用光学显微镜观察hiPSC诱导窦房结样起搏细胞不同分化阶段的的细胞形态学特征、自发性搏动特征及hiPSC衍生的SANLPCs的细胞形态学特征。（5）运用细胞免疫荧光染色和Western blot检测hiPSC的干细胞特征性标志蛋白中的转录因子（Oct4、Sox2）和核蛋白（Nanog）和hiPSC-SANLPCs的特征性标志蛋白（Nkx2.5、TBX3、TBX18、c TNT）、起搏离子通道（HCN4）及其他相关离子通道（Cav1.2、Cav3.1、RYR2及NCX 1.1）的蛋白分布和表达。（6）利用膜片钳技术,在电流钳模式下检测hiPSC衍生的窦房结样起搏细胞的动作电位（AP）,观察自发性动作电位的最大舒张电位（MDP）、动作电位上升相幅值（APA）、四相自动去极化斜率（DDR）及动作电位时程（APD20、APD50、APD90）;在电压钳模式下检测hiPSC衍生的窦房结样起搏细胞的起搏电流（If）和L型钙电流(ICa,L)及相关离子通道门控机制并绘制电流-电压（I-V）曲线、稳态激活（SSA）曲线、稳态失活（SSI）曲线和失活后恢复（RAI）曲线。运用Ca2+免疫荧光技术检测hiPSC衍生的窦房结样起搏细胞的自发性钙波。结果:（1）在mTeSRTM1干细胞培养体系扩增培养hiPSC,呈圆形或类圆形,具有高的核质比,且核仁显着。细胞增殖良好,倍增时间为24小时,属于快速增长型细胞。hiPSC高表达干细胞特异性蛋白标志物Oct4、Sox和Nanog,具有多向分化的潜能。（2）在特殊条件下hiPSC诱导窦房结样起搏细胞分化的细胞形态学特征表现为细胞由圆形或类圆形向长梭形、三角形及不规则的细胞形态转变;至分化第11天左右出现频率为47.2±3.92次/min的局部自发性搏动。随着诱导分化天数的增加,细胞的搏动频率也随之增加,且分化至第30-60天搏动频率趋于稳定。（3）hiPSC-SANLPCs单细胞形态主要表现为长梭形或三角形,具有自发搏动特性。且不表达Nkx2.5,高表达窦房结细胞特异性标志物TBX3、TBX18、c TNT。（4）hiPSC-SANLPCs可产生类似于窦房结细胞样的自发性动作电位,其中有57.1%（20/35）细胞无任何程序性电流刺激下可产生自发性动作电位,且具有较为典型的窦房结细胞特征。（5）hiPSC-SANLPCs具有起搏电流特征。If呈现内向性,具有电压依赖性,电流幅值或密度随着超极化刺激电位向负移动而增大;同时hiPSC-SANLPCs高表达窦房结细胞特征性通道蛋白HCN4,且主要分布于细胞膜上。（6）hiPSC-SANLPCs在去极化刺激下诱发出ICa,L电流,呈内向性,缓慢激活,缓慢失活,其I-V曲线显示ICa,L呈典型的“倒钟形状”。（7）1Hz起搏刺激时,hiPSC-SANLPCs可产生钙波,且hiPSC-SANLPCs高表达Cav1.2、Cav3.1、RYR2及NCX 1.1离子通道蛋白。结论:（1）在mTeSRTM1干细胞培养体系中扩增培养的hiPSC,细胞增殖良好,属于快速增长型细胞,维持干细胞特有的形态学特征,具有自我更新和多向分化的潜能。（2）hiPSC-SANLPCs呈长梭形或三角形的细胞形态,类似于窦房结细胞;搏动频率随培养时间的增加而增加,分化至30-60天细胞搏动频率趋于稳定。（3）hiPSC-SANLPCs表达高水平的窦房结细胞特异性标志物,表明hiPSC-SANLPCs类似于窦房结细胞。（4）hiPSC-SANLPCs会自发收缩,表现出与体内窦房结细胞相似的动作电位。hiPSC-SANLPCs具有代表膜钟的起搏电流,发现起搏电流及其分子基础;并具有代表钙钟的L型钙电流和胞内钙改变,与正常窦房结细胞相似。
岳炯[2]（2021）在《Rev-Erbα在颞叶癫痫发病机理中的作用及其作为抗癫痫靶点初探》文中进行了进一步梳理背景:全球约1%的人口受到癫痫这一大类反复、无规律且刻板发作的严重大脑疾患的影响。目前有抗癫痫药物（Antiepileptic drugs,AEDs）、切除或姑息性手术、神经调控以及饮食调节等多种治疗方法,但想要达到各型癫痫发作的完全控制仍然任务艰巨。作为成人局灶性癫痫中最严重和最常见的类型,颞叶癫痫（Temporal lobe epilepsy,TLE）是药物难治性癫痫（Drug-resistant epilepsy）的代表之一。尽管来自临床的经验表明,采取例如前颞叶切除术,伴或不伴杏仁核-海马切除术等手术方案对药物难治性TLE患者的治疗效果尚可;但遗憾的是,患者手术率却不那么乐观,而且术后也伴随长期用药、并发症和后遗症等众多问题。在长达数年数十年的病程中,患者及其家庭乃至社会都面临相当大的负担。因此,迫切需要深入剖析癫痫的发病机理,建立更有效的防治策略。TLE的一个典型特征是致痫灶伴有神经元退行性变和死亡以及脑部炎症。一方面,癫痫发作致使神经炎症反应,神经炎症提升神经元的兴奋性,进而又促进癫痫的发生;另一方面,癫痫发作可引起脑部损伤,涉及到神经元凋亡和丢失又与癫痫的发生和进展密切相关。这几者相互加剧、恶性循环,是TLE难治性所在的重要原因之一。Rev-Erbα[也称为NR1D1（核受体亚家族1,D组,成员1）]是一种转录调控抑制性成员,是生物钟节律系统的核心组成部分。越来越多研究证明Rev-Erbα参与调节神经炎症和决定神经元的命运。例如,通过基因和药物手段干预Rev-Erbα后可使神经胶质细胞的增殖活化发生变化,影响一系列炎症介质的产生和释放。另外,在帕金森等疾病中也初步揭示了Rev-Erbα介导神经元凋亡的关键作用。这些强烈提示Rev-Erbα极可能在癫痫过程中发挥作用。因此,本课题研究Rev-Erbα在TLE致痫区的表达和细胞分布,并进一步探讨Rev-Erbα蛋白水平与TLE患者临床变量的相关性。我们还分析了Rev-Erbα的特异性激动剂SR9009治疗匹鲁卡品TLE小鼠模型的效用。方法:采用免疫蛋白印迹（Western blotting）、免疫组织化学染色和免疫荧光标记等方法研究Rev-Erbα在TLE患者和匹鲁卡品急慢性TLE小鼠模型致痫组织中的表达。分析Rev-Erbα蛋白水平与3种临床特征的相关性。接下来,通过Western blotting、免疫荧光标记染色和TUNEL凋亡染色评估SR9009对癫痫持续状态（SE）后7 d小鼠海马神经炎症、神经元凋亡和神经元丢失的影响。采用视频脑电图（VEEG）记录、全细胞膜片钳和行为学研究方法观察SR9009对匹鲁卡品TLE小鼠模型的影响。结果:1.TLE患者颞叶新皮质致痫组织Rev-Erbα表达下调与对照组相比,TLE患者颞叶新皮质标本的Rev-Erbα蛋白水平显着下调（p<0.001）。2.Rev-Erbα蛋白水平与TLE临床变量的相关性Rev-Erbα蛋白水平与术前癫痫发作频率呈负相关（Spearman:r=-0.5523,p=0.0077）。Rev-Erbα蛋白水平与手术年龄（r=-0.09785,p=0.6649）、癫痫病程（r=-0.03336,p=0.8829）无明显相关性。3.Rev-Erbα蛋白在正常人和TLE患者中的分布及比较在对照组中,Rev-Erbα在灰质（GM）内的神经元和白质（WM）内的胶质细胞中显示中度到强度的免疫着色。在TLE患者组,Rev-Erbα在相应区域显示弱免疫着色。通过平均光密度统计分析得出,与对照组相比,TLE组GM和WM中Rev-Erbα的表达显着降低（p<0.001）。免疫荧光双标记实验证实Rev-Erbα与神经元标志物Neu N、星形胶质细胞标志物GFAP以及小胶质细胞标记物Iba1共定位。4.匹鲁卡品急慢性TLE小鼠模型中Rev-Erbα蛋白水平的时间分布匹鲁卡品诱导SE后早期和慢性期,小鼠海马和颞叶新皮质中Rev-Erbα的表达降低（p<0.001或p<0.05）。正常海马Rev-Erbα表达呈24 h节律性振荡,但SE后早期节律性受到干扰,慢性期癫痫小鼠仍存在这种紊乱。5.连续7 d应用SR9009激活Rev-Erbα可抑制SE后海马NLRP3炎症小体活化和炎性细胞因子的产生SR9009连续应用7 d可显着降低SE后海马中NLRP3炎性体相关蛋白（NLRP3、ASC和Caspase1）和炎性细胞因子（IL-1β、IL-18、IL-6和TNF-α）的表达（SR9009处理匹鲁卡品组v.s.溶媒处理匹鲁卡品组;p<0.001或p<0.05）。6.连续7 d应用SR9009可减轻SE后海马星形胶质细胞增生和小胶质细胞增生SR9009连续治疗7 d可显着减少SE后海马CA1和CA3区GFAP阳性星形胶质细胞和Iba1阳性小胶质细胞数目（p<0.001）;而且SR9009能明显降低SE后海马GFAP和Iba1蛋白水平（SR9009处理匹鲁卡品组v.s.溶媒处理匹鲁卡品组;p<0.001或p<0.05）。7.连续7 d应用SR9009可缓解SE后海马神经元凋亡和丢失SR9009连续处理7 d可降低SE后海马CA1和CA3区域TUNEL阳性凋亡细胞数量（p<0.001）;SR9009能明显降低SE后海马凋亡标记物Cleaved-caspase3的蛋白水平（p<0.001）;而且SR9009可挽救SE后海马CA1和CA3区域Neu N阳性神经元数目（SR9009处理匹鲁卡品组v.s.溶媒处理匹鲁卡品组;p<0.001或p<0.05）。8.长期（9 w）应用SR9009减弱TLE小鼠癫痫活动和痫样脑电发放通过记录各组小鼠海马CA1区的脑电发现,SR9009处理匹鲁卡品组小鼠的第一次脑电图（10.31±2.615 v.s.7.038±1.741 d;p<0.01）和电临床自发性发作（17.46±1.963 v.s.14.36±2.404 d;p<0.05）的潜伏期明显长于溶媒处理匹鲁卡品组小鼠。在SE后第9 w（慢性期）,SR9009处理匹鲁卡品组小鼠的脑电图（10.5±3.017 v.s.16.92±4.337次;p<0.01）和电临床自发性发作（5.5±1.732 v.s.9±2次;p<0.01）数量以及脑电发放的振幅（286.5±47.26 v.s.457.2±117.2;p<0.05）和频率（2.167±0.7528 v.s.3.5±1.269;p<0.05）都显着少于溶媒处理匹鲁卡品组小鼠。9.长期应用SR9009降低TLE小鼠海马CA1区神经元兴奋性突触传递在CA1锥体神经元中,和溶媒处理匹鲁卡品组小鼠相比,SR9009处理匹鲁卡品组小鼠m EPSCs的振幅（26.07±4.026 v.s.21.47±3.067 p A;p<0.01）和频率（2.7±0.4192 v.s.2.187±0.4926 Hz;p<0.05）显着降低,其事件间隔和振幅累积概率分布曲线向右移;另外,二组mIPSCs的频率和振幅无差异,事件间隔和振幅累积分布相似（p>0.05）。10.长期应用SR9009改善TLE小鼠社交互动行为通过社会互动实验得出,溶媒处理匹鲁卡品组小鼠在嗅闻和追逐次数以及总的交流时间上明显少于对照组（溶媒处理对照组和SR9009处理对照组;p<0.05,p<0.01或p<0.001）,提示其存在一定程度社交互动障碍。SR9009处理匹鲁卡品组小鼠在嗅闻次数和总的交流时间上均显着多于溶媒处理匹鲁卡品组小鼠（p<0.05）,提示SR9009可在某种程度改善TLE小鼠的社交行为。蔗糖偏好试验测评抑郁样行为未得到阳性结果。结论:上述一系列结果表明致痫区Rev-Erbα的表达减少参与了TLE的致痫过程;激活Rev-Erbα则具有抗神经炎症反应和神经保护作用,进一步减少异常兴奋性放电和传导,从而缓解匹鲁卡品TLE小鼠模型的癫痫发作情况和行为学异常。因此,通过未来更加系统和深入的探索,Rev-Erbα有望成为抗癫痫的新靶标。
周丽[3]（2021）在《miR-221-3p介导电针治疗功能性消化不良大鼠的机制研究》文中研究指明目的本研究以患病率较高、影响较大、耗费卫生医疗资源较多的功能性消化不良（functional dyspepsia,FD）为切入点,结合FD以胃动力障碍为主要病理生理基础的特点,以Cajal间质细胞（interstitial cell of Cajal,ICC）为胃慢波的起搏细胞和微小RNA（micro RNA,NA）能够通过调控靶基因、靶信号通路途径调节细胞的增殖、分化、自噬等细胞效应为前提,探讨NA调控ICC在电针治疗FD大鼠改善其胃动力过程中的作用机制。方法采用SPF级健康成年雄性SD大鼠18只,适应性饲养1周后随机分为空白对照组（control group）、模型组（model group）、电针组（EA group）,每组6只。除空白对照组外,其他两组大鼠均予以多因素应激干预法构建FD模型,造模周期为14天。造模成功后,予以电针干预足三里穴和太冲穴,电针干预周期为10天。电针干预期间,观察各组大鼠的一般情况,并测量具体的体重、饮食量和饮水量。电针干预结束后,采用营养半固体糊对大鼠进行灌胃（2m L/100g）,30分钟后再予以戊巴比妥钠腹腔注射（5mg/100g）依次麻醉大鼠,麻醉成功后对大鼠进行解剖取材,称取每只大鼠的胃全重和胃净重,计算大鼠胃内残留率。将胃称重后,切取部分胃窦组织,采用苏木素-伊红染色观察各组大鼠胃窦组织形态结构;运用透射电镜观察各组大鼠胃窦组织内ICC的超微结构;采用免疫印迹法检测各组大鼠胃窦组织c-kit蛋白的表达水平;运用NA测序筛查电针干预FD大鼠前后差异性表达的NA,并通过双荧光素酶报告基因检测验证差异性表达的-X与c-kit基因（KIT）之间的靶向关系;采用实时荧光定量PCR检测各组大鼠胃窦组织c-kit mRNA和差异性-X的相对表达水平。采用SPF级健康成年雄性SD大鼠30只,适应性饲养1周后随机分为空白对照+空载组（control+NC）、模型+空载组（model+NC）、电针+空载组（EA+NC）、电针+干扰组（EA+-X inhibitor）,电针+过表达组（EA+-X agomir）,每组6只。除空白对照组外,其他各组大鼠均予以多因素应激干预法构建FD模型,造模周期为14天。造模成功后,电针干预足三里穴和太冲穴,电针干预周期为10天;期间将构建的-X过表达和干扰载体,通过尾静脉注射途径注入相对应的各组大鼠。电针干预期间,观察各组大鼠的一般情况。电针干预结束后,采用同前方法计算大鼠胃内残留率。切取部分胃窦组织,采用苏木素-伊红染色观察各组大鼠胃窦组织形态结构;采用免疫印迹法检测各组大鼠胃窦组织CX43、SCF、c-kit、p-Raf/Raf、p-Erk/Erk蛋白的表达水平;采用实时荧光定量PCR检测各组大鼠胃窦组织CX43、SCF、c-kit、Raf、Erk mRNA和-X的相对表达水平。结果1.电针干预对FD大鼠的影响及电针干预前后差异性NA的筛查（1）FD大鼠模型的构建:观察到造模后大鼠体重下降,饮食量和饮水量减少;毛发枯乱发黄、掉毛;大便溏稀,且有较重的酸腐臭味;活跃程度减弱,抓捕反应迟钝,基本无攻击性和防御性;精神疲倦萎靡,状态不佳。对大鼠胃窦组织进行苏木素-伊红染色观察其形态结构未发现明显的器质性病变。（2）电针对FD大鼠一般行为学的影响:在造模前（0d）,三组间大鼠体重、饮食量、饮水量差异均无统计学意义（P>0.05）。造模结束后（14d）,模型组和电针组大鼠体重、饮食量、饮水量均下降,两组间差异均无统计学意义（P>0.05）;模型组、电针组大鼠体重、饮食量、饮水量分别与空白对照组相比较,差异均具有统计学意义（P<0.05）。经过10天的电针干预后（24d）,电针组和空白对照组大鼠体重、饮食量、饮水量显着增长,模型组大鼠体重、饮食量、饮水量也出现增加,但三组间比较,差异均具有统计学意义（P<0.05）。（3）电针对FD大鼠胃动力的影响:模型组和电针组大鼠胃内残留率明显高于空白对照组,而电针组大鼠胃内残留率明显低于模型组,三组间比较,差异均具有统计学意义（F=185.637,P<0.001）。（4）电针对FD大鼠胃窦组织ICC的影响:透射电镜下观察可见空白对照组ICC呈纺锤形或不规则多边形,细胞核较大呈卵圆形,核周边缘呈异染色致密带,细胞质较少,胞质内有丰富的线粒体等细胞器,自噬体少见。模型组ICC超微结构受到破坏,细胞核较大,细胞质内细胞器明显减少,可见明显的自噬体。电针组ICC呈纺锤形或不规则多边形,细胞核较大,细胞质内细胞器较多,线粒体肿胀不明显,自噬体结构不明显。通过免疫印迹法检测发现,模型组和电针组大鼠胃窦组织c-kit蛋白的表达水平明显低于空白对照组,而电针组大鼠胃窦组织c-kit蛋白的表达水平明显高于模型组,三组间比较,差异均具有统计学意义（F=556.283,P<0.001）。（5）电针干预FD大鼠前后差异性表达的NA筛查:总共有18种,其中下调NA有13种,上调NA有5种;通过Ensembl数据库和Target Scan数据库分析发现,差异性表达的18种NA中只有-221-3p与c-kit基因（KIT）的3’UTR存在互补位点。（6）-221-3p和c-kit基因的靶向关系验证:转染c-kit 3’UTR野生型（WT）载体质粒组,-221-3p mimic组的荧光素酶活性明显受到抑制,与-221-3p nc组相比,组间差异具有统计学意义（t=24.595,P<0.001）;转染c-kit 3’UTR突变型（MUT）载体质粒组,-221-3p nc组与-221-3p mimic组的荧光素酶活性比值相比较,差异无统计学意义（t=-0.254,P>0.05）。模型组和电针组大鼠胃窦组织c-kit mRNA的表达水平明显低于空白对照组,但大鼠胃窦组织-221-3p的表达水平明显高于空白对照组。电针组大鼠胃窦组织c-kit mRNA的表达水平明显高于模型组,但大鼠胃窦组织-221-3p的表达水平明显低于模型组。三组间比较,差异均具有统计学意义（Fc-kit mRNA=285.762,Pc-kit mRNA<0.05;F-221-3p=342.916,P-221-3p<0.05）。2.-221-3p介导电针治疗FD大鼠的机制研究（1）FD大鼠模型的构建:观察到造模后大鼠体重下降,饮食量和饮水量减少;毛发枯乱发黄、掉毛;大便溏稀,且有较重的酸腐臭味;活跃程度减弱,抓捕反应迟钝,基本无攻击性和防御性;精神疲倦萎靡,状态不佳。对大鼠胃窦组织进行苏木素-伊红染色观察其形态结构未发现明显的器质性病变。（2）-221-3p靶向调控c-kit基因,对c-kit mRNA表达的影响:模型+空载组、电针+空载组大鼠胃窦组织c-kit mRNA的表达水平均明显低于空白对照+空载组（P<0.001）,而大鼠胃窦组织-221-3p的表达水平明显高于空白对照+空载组（P<0.001）。电针+空载组大鼠胃窦组织c-kit mRNA的表达水平明显高于模型+空载组（P<0.05）,而大鼠胃窦组织-221-3p的表达水平明显低于模型+空载组（P<0.05）。与电针+空载组相比较,电针+干扰组大鼠胃窦组织c-kit mRNA的表达水平明显上升（P<0.001）,而大鼠胃窦组织-221-3p的表达水平明显下降（P<0.05）;与电针+空载组比较,电针+过表达组大鼠胃窦组织c-kit mRNA的表达水平明显下降（P<0.05）,而大鼠胃窦组织-221-3p的表达水平明显上升（P<0.05）;差异均具有统计学意义。（3）-221-3p介导电针对FD大鼠胃动力的影响:模型+空载组、电针+空载组大鼠胃内残留率均明显高于空白对照+空载组（P<0.001）;电针+空载组大鼠胃内残留率明显低于模型+空载组（P<0.001）;与电针+空载组相比较,电针+干扰组大鼠胃内残留率明显下降（P<0.001）,而电针+过表达组大鼠胃内残留率明显上升（P<0.001）,差异均具有统计学意义。（4）各组大鼠胃窦组织内ICC数量的变化:模型+空载组、电针+空载组大鼠胃窦组织c-kit蛋白的表达水平均明显低于空白对照+空载组（P<0.001）;电针+空载组大鼠胃窦组织c-kit蛋白的表达水平明显高于模型+空载组（P<0.05）;与电针+空载组相比较,电针+干扰组大鼠胃窦组织c-kit蛋白的表达水平明显上升（P<0.001）,而电针+过表达组大鼠胃窦组织c-kit蛋白的表达水平明显下降（P<0.001）,差异均具有统计学意义。（5）各组大鼠胃窦组织内ICC之间以及ICC与SMC之间缝隙连接蛋白CX43表达的变化:模型+空载组、电针+空载组大鼠胃窦组织CX43在蛋白和mRNA水平上的表达均明显低于空白对照+空载组（P<0.001）;电针+空载组大鼠胃窦组织CX43在蛋白和mRNA水平上的表达明显高于模型+空载组（P<0.001）;与电针+空载组相比较,电针+干扰组大鼠胃窦组织CX43在蛋白和mRNA水平上的表达明显升高（P<0.001）,而电针+过表达组大鼠胃窦组织CX43在蛋白和mRNA水平上的表达明显下降（P<0.001）,差异均具有统计学意义。（6）各组大鼠胃窦组织SCF/c-kit和Raf/Erk信号通路相关蛋白表达的变化:模型+空载组、电针+空载组大鼠胃窦组织SCF、c-kit、Raf、Erk在蛋白和mRNA水平上的表达均明显低于空白对照+空载组（P<0.05）;电针+空载组大鼠胃窦组织SCF、c-kit、Raf、Erk在蛋白和mRNA水平上的表达明显高于模型+空载组（P<0.05）;与电针+空载组相比较,电针+干扰组大鼠胃窦组织SCF、c-kit、Raf、Erk在蛋白和mRNA水平上的表达明显升高（P<0.05）,而电针+过表达组大鼠胃窦组织SCF、c-kit、Raf、Erk在蛋白和mRNA水平上的表达明显下降（P<0.05）,差异均具有统计学意义。结论1.郭氏夹尾刺激法+不规则饮食法+冰生理盐水灌胃法的多因素应激干预法能够成功构建FD大鼠模型。2.FD模型大鼠存在体重、饮食量和饮水量显着下降,胃排空延迟,胃窦组织内ICC的形态结构异常以及ICC的数量减少。3.电针干预能够有效改善FD大鼠的一般行为学,减少胃内残留,增强胃动力,其可能机制为电针能够改善胃窦组织内ICC的形态结构,增加胃窦组织内ICC的数量。4.电针干预FD大鼠前后差异性表达的NA总共有18种,其中只有-221-3p与c-kit基因（KIT）具有结合位点,并存在直接靶向关系。5.-221-3p靶向调控c-kit基因（KIT）,能够负调节c-kit mRNA的表达。6.干扰-221-3p抑制其靶向调控c-kit基因,能够上调c-kit mRNA的表达,通过激活SCF/c-kit和Raf/Erk信号通路,促进胃窦组织内ICC的增殖及缝隙连接蛋白CX43的表达,增强胃窦组织内ICC之间以及ICC、SMC之间的细胞间通讯,从而增强胃动力,在电针治疗FD过程中发挥作用。
董泉彬[4]（2021）在《基于杂化交联策略的可注射抗菌透明质酸水凝胶的构建及其预防CIED囊袋感染的研究》文中研究表明第1章前言随着老龄化社会的到来,心脏植入式电子装置（Cardiac Implantable Electronic Device,CIED）植入率逐年增加,每年至少有170万患者接受CIED手术,患者的生活质量得到改善。然而CIED的感染率不降反升,已成为临床工作亟待解决的问题。约60-90%CIED感染是由表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌引起。近年来发现多种凝固酶阴性葡萄球菌（coagulase negative staphylococci,Co NS）引起CIED感染的比例在逐渐增加。尽管近年来针对CIED感染做出许多预防措施,但是遗憾的是发病率、住院率和死亡率仍逐年升高。目前预防CIED感染的措施主要包括皮肤准备、抗菌剂冲洗、围术期抗生素使用、Aigis Rx抗菌包膜和其他新兴材料等。抗菌水凝胶主要被分为两大类,第一类是水凝胶直接负载抗菌药物,如纳米金属、抗生素、抗菌肽等,目前在临床应用最广泛的基于银纳米颗粒,已被广泛用于伤口敷料。第二类是构建水凝胶本身的高分子材料具有抗菌性能,如萜类化合物和壳聚糖类有机高分子材料。透明质酸（Hyaluronic Acid,HA）是一种天然碳水化合物聚合物,由于其固有的生物相容性和生物降解性,已被广泛应用于构建水凝胶材料中。首先,HA具有良好的生物安全性及可降解性。其次,HA可以吸收数倍自身体积的水分溶胀,同时能够与细胞膜受体CD44结合,给伤口/切口的愈合提供条件。最后,HA主链上包含羧基和氨基等活性集团,可以方便进行化学和（或）物理交联形成水凝胶。众所周知,物理交联HA水凝胶载体是可注射的,并且表现出良好的通过适应周围组织的重塑能力,但是通常表现出较差的机械性能和在体内的快速降解。相反,化学交联HA水凝胶通常具有机械稳定性和稳定性,但凝胶化后可塑性较差。氯己定（Chlorhexidine,CHX）被认为是一种很有前途的抗菌药物,其优异和广谱的抗菌性能主要归功于结构中含有大量的亚氨基,它可以吸附到各种细菌的胞壁表面的阴离子,或者是破坏细菌壁的化学键,使得细胞内的蛋白转录和翻译过程受阻,最终导致细菌的死亡。同时CHX具有结构稳定、生产便利和刺激性小等特点,所以CHX已经被广泛用于生物医药领域。因此,我们拟构建一种杂化交联策略的抗菌水凝胶,结合化学和物理交联手段,最终用于预防CIED囊袋感染。第2章构建基于透明质酸杂化交联的可注射抗菌水凝胶通过化学交联且部分改进工艺得到了CHA水凝胶,其中以常用的BDDE为交联剂,并且依次经过冻干、研磨、过筛的工艺,核磁氢谱计算出交联密度,成功的合成构建了CHA水凝胶。CHA水凝胶通过SD大鼠囊袋内植入实验验证其降解性能及其在皮下的降解时间约为15天,此降解时间能够很好的覆盖CIED囊袋感染急性感染期,而且不容易引起慢性异物反应。CHA/CHX水凝胶的制备过程及其便利,只需要CHA水凝胶与CHX进行等比例混合即可制备。通过动态振荡、频率依赖性、动态时间扫描、触变性能等检测表征CHA/CHX水凝胶的流变性能。可以发现CHA/CHX水凝胶的G’和G"均表现出类似的非线性流变行为,其值随着扫描频率的增加而增加,表明CHA/CHX水凝胶的微观结构可能相似。不仅如此,在整个频率范围内所有水凝胶的储能模量远高于损耗模量,表明CHA/CHX水凝胶的凝胶状态都能得以维持。然后在恒定频率（1 Hz）和应变振幅（1%）的时间扫描振荡试验下,CHA水凝胶的剪切模量为165Pa,而在CHA-0.1X、CHA-0.3X和CHA-0.5X水凝胶的剪切模量分别为255Pa,311Pa和330Pa。这些结果表明,CHX可以通过静电相互作用使的预交联的HA进行再次物理交联,从而显着的提高CHA水凝胶的力学性能。接着在恒定频率（1 Hz）下,在0%-60%的应变振幅范围内进行动态时间扫描流变实验,得到CHA/CHX水凝胶的瞬时黏度模量。CHA/CHX水凝胶剪切变薄,黏度模量随着应变幅值的增大而逐渐减小。CHA/CHX水凝胶可以通过26G（针头直径为0.46 mm）注射器注射,证明CHA/CHX水凝胶具有较好的剪切变稀性能。选用CHA-0.5X水凝胶,在恒定频率（1 Hz）下,使用动态流变仪在整个范围或0.1%和1000%的交替应变振幅下进一步探索其触变行为,可以观察到CHA/CHX水凝胶在1000%的应变振幅下,水凝胶完全塌陷。在1%和1000%的应变振幅交替下,CHA/CHX水凝胶可以进行坍塌和恢复循环。此结果表明CHA/CHX水凝胶具有良好的剪切变稀和自愈行为。通过扫描电镜表征CHA/CHX水凝胶的微观结构,CHA/CHX水凝胶具有分层叠加的片状结构,并且通过局部放大可以观察到表面被微丝覆盖,表明CHA的羧基与CHX的亚氨基物理交联成功。通过紫外分光光度计表征CHA/CHX水凝胶的释放行为,在最初24小时内含有或是不含有透明质酸酶情况下CHX的累积释放量分别为72.3%和49.4%,在120小时内累积释放量分别达到77.3%和65.8%,能够很好的缓释CHX,且CHX的释放具有透明质酸酶响应性。第3章CHA/CHX水凝胶的安全性评价通过把CHA和CHA/CHX水凝胶与L929细胞进行共培养,通过CCK-8检测细胞的增殖毒性,结果表明CHA/CHX水凝胶组L929细胞的存活率超过90%,通过活死细胞染色,CHA/CHX水凝胶组L929细胞数量未见增减,形态未见明显异常,表明CHA/CHX水凝胶具有良好的细胞相容性。通过把CHA/CHX水凝胶与人红细胞悬液进行共孵育1小时,CHA/CHX水凝胶的溶血率低于5%的生物材料行业国际标准,因此CHA/CHX水凝胶具有良好的血液相容性。通过把CHA/CHX水凝胶注射至昆明小鼠的皮下,14天后CHA/CHX水凝胶注射区域无明显的炎症细胞的浸润,证明CHA/CHX水凝胶具有良好的体内相容性。第4章CHA/CHX水凝胶的体外抗菌性评价通过其革兰氏阳性菌和革兰氏阴细菌抑菌圈大小表示。选用金黄色葡萄球菌代表革兰氏阳性菌,大肠杆菌代表革兰氏阴性菌。PBS、CHA、CHA-0.1X、CHA-0.3X和CHA-0.5X水凝胶分别加入到直径金黄色葡萄球菌或是大肠杆菌固体培养基空隙中,加入PBS和CHA水凝胶都完全没有对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌产生抑菌圈,而CHA-0.1X、CHA-0.3X和CHA-0.5X水凝胶则表现出优异的抑菌效果,并且随着CHX浓度的增高,CHA/CHX水凝胶的抑菌圈越大。CHA-0.1X、CHA-0.3X和CHA-0.5X水凝胶对金黄色葡萄球菌的抑菌圈大小分别为14.4 mm,16.4 mm和16.7 mm。CHA-0.1X、CHA-0.3X和CHA-0.5X水凝胶对大肠杆菌的抑菌圈大小分别为14.3 mm,15.8 mm和16.4 mm,证明CHA/CHX水凝胶释放的CHX对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌具有优异的抑菌作用,且抑菌的效果与CHX的浓度呈现正相关。通过将CHA、CHA-0.1X、CHA-0.3X和CHA-0.5X水凝胶转移至无菌载玻片的表面,PBS作为阴性对照组,金黄色葡萄球菌和大肠杆菌分别转移至PBS,CHA、CHA-0.1X、CHA-0.3X和CHA-0.5X水凝胶的表面。CHA水凝胶表面无杀菌能力。而CHA-0.1X、CHA-0.3X和CHA-0.5X水凝胶表面金黄色葡萄球菌浓度的对数值分别降低了5.4倍、6.5倍和6.5倍,而大肠杆菌浓度的对数值分别降低了4.1倍、4.2倍和6.1倍,表明CHA/CHX水凝胶表面不仅能够接触性杀灭革兰氏阳性菌还能杀灭革兰氏阴性菌,并且CHA/CHX水凝胶表面抗菌性能主要和CHA/CHX水凝胶中CHX的浓度相关,其中CHA-0.5X水凝胶的抗菌性能最佳。通过扫描电镜观察CHA/CHX水凝胶对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌细菌壁膜结构的影响。许多的研究证实CHX主要通过破坏细菌膜的完整性。将金黄色葡萄球菌和大肠杆菌滴加在CHA-0.5X水凝胶和琼脂培养基的表面,在37℃恒温细菌培养箱中培养4小时并经过处理后观察金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的结构。CHA-0.5X水凝胶表面的金黄色葡萄球菌和大肠杆菌细胞膜完整性破坏,内容物外流,且细菌的形态发生较大的改变,而琼脂凝胶表面的细菌保留金黄色葡萄球菌和大肠杆菌原形态,表明CHA/CHX水凝胶对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌壁膜结构破坏引起细菌死亡。通过使用活/死染色评价CHA/CHX水凝胶的抗菌性能。将金黄色葡萄球菌和大肠杆菌转移至琼脂培养基或是CHA-0.5x水凝胶的表面,在37℃细菌恒温培养箱孵育1小时,经过SYPO9和碘化丙啶染色后通过共聚焦显微镜观察。在共聚焦荧光显微镜下可观察到,不论是大肠杆菌,还是金黄色葡萄球菌,琼脂培养基的表面几乎都为绿色荧光,只有极少量的红色荧光,表明存在金黄色葡萄球菌和大肠杆菌都是存活状态,但是CHA/CHX水凝胶组几乎为红色荧光,未见明显的绿色荧光,表明其表面都是死亡的金黄色葡萄球菌和大肠杆菌,表明CHA/CHX水凝胶具有优异的抗菌性能。第5章CHA/CHX水凝胶的预防CIED囊袋感染的效果评价通过构建CIED囊袋感染模型时在每只实验兔背部都制作了两个互不相通的囊袋,并且都有植入起搏器和细菌悬液。当只植入起搏器时,囊袋局部呈现干燥且无脓性分泌物,而当囊袋内植入起搏器和细菌悬液时,起搏器的周围充满了脓性分泌物,同时起搏器的表面覆盖一层粘性膜状物质,可以证明CIED囊袋感染模型被成功构建。通过装在无菌注射器中的CHA-0.5X水凝胶可以非常便利的应用。首先,制作适宜大小起搏器的囊袋并将起搏器植入其中。然后,用26G注射器将CHA/CHX水凝胶直接注入CIED囊袋内,通过轻揉捏囊袋使其均匀的塑型于起搏器周围。最后通过缝合封闭手术部位。从整个CHA/CHX水凝胶操作使用过程可以发现很容易地通过注射器和可赋型的方式应用到CIED囊袋中,并且完全不需要扩大囊袋容积或是延长手术切口长度。并且与未植入CHA/CHX水凝胶对比,CHA/CHX水凝胶组缝合伤口后不存在过大的张力,不会增加手术切口裂开的风险,证明了CHA/CHX水凝胶具有良好的应用便利性及可塑形性。通过植入第7天重新切口皮下囊袋观察CHA-0.5x预防起搏器囊袋感染情况。无论是植入起搏器和细菌悬液,还是植入起搏器、细菌悬液和CHA水凝胶,囊袋和起搏器周围都可看到大量脓性分泌物,起搏器表面有粘性膜状物质附着。然而,在植入了起搏器,细菌悬液和CHA-0.5x水凝胶后,起搏器周围几乎没有脓性分泌物。此结果证明在体内CHX也能够从CHA/CHX水凝胶中释放出来杀灭金黄色葡萄球菌,起到预防CIED囊袋感染的效果。通过收集各组起搏器周围组织进行HE染色,可以从组织层面来评价CHA/CHX水凝胶的预防CIED囊袋感染效果。不论是起搏器和细菌悬液,还是起搏器、细菌悬液和CHA水凝胶组,胸膜肌层表面的筋膜层都附着大量的渗出液,并且其中有大量的炎性细胞浸润,表明有大量的细菌浸润。而在起搏器、细菌悬液和CHA-0.5X水凝胶组筋膜层表面无明显渗出物,未见细菌浸润,在组织细胞层面证明CHA/CHX水凝胶具有较好的体内抗菌性能。通过收集起搏器周围组织进行囊袋组织细菌定量,可以定量的评价CHA/CHX水凝胶的抗菌效能。称取各组囊袋周围组织的重量,通过匀浆法得到细菌悬液,然后细菌梯度稀释和涂板法得到各组的细菌量,最后通过细菌量与重量的比值取对数作为纵坐标。不论是起搏器和细菌悬液,还是起搏器、细菌悬液和CHA水凝胶组囊袋内组织中有大量的金黄色葡萄球菌,在细菌组和CHA水凝胶组细菌量与重量比值的对数为8.13和8.79,而在起搏器、细菌悬液和CHA-0.5X水凝胶组仅能培养出极少量的金黄色葡萄球菌,CHA/CHX水凝胶组细菌量与重量比值的对数为1.98,CHA-0.5X水凝胶组的金黄色葡萄球菌菌落数远低于起搏器、细菌悬液组,能够定量证明CHA/CHX水凝胶可以杀灭金黄色葡萄球菌,起到预防CIED囊袋感染的目的。通过收集细菌组、CHA水凝胶组和CHA/CHX水凝胶组起搏器进行活/死细菌染色分析,可以反映CHA/CHX水凝胶对金黄色葡萄球菌的杀灭效果。选用了SYTO 9和碘化丙啶分别用来进行活/死细胞染色,在共聚焦荧光显微镜下,不论是起搏器和细菌悬液,还是起搏器、细菌悬液和CHA水凝胶组植入装置的表面几乎都为绿色荧光,只有极少量的红色荧光,表明起搏器的表面存在大量存活的金黄色葡萄球菌,但是CHA/CHX水凝胶组几乎为红色荧光,表明有大量死亡的金黄色葡萄球菌,证明了CHA/CHX水凝胶在体内能够很好的杀灭金黄色葡萄球菌,能够有效的预防CIED囊袋感染。第6章总结本文成功构建了一种杂化交联策略的HA抗菌水凝胶,结合化学和物理交联,其具有良好的生物相容性,可有效预防CIED囊袋感染的发生,为后期的抗菌水凝胶临床转化和应用提供理论基础。
杜娟娟[5]（2020）在《LncRNA TCONS-00106987在实验性心房颤动中对心房电重构的影响及作用机制》文中研究说明研究背景心房颤动（atrial fibrillation,简称房颤,AF）是临床上最常见的一种快速性心律失常,其发病率和致死率相对其他疾病较高。Framingham流行病学研究表明,房颤的人群患病率达到0.5%,且随着年龄的增长,在60岁及80岁以上人群中,房颤的患病率分别上升到6%和8.8%。长期房颤可引起严重的并发症,房颤患者的心力衰竭发生率较正常人群增加3倍,卒中的发生风险是正常人群的5倍。目前临床上针对房颤的主要治疗手段包括内科药物治疗、外科迷宫手术以及导管射频消融等,尽管这些治疗手段具有相应的疗效,但也有各自的弊端,如药物难以耐受、手术创伤大、复发率较高等,进而难以完全满足房颤患者的治疗需求。房颤是由多种内部及外部因素共同作用引起的疾病,发病机制十分复杂,目前研究认为,心房重构是房颤发生和维持的重要基础。房颤时的心房重构主要包括心房电重构、结构重构以及神经重构。在房颤发生的早期,心房重构主要表现为离子通道和电生理的变化,也就是心房的电重构。其中离子通道的变化主要包括L型钙电流（ICaL）密度减少、内向整流钾电流（IK1）密度增加及缝隙连接半通道异常分布。电生理变化则主要表现为心、房有效不应期（ERP）缩短以及动作电位时程（APD）的缩短。针对房颤心房电重构机制的深入研究,有助于进一步改善房颤的防治。长链非编码 RNA（long noncoding RNA,lncRNAs）是一类长度从 200nt 到100kb、没有蛋白质编码潜能的异质性转录本。大量研究表明,lncRNAs可能参与多种生物学过程,包括细胞的增殖、分化以及细胞周期的调控和凋亡等。力能角度看,lncRNAs可以通过多种机制参与基因表达和细胞活动,包括染色质重塑、结合转录因子、竞争性结合microRNAs（miRNAs）、mRNA的选择性剪接和翻译调控等。研究发现,lncRNAs的调节失调与包括心肌梗死、扩张型心肌病、心力衰竭等在内的许多心脏疾病有关,这表明它们有可能成为治疗的靶点和/或生物标志物。然而,关于lncRNAs在房颤中的潜在作用及机制的研究相对较少。本研究拟探究lncRNAs在房颤发生中的作用及机制。研究分为两部分,第一部分首先通过心房快速起搏建立实验性房颤兔模型,通过对房颤及对照组兔心房肌行二代高通量测序,筛选出差异表达的lncRNAs及mRNAs,并进行生物信息学分析,进一步筛选出与心房电重构相关的lncRNAs。选定目标lncRNA后,通过功能获得及功能缺失实验,研究目标lncRNA在房颤中的作用。第二部分则通过生物信息学分析及数据库预测目标lncRNA可能的作用机制,然后通过一系列的体内及体外实验,确定目标lncRNA发挥作用的具体机制,以期为房颤的分子发病机制及寻找潜在治疗靶点提供线索与依据。第一部分LncRNAs在实验性心房颤动中的作用研究研究方法1.兔右心房快速起搏建立实验性房颤动物模型12只正常成年新西兰大白兔随机分为房颤组和对照组（n=6）,房颤组通过右侧颈静脉植入心脏起搏器（600次/分）持续快速起搏,对照组仅植入起搏器,不进行起搏,7天后检测各组心房ERP及房颤诱发率。2.二代高通量测序筛选差异表达的mRNAs和lncRNAs分别提取两组兔右心房肌的总RNAs进行二代高通量测序,检测各组mRNAs及lncRNAs的表达量,筛选出存在显着差异表达的mRNAs和lncRNAs。3.生物信息学分析筛选与房颤心房电重构相关的目标lncRNA对差异表达的mRNAs行GO（Gene Ontology）富集分析与KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）通路分析,并在此基础上对差异表达的lncRNAs进行靶基因预测、共表达分析、组织特异性分析等,综合所有结果筛选出与心房电重构相关的显着差异表达目标lncRNA。4.构建目标lncRNA的过表达及沉默慢病毒并进行体内感染将lncRNA TCONS-00106987的shRNA克隆到慢病毒表达载体中,同时合成过表达lncRNATCONS-00106987的慢病毒,使用阴性对照慢病毒控制脱靶效应和非特异性效应。新西兰大白兔15只随机分为3组,开胸后将1×107个对应病毒颗粒注射到心房10个不同部位。分别于感染前和感染后14天测定心房ERP和房颤诱发率。比较慢病毒感染前后心房电生理的变化。研究结果1.通过快速右心房起搏,成功建立了房颤兔模型。起搏7天后,房颤组心房ERP较起搏前显着缩短,房颤诱发率增加,而对照组心房ERP及房颤诱发率较之前无显着改变;2.通过二代高通量测序,筛选出1364个差异表达的lncRNAs,其中1 1 10个lncRNA转录本下调,254个lncRNA转录本上调,同时筛选出956个差异表达的mRNAs,其中395个下调,561个上调。通过对差异表达基因行GO及KEGG分析,以及对差异表达的lncRNAs行靶基因预测等,发现lncRNA TCONS-00106987 在房颤组表达量显着上调并初步推测与心房电重构相关,选取 lncRNA TCONS-00106987作为目标lncRNA进行深入研究;3.对兔心房感染目标lncRNA TCONS-00106987的过表达、沉默及阴性对照慢病毒后,lncRNA TCONS-00106987过表达组在感染14天后心房ERP显着缩短,房颤诱发率明显增加;lncRNATCONS-00106987沉默组心房ERP较感染前延长,房颤诱发率下降;阴性对照组心房ERP及房颤诱发率较感染前无明显变化。研究结论1.实验性房颤兔右心房发生了电生理改变,心房肌中lncRNAs存在特征性表达;2.房颤时心房肌中差异表达的mRNAs在特定的功能及通路上存在富集,差异表达的lncRNAs与差异表达的mRNAs之间存在广泛的共表达,提示lncRNAs可能以多种方式参与房颤的疾病过程;3.LncRNA TCONS-00106987在实验性心房颤动兔心房中表达增高,过表达lncRNA TCONS-00106987可以缩短心房ERP,增加房颤的诱发率。证明房颤时心房肌中高表达的lncRNA TCONS-00106987可以促进心房电重构的发生。第二部分LncRNA TCONS-00106987影响房颤心房电重构的机制研究研究方法1.对lncRNATCONS-00106987进行生物信息学分析,寻找潜在作用靶点通过cis-、trans-靶基因预测及数据库比对等,寻找与lncRNA TCONS-00106987存在共表达或共同结合位点等关系的靶基因及miRNA,分析lncRNA TCONS-00106987通过何种机制发挥作用。2.双萤光素酶报告基因验证作用靶点将野生型和突变型 KCNJ2 的 3’UTR 及 lncRNATCONS-00106987 与 miR-26可能的结合位点克隆到萤光素酶载体中。将萤光素酶载体分别与miR-NC或miR-26 mimics共转染,使用发光检测仪检测各组萤光素酶的信号值。3.LncRNATCONS-00106987过表达及沉默慢病毒体内体外感染原代心肌细胞分别感染阴性对照慢病毒、TCONS-00106987过表达慢病毒、TCONS-00106987沉默慢病毒,感染完成后提取RNA及蛋白检测靶基因的表达量变化。4.LncRNATCONS-00106987过表达及miR-26过表达慢病毒共同感染将lncRNA TOCNS-00106987过表达慢病毒及miR-26过表达慢病毒共同对原代心肌细胞及兔心房肌进行共同感染,检测感染前后心房电生理、靶基因变化,并使用膜片钳检测电流密度的变化。研究结果1.通过对lncRNA TCONS-00106987序列全长进行数据库比对,发与心房电重构相关的基因KCNJ2是lncRNA TCONS-00106987的邻近基因。且过表达lncRNA TCONS-00106987后,KCNJ2的mRNA及蛋白表达量均上调,沉默lncRNA TCONS-00106987 后则相反,提示 KCNJ2 为 lncRNA TCONS-00106987的靶基因;2.LncRNA TCONS-00106987和KCNJ2都与miR-26存在相同的结合位点。双萤光素酶报告基因分析结果表明,miR-26抑制lncRNA TCONS-00106987及KCNJ2 3’UTR野生型质粒报告基因产生的信号,而突变型TCONS-00106987和KCNJ23’UTR质粒的报告信号不受影响,表明miR-26可以通过我们预测的点与lncRNATCONS-00106987及KCNJ2结合并发挥作用;3.与阴性对照组相比,体内共同感染lncRNA TCONS-00106987过表达及miR-26过表达慢病毒组,KCNJ2 mRNA及蛋白表达量均无显着增加,心房ERP无显着缩短,房颤诱发率无显着上升;原代心肌细胞共同感染lncRNATCONS-00106987过表达及miR-26过表达慢病毒组,KCNJ2 mRNA及蛋白表达量均无显着上调,膜片钳IK1电流密度无显着增加。表明lncRNA TCONS-00106987竞争性结合miR-26调节靶基因KCNJ2的表达,参与心房电重构。研究结论1.KCNJ2的表达量受lncRNATCONS-00106987表达水平的调控,电重构相关基因 KCNJ2 是 lncRNATCONS-00106987 的靶基因;2.双萤光素酶报告基因结果证明lncRNA TCONS-00106987/miR-26与miR-26/KCNJ2之间相同的结合位点为三者之间相互作用的直接靶点;3.过表达miR-26可以逆转lncRNATCONS-00106987过表达所引起的KCNJ2表达量上调及心房电生理的改变,证实房颤时心房肌中高表达的lncRNA TCONS-00106987在体内及体外实验中均可通过竞争性结合miR-26,减弱miR-26 对靶基因 KCNJ2 的抑制作用,上调 KCNJ2 的表达,从而促进心房的电重构,导致房颤易发。
杨伟伟[6]（2020）在《转录组分析揭示MPTP/p诱导的进行性帕金森模型小鼠神经退变的分子调节机制》文中研究指明目的帕金森病（Parkinson’s disease,PD）是一种由多种复杂致病因素引起的神经退行性疾病。1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶/丙磺舒（MPTP/p）诱导的进行性PD小鼠是公认研究PD的经典模型,但其分子调节机制尚不清楚。本研究旨在基于转录组测序平台,系统性研究MPTP/p诱导的进行性PD小鼠模型制备过程中神经退行性变的动态分子变化,拟从转录水平探讨进行性PD模型小鼠中脑黑质神经退变过程中的分子调节机制,为探寻潜在的PD药物靶点提供理论依据。方法1、建立MPTP/p诱导的进行性PD小鼠模型。参照先前研究构建MPTP/p进行性PD模型[1],选取12周龄的C57BL/6J小鼠,随机分成模型组和对照组,模型组腹腔注射MPTP（25 mg/kg）和丙磺舒（250mg/kg）,对照组腹腔注射生理盐水,每周两次,历时5周,共计注射10次。正常小鼠及腹腔药物注射3次、6次以及10次后,采用嗅觉实验、平衡木实验等,检测小鼠非运动和运动功能变化。同时,通过TH免疫荧光检测多巴胺能神经元变化,评估模型制备情况。2、分离模型组和对照组特定时间点（注射3次、6次、10次后）小鼠以及正常小鼠中脑黑质,提取总RNA,经反转录、扩增,利用BGI-500平台进行组织测序。经数据质控、基因组比对、基因定量、差异表达基因分析,筛选MPTP/p诱导的进行性PD小鼠模型过程中各时间点模型组相比对照组的差异表达基因;基于表达趋势分析,将差异基因按表达趋势进行分类;基于超几何分布检验,对各时间点差异基因进行KEGG pathway和GO功能富集分析;采用基因集富集分析（GSEA）研究“帕金森病”基因集在各时间点富集情况;最后采用qRT-PCR方法来验证RNA-seq数据中基因表达的准确性。结果（1）行为学实验结果表明,MPTP/p诱导的进行性PD模型小鼠随着MPTP/p注射次数的增加,嗅觉和运动功能逐渐下降,在第10次注射后小鼠行为学指标显着下降（p<0.01）;（2）TH免疫荧光结果显示,随着MPTP/p注射次数的增加,MPTP/p诱导的进行性PD模型小鼠的TH阳性细胞数量逐渐减少,在第10次注射后TH阳性细胞数量降至最低（p<0.01）;（3）各时间点差异基因KEGG Pathway和GO功能富集结果显示,MPTP/p诱导的进行性PD模型小鼠的转录应答可分为三个阶段:“应激反应期”维持微环境的稳态,“神经退变前期”表现出显着的MPTP/p细胞毒性和多巴胺能神经元的逐渐变性,“神经退变期”反映了多巴胺能神经元的显着损伤和凋亡;（4）MPTP/p注射的第3和第6次,神经胶质细胞对多巴胺能神经元具有一定的神经保护作用,但在第10次MPTP/p注射后,胶质细胞在氧化应激引起的PD和组织损伤中起促进作用;（5）本研究还揭示了 MPTP/p诱导的进行性PD模型小鼠中脑黑质在各个阶段都呈现出独特的分子变化模式,MPTP/p第3、6次注射后,神经营养信号通路、ECM-受体相互作用、氧化磷酸化、细胞凋亡和程序性坏死等通路功能增强,可能与PD的发生发展有关。结论通过RNA-seq初步探讨了 MPTP/p诱导的进行性PD模型小鼠的神经退变过程,揭示了模型的分子调控与生物表型之间的规律和网络关系。MPTP/p诱导的进行性PD小鼠的转录应答可能反映三个阶段:应激反应期、神经退变前期和神经退变期,最终导致多巴胺能神经元的丢失。在早期阶段,神经营养相关基因水平升高,这可能从一定程度上解释多巴胺能神经元在这一阶段并未出现显着减少的原因。基因的动态变化涉及神经营养信号通路、ECM-受体相互作用、氧化磷酸化、凋亡、程序性坏死和多巴胺能突触等通路。本研究为理解帕金森病的疾病进程提供了更广泛的转录水平的动态分子变化数据,并为研究疾病潜在的治疗靶点提供了更全面的理论知识。
李文琪[7]（2020）在《昼夜节律性振荡的内源性过氧化氢对生物钟的调控作用》文中提出生物钟是一种进化上保守的计时机制,它使得生物体能够预测环境变化并调整它们的行为、生理以及生化反应以适应环境。目前认为,生物钟运行的分子机制是转录-翻译负反馈环路（transcriptional translational feedback loops,TTFLs）,主要是由正性调控元件CLOCK和BMAL1,以及负性调控元件PER（period）和CRY（cryptochrome）等转录因子组成,它们之间的相互作用构成了一个自我维持的负反馈环路。然而,以过氧化物酶（peroxiredoxin,PRDX）氧化形式的振荡为代表的非转录依赖振荡现象的发现引起人们对昼夜节律分子机制的重新思考,但是氧化还原系统是否能够直接参与昼夜节律的调控还不清楚。在本研究工作中,我们发现由昼夜节律性的内源性过氧化氢（hydrogen peroxide,H202）介导的CLOCK蛋白的氧化还原修饰,在氧化还原振荡与TTFLs之间建立了更为直接且重要的联系。首先,在哺乳动物中,我们发现无论是在培养的细胞还是在小鼠的肝脏组织中,内源性H202的水平呈现为近日节律性振荡。为了寻找H2O2的振荡与TTFLs之间的直接耦合点,我们采用catTFRE（concatenated tandem array of consensus TF response elements）的方法对在体内能够感受H2O2调节的转录因子进行筛选,鉴定到TTFLs核心转录因子CLOCK的DNA结合活性能够被H202显着激活,并且CLOCK蛋白的氧化还原状态呈现昼夜节律性振荡的形式,其下游钟控基因的mRNA水平能够被H202处理显着上调。为了探究H2O2介导的氧化还原修饰所发生的位点,我们对CLOCK蛋白N-末端的8个半胱氨酸残基进行了点突变和质谱实验,发现195位半胱氨酸（C195）是对于H2O2最敏感的半胱氨酸之一。为了确定C195是否介导体内CLOCK蛋白氧化还原状态的节律性振荡,我们使用CRISPR/Cas系统构建了半胱氨酸突变为丝氨酸（C195S）点突变小鼠（Clock 95S）,分别检测了野生型小鼠与C195S点突变小鼠的成体成纤维细胞中（mouse adult fibroblasts,MAFs）CLOCK蛋白的氧化还原状态,发现在ClockC195S-MAFs中其节律性发生明显改变,表明CLOCK蛋白的C195位点介导了体内CLOCK蛋白氧化还原状态的节律性振荡。接下来探究了CLOCK蛋白的氧化还原修饰对其蛋白质功能有何影响,通过对CLOCK/BMAL1的晶体结构进行分析,发现C195位于CLOCK与BMAL1形成异二聚体的界面上,在C195上发生的氧化还原修饰可能会影响CLOCK与BMAL1之间的相互结合。为了验证以上推测,我们采用WT-CLOCK、C195S-CLOCK与BMAL1纯化蛋白进行了一系列体外的生化实验,发现H202处理后能够显着增加WT-CLOCK/BMAL1之间的结合能力以及其与G-Box探针之间的结合能力,而对于C195S-CLOCK/BMAL1却没有明显的影响。综上所述,CLOCK蛋白上氧化还原敏感的195位半胱氨酸能够影响CLOCK/BMAL1的二聚形成以及其转录活性。而且与WT-MAFs相比,ClockC195S-MAFs中CLOCK下游钟控基因（clock control genes,CCGs）的转录振荡水平以及模式都发生了改变。对细胞节律的检测也进一步证实了 CLOCK中氧化还原敏感的195位半胱氨酸残基对生物节律的重要性。通过以上的研究发现,我们得到结论,由昼夜节律性振荡的H2O2介导的CLOCK蛋白的节律性氧化修饰,将氧化还原振荡与昼夜节律转录时钟机制联系在一起,共同构成细胞内基本的计时成分。这些发现表明,哺乳动物中内源性H2O2水平的昼夜节律性振荡具有重要的生物学功能,并且CLOCK蛋白节律性的氧化还原修饰在联结氧化还原信号振荡和TTFLs之间起着关键作用。
张威[8]（2020）在《基于氧化锌和硫化亚铜修饰的多功能生物医用复合材料的制备及其在抗菌消炎领域的应用》文中进行了进一步梳理本系列工作主要探讨利用功能型无机纳米颗粒（氧化锌和硫化亚铜）,结合有机高分子材料基底（乳胶和果胶）,制备生物复合材料并将其应用在抗菌消炎领域。本论文的主要工作内容如下:第一章:介绍生物医用材料、乳胶和果胶、纳米氧化锌和硫化亚铜的研究背景、物理化学性质以及在生物医学领域的应用;最后,提出了本论文的选题依据和创新点。第二章:随着心脏植入电子装置（起搏器）的使用量的不断增加,其并发症也逐年增加。通过分析起搏器在植入不同时期产生炎症的最新统计报告,我们提出了一个新的假设,即除了细菌感染以外,起搏器在周围软组织中频繁晃动引起的长期刺激可能是产生炎症的重要隐患。随后,通过一个有趣的动物摇动模型首次初步验证了这一假设。此外,为解决此问题,我们开发了一种具有抗菌、缓冲和慢回弹特性的记忆乳胶泡沫-氧化锌（LFZ）复合材料。随后的研究表明,这种良好生物相容性的LFZ可以从根本上减少细菌和摇晃引起的囊袋炎症的发生率。该研究为起搏器抗炎策略的发展提供了新的方向。第三章:传统创面敷料由于不能有效促进创面愈合和抵抗组织粘连,治疗效果不理想。本文设计了一种由钙离子交联的修饰有硫化亚铜和氧化锌纳米粒子的果胶复合膜。首先,果胶膜基底通过吸收组织渗出液保持伤口清洁。随着硫化亚铜和氧化锌纳米颗粒的修饰,使该膜具有快速灭菌和广谱抗菌的能力。其次,体外和体内实验均验证了果胶复合膜释放的铜离子和锌离子,能够促进内皮细胞和成纤维细胞的增殖,迁移和分化,微血管生成及胶原蛋白的沉积,从而加速伤口愈合;值得注意的是,在乙二胺四乙酸（EDTA）的作用下,可以实现果胶复合膜的快速溶解,达到无痛原位清除的效果,从而避免了组织与敷料粘连所造成的二次损伤。
孙乙[9]（2020）在《柔性植入式燃料电池电极的制备及其用于自发电神经导管的研究》文中提出体内能量转换器件是指能够将人体内机械能、热能或化学能等能量转换成电能的器件。体内能量转换器件的结构设计、制备以及临床应用是近年来的研究热点,尤其是将体内能量转换器件用于组织修复具有很好的临床应用价值,同时也具有挑战性。植入式葡萄糖燃料电池利用人体内的葡萄糖和氧气产生电能,可避免电池能量耗竭的问题,随着电子器件小型化、低功耗化发展而受到人们的广泛关注。本论文针对近年来快速发展的柔性植入式电子器件的供能问题,以具有良好生物相容性以及优异柔韧性的细菌纤维素（bacterial cellulose,BC）为基体,通过分别复合葡萄糖氧化和氧还原非生物催化剂,制备了柔性植入式非生物葡萄糖燃料电池的阳极和阴极,并研究了电极在生理条件下的葡萄糖氧化及氧还原性能。此外,针对目前电刺激在周围神经修复应用中存在的外部电极引起疼痛、感染以及刺激不精确的问题,我们将植入式燃料电池与导电神经支架结合,首次提出并制备了可利用人体内葡萄糖和氧气的氧化还原反应产生电刺激的自发电神经支架,为电刺激在神经修复中的应用提供了全新的方案。以BC为基体,通过复合纳米PtAu合金催化剂,制备了 BC/PtAu柔性葡萄糖氧化膜电极。通过硼氢化钠还原氯铂酸、氯金酸,在BC膜上负载了不同含量的纳米PtAu合金颗粒;PtAu纳米颗粒均匀分布在BC纳米纤维网络中,BC/PtAuⅡ中的纳米颗粒平均粒径为23.0±3.2 nm。BC/PtAuⅡ有良好的葡萄糖氧化催化活性,同时在体液氧浓度条件下具有良好的耐氧性;其细胞毒性与BC接近。此外,BC/PtAuⅡ电极具有优异的柔韧性,拉伸强度为56.5±12.7 MPa,断裂伸长率为（17.2±3.5）%,可用作柔性植入式葡萄糖燃料电池的阳极。以BC为基体,通过聚多巴胺（polydopamine,PDA）辅助非电金属化,制备了 BC/PDA/Ag柔性氧还原膜电极。PDA均匀复合在BC纤维上,有效提高了纳米银的负载量。BC/PDA/Ag的导电率为2.72±0.13 s cm-1,比BC/Ag提高了两个数量级。BC/PDA/Ag氧还原催化活性、催化稳定性均比BC/Ag显着提高。此外,BC/PDA/Ag具有良好的柔韧性以及抗葡萄糖干扰能力,可用作柔性植入式葡萄糖燃料电池的阴极。以BC为基体,通过复合聚吡咯（polypyrrole,PPy）作为导电基底,然后复合阴、阳极催化剂,制备了二维自发电神经支架。首先通过氧化聚合法在BC纳米纤维上原位复合PPy,制备了 BC/PPy导电基底膜;经过优化的BC/PPy断裂强度达41.2±4.7 MPa,断裂伸长率为15.4±1.8%,导电率为1.51±0.05 s cm-1。然后通过电化学沉积法在BC/PPy导电基底膜的一端复合纳米铂作为阳极,通过浸渍吸附法在另一端复合氮掺杂碳纳米管（nitrogen-doped carbon nanotubes,N-CNTs）作为阴极,制备了 Pt-BC/PPy-NCNTs二维自发电神经支架。此外,以静电纺丝聚己内酯（polycaprolactone,PCL）取向纤维膜为基体,设计制备了 Pt-hPCL/PPy-NCNTs三维自发电取向导电神经导管。在含5 mM葡萄糖的磷酸盐缓冲液（phosphate buffer saline,PBS）中,Pt-BC/PPy-NCNTs 二维自发电神经支架阴极和阳极之间的电势差为350±28 mV;在细胞培养基（Dulbecco’s modified eagle medium,DMEM）中,阴极和阳极之间可以保持 6 h以上100 mV的电势差。采用背根神经节（dorsal root ganglia,DRG）培养在体外研究了Pt-BC/PPy-NCNTs自发电神经支架对轴突再生的作用;结果表明,与BC/PPy导电支架相比,Pt-BC/PPy-NCNTs自发电支架明显促进了轴突的生长。采用大鼠坐骨神经缺损模型在体内研究了 Pt-BC/PPy-NCNTs自发电神经支架对神经再生的作用;步态分析、再生神经组织切片苏木精-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色、免疫荧光染色及TEM观察结果表明,与BC/PPy导电支架相比,Pt-BC/PPy-NCNTs自发电支架促进了大鼠坐骨神经再生。
费俊杰[10]（2020）在《钠-葡萄糖共转运载体1（SGLT-1）在促进心肌肥厚中作用机理的研究》文中研究表明[目 的]探究钠-葡萄糖共转运载体1（SGLT-1）在不同条件下导致心肌肥厚的作用机理。[方 法]第一部分:收集2017年9月到2019年4月在昆明医科大学附属心血管病医院/云南省阜外心血管病医院因“肥厚型梗阻性心肌病”行改良Morrow手术的病例作为实验组,术中取部分肥厚的室间隔组织。同期选择因“风湿性二尖瓣病变”行二尖瓣置换手术的病例作为对照组,术中取部分二尖瓣乳头肌组织。实验组、对照组各35例,组织标本HE染色观察心肌细胞镜下形态,Western Blot检测并比较两组SGLT-1表达情况。第二部分:构建两种不同类型的心肌肥厚小鼠模型。模型一:后负荷增加引起的心肌肥厚模型,采用高钠饮食诱发高血压。模型二:药物性心肌肥厚模型,尾静脉注射吡柔比星诱发心肌肥厚。两种模型分别设立对照组。模型建立成功后测量血压、心功能等指标后处死,取左心室心肌组织称重,并用Western blot测定组织中 SGLT-1、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR、P70S6K1、p-P70S6K1 表达量。第三部分:构建两种大鼠心肌细胞H9c2模型。模型一:血管紧张素Ⅱ诱导。实验组1:培养液+AngⅡ（1mmol/L）培养72小时;实验组2:培养液+AngⅡ（10mmol/L）培养72小时;实验组3:培养液+AngⅡ（100mmol/L）培养72小时;空白对照组:普通培养液培养72小时。模型二:吡柔比星诱导。实验组:吡柔比星5μmnol/L处理24小时。对照组:普通培养液培养24小时。MTT法检测细胞活性。镜下观察测量各组细胞形态与直径。Western Blot检测各组细胞SGLT-1、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR、P70S6K1、p-P70S6K1 蛋白含量。q-PCR检测模型二细胞中Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-9凋亡因子的表达情况。[结 果]1.肥厚型梗阻性心肌病患者室间隔组织中SGLT-1蛋白含量高于对照组（风湿性二尖瓣病变患者二尖瓣乳头肌组织）,P<0.05。2.高钠饮食导致的高血压小鼠心肌组织中SGLT-1蛋白含量高于对照组,p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR、p-P70S6K1/P70S6K1 比值高于对照组,P<0.05。3.吡柔比星处理小鼠后,左心室心肌组织质量增加,心肌组织SGLT-1表达降低,p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR、p-P70S6K1/P70S6K1 比值降低,P<0.05。4.血管紧张素Ⅱ能诱导H9c2细胞肥大,细胞中SGLT-1表达增加,p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR、p-P70S6K1/P70S6K1 比值升高,P<0.05。5.吡柔比星处理H9c2细胞后,细胞直径降低,Bcl-2基因下调,Bax、caspase-3、caspase-9 基因上调,P<0.05。[结论]1.肥厚型梗阻性心肌病患者肥厚的心肌组织中SGLT-1表达量增加。2.SGLT-1通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路参与高钠饮食引起的高血压心肌肥厚过程。3.SGLT-1通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路参与血管紧张素Ⅱ诱导的H9c2细胞肥大过程。4.吡柔比星能增加在体心脏重量,但并不引起心肌细胞肥大,其能诱导心肌细胞凋亡,SGLT-1的表达及PI3K/AKT/mTOR信号通路受到抑制。5.SGLT-1及PI3K/AKT/mTOR信号通路参与多种病理情况导致的心肌肥厚,将来通过药物或其他途径抑制SGLT-1的表达,或阻断PI3K/AKT/mTOR信号通路,或许能有效控制病理性心肌肥厚,有望成为未来治疗心肌肥厚的新靶点。
二、143例Sigma系列起搏器临床分析（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、143例Sigma系列起搏器临床分析（论文提纲范文）
（1）人诱导多能干细胞向Nkx2.5-窦房结样起搏细胞诱导分化的实验研究（论文提纲范文）
| 英文缩略语 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 人诱导多能干细胞形态学及多能性的研究 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 1.材料 |
| 1.1 细胞 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器设备 |
| 2.方法 |
| 2.1 hiPSC细胞培养 |
| 2.2 细胞生长曲线和倍增曲线的测定 |
| 2.3 免疫荧光染色 |
| 2.4 统计学处理 |
| 结果 |
| 3.1 光镜下观察hiPSC的细胞形态 |
| 3.2 hiPSC的生长情况 |
| 3.3 细胞免疫荧光染色检测hiPSC干细胞特异性蛋白标志物 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 特殊条件下人诱导多能干细胞诱导分化窦房结样起搏细胞的研究 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 1.材料 |
| 1.1 细胞 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器设备 |
| 2.方法 |
| 2.1 hiPSC细胞培养 |
| 2.2 hiPSC诱导窦房结样起搏细胞 |
| 2.3 免疫荧光染色 |
| 2.4 Western blot检测蛋白表达 |
| 2.5 hiPSC诱导窦房结样起搏细胞动作电位(actionpotential,AP)的记录 |
| 2.6 诱导窦房结样起搏细胞的起搏电流(funny current,I_f)记录 |
| 2.7 hiPSC诱导窦房结样起搏细胞的L-型钙电流(L-type calcium current,I_(Ca,L))记录 |
| 2.8 hiPSC诱导窦房结样起搏细胞的钙荧光检测 |
| 2.9 统计学处理 |
| 结果 |
| 3.1 hiPSC诱导窦房结样起搏细胞的分化流程简图 |
| 3.2 hiPSC诱导窦房结样起搏细胞的自发性搏动频率 |
| 3.3 hiPSC衍生的窦房结样起搏细胞的细胞形态学特征 |
| 3.4 hiPSC衍生的窦房结样起搏细胞特征性标志蛋白的分布和表达 |
| 3.5 hiPSC衍生的窦房结样起搏细胞的功能学鉴定 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 局限性与展望 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 干细胞与生物起搏的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（2）Rev-Erbα在颞叶癫痫发病机理中的作用及其作为抗癫痫靶点初探（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| abstract |
| 摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 Rev-Erbα在颞叶癫痫(TLE)致痫灶中的表达研究 |
| 2.1 Rev-Erbα在 TLE患者致痫灶中的表达模式 |
| 2.2 Rev-Erbα在急慢性TLE小鼠癫痫灶中的动态表达 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 SR9009激活Rev-Erbα缓解TLE小鼠海马炎症反应和神经元损伤丢失 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 SR9009激活Rev-Erbα改善TLE小鼠脑电发放、电生理特性和行为 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 神经胶质细胞在生物节律中的研究进展及其与癫痫关联性的现状 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表的成果 |
| 致谢 |
（3）miR-221-3p介导电针治疗功能性消化不良大鼠的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 实验一 电针对FD大鼠一般行为学和胃动力的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验试剂和仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组及处理 |
| 2.2 FD大鼠模型的构建 |
| 2.3 干预方法 |
| 2.4 标本采集方法 |
| 2.5 检测指标 |
| 2.6 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 各组大鼠一般情况观察 |
| 3.2 各组大鼠体重变化 |
| 3.3 各组大鼠饮食量和饮水量变化 |
| 3.4 各组大鼠胃内残留率变化 |
| 3.5 各组大鼠胃窦组织形态结构观察 |
| 4 讨论 |
| 4.1 造模方法的选择 |
| 4.2 针刺穴位的选择 |
| 4.3 电针对FD大鼠胃动力的影响 |
| 5 结论 |
| 实验二 电针对FD大鼠胃窦组织ICC的影响以及电针干预FD大鼠前后差异性miRNA的筛查 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验试剂和仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组及处理 |
| 2.2 FD大鼠模型的构建 |
| 2.3 干预方法 |
| 2.4 标本采集方法 |
| 2.5 检测指标 |
| 2.6 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 各组大鼠胃窦组织ICC超微结构观察 |
| 3.2 各组大鼠胃窦组织c-kit蛋白表达水平比较 |
| 3.3 电针干预FD大鼠前后差异性表达的miRNA筛查以及生物信息学分析 |
| 3.4 miR-221-3p和c-kit基因的靶向关系验证 |
| 3.5 各组大鼠胃窦组织c-kit mRNA和miR-221-3p表达水平比较 |
| 4 讨论 |
| 4.1 电针对FD大鼠ICC的影响 |
| 4.2 miRNA 对 c-kit 基因的调节 |
| 5 结论 |
| 实验三 miR-221-3p 介导电针对 FD 大鼠胃动力的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验试剂和仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组及处理 |
| 2.2 FD大鼠模型的构建 |
| 2.3 干预方法 |
| 2.4 标本采集方法 |
| 2.5 检测指标 |
| 2.6 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 各组大鼠一般情况观察 |
| 3.2 各组大鼠胃内残留率变化 |
| 3.3 各组大鼠胃窦组织形态结构观察 |
| 3.4 各组大鼠胃窦组织 c-kit mRNA 和 miR-221-3p 表达水平比较 |
| 4 讨论 |
| 4.1 miRNA 与胃肠道疾病 |
| 4.2 miR-221 与疾病的发生和发展 |
| 5 结论 |
| 实验四 miR-221-3p介导电针治疗FD大鼠的机制研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验试剂和仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组及处理 |
| 2.2 FD大鼠模型的构建 |
| 2.3 干预方法 |
| 2.4 标本采集方法 |
| 2.5 检测指标 |
| 2.6 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 各组大鼠胃窦组织CX43 蛋白表达水平比较 |
| 3.2 各组大鼠胃窦组织SCF和 c-kit蛋白表达水平比较 |
| 3.3 各组大鼠胃窦组织p-Raf/Raf和 p-Erk/Erk蛋白表达水平比较 |
| 3.4 各组大鼠胃窦组织CX43 mRNA表达水平比较 |
| 3.5 各组大鼠胃窦组织SCF mRNA表达水平比较 |
| 3.6 各组大鼠胃窦组织Raf mRNA和 Erk mRNA表达水平比较 |
| 4 讨论 |
| 4.1 CX43、SCF/c-kit信号通路与胃动力障碍 |
| 4.2 Raf/Erk信号通路与细胞效应 |
| 5 结论 |
| 全文讨论 |
| 1 FD的西医认识 |
| 1.1 定义 |
| 1.2 流行病学 |
| 1.3 诊断标准 |
| 1.4 发病机制研究 |
| 1.5 治疗 |
| 2 FD的中医认识 |
| 2.1 病名出处 |
| 2.2 病位及相关脏腑 |
| 2.3 病因病机 |
| 2.4 辨证分型 |
| 2.5 治疗 |
| 3 胃肠道ICC与FD |
| 4 电针治疗FD的可能机制 |
| 4.1 促进胃肠动力 |
| 4.2 调节胃肠敏感性 |
| 4.3 缓解胃肠炎症 |
| 5 miRNA 与 FD 的相关性研究 |
| 6 本研究的创新之处 |
| 7 不足与展望 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录一:文献综述 |
| 参考文献 |
| 附录二:博士期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（4）基于杂化交联策略的可注射抗菌透明质酸水凝胶的构建及其预防CIED囊袋感染的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 心脏植入式电子装置(CIED)感染 |
| 1.1.1 CIED概述 |
| 1.1.2 CIED感染流行病学 |
| 1.1.3 CIED感染的病原学 |
| 1.2 CIED感染的预防措施 |
| 1.2.1 皮肤准备 |
| 1.2.2 抗菌剂冲洗 |
| 1.2.3 围术期抗生素使用 |
| 1.2.4 抗菌包膜 |
| 1.2.5 其他 |
| 1.3 抗菌水凝胶 |
| 1.4 结语 |
| 第2章 构建基于透明质酸杂化交联的可注射抗菌水凝胶 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料和方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.3 实验结果与讨论 |
| 2.3.1 交联HA的表征 |
| 2.3.2 CHA的皮下降解时间 |
| 2.3.3 CHA/CHX水凝胶的制备及流变学表征 |
| 2.3.4 CHA/CHX水凝胶的形态学表征 |
| 2.3.5 CHX在CHA/CHX水凝胶的体外释放实验 |
| 2.4 本章小结 |
| 第3章 CHA/CHX水凝胶的安全性评价 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与方法 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 CHA/CHX水凝胶的细胞毒性评价 |
| 3.3.2 CHA/CHX水凝胶的活/死细胞染色评价 |
| 3.3.3 CHA/CHX水凝胶的血液相容性评价 |
| 3.3.4 CHA/CHX水凝胶的体内安全性评价 |
| 3.4 总结 |
| 第4章 CHA/CHX水凝胶的体外抗菌性评价 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料与方法 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 实验方法 |
| 4.3 实验结果与讨论 |
| 4.3.1 CHA/CHX水凝胶对金黄色葡萄球菌抑菌圈实验 |
| 4.3.2 CHA/CHX水凝胶对大肠杆菌的抑菌圈实验 |
| 4.3.3 CHA/CHX水凝胶表面抗菌性能 |
| 4.3.4 水凝胶的扫描电镜结果 |
| 4.3.5 CHA/CHX水凝胶的活死细胞染色结果 |
| 4.4 总结 |
| 第5章 CHA/CHX水凝胶预防CIED囊袋感染的效果评价 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料和方法 |
| 5.2.1 实验材料 |
| 5.2.2 实验方法 |
| 5.3 实验结果与讨论 |
| 5.3.1 囊袋感染模型 |
| 5.3.2 CHA/CHX水凝胶植入过程 |
| 5.3.3 CHA/CHX水凝胶预防CIED囊袋感染的大体效果 |
| 5.3.4 HE染色结果 |
| 5.3.5 囊袋组织细菌定量 |
| 5.3.6 CIED表面活死细菌染色 |
| 5.4 本章总结 |
| 第6章 全文总结与展望 |
| 6.1 全文总结 |
| 6.2 研究展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间研究的成果 |
| 综述 心脏植入装置感染及其预防的研究进展 |
| 参考文献 |
（5）LncRNA TCONS-00106987在实验性心房颤动中对心房电重构的影响及作用机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 第一部分 LncRNAs在实验性心房颤动中的作用研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图表 |
| 第二部分 LncRNA TCONS-00106987影响房颤心房电重构的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 创新性 |
| 局限性 |
| 附图表 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 外文论文1 |
| 外文论文2 |
（6）转录组分析揭示MPTP/p诱导的进行性帕金森模型小鼠神经退变的分子调节机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 试剂及溶液的配制 |
| 2.1.3 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 行为测试 |
| 2.2.2 免疫荧光实验 |
| 2.2.3 样品建库和RNA-seq |
| 2.2.4 RNA-seq分析 |
| 2.2.5 qRT-PCR |
| 第三章 结果 |
| 3.1 行为测试 |
| 3.2 免疫荧光 |
| 3.3 RNA-seq分析 |
| 3.3.1 数据过滤 |
| 3.3.2 差异表达基因 |
| 3.3.3 KEGG pathway和GO功能富集 |
| 3.3.4 各时间点差异表达基因的分析 |
| 3.3.5 MPTP/p诱导的进行性PD模型小鼠的三个转录反应期 |
| 3.3.6 帕金森病相关基因的GSEA |
| 3.3.7 qRT-PCR验证 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 帕金森病：病因、诊断及治疗 |
| 参考文献 |
| 缩略词 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（7）昼夜节律性振荡的内源性过氧化氢对生物钟的调控作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1. 生物钟是生命体内部的计时机制 |
| 1.1 生物节律现象 |
| 1.2 哺乳动物生物节律控制系统 |
| 1.2.1 中枢钟 |
| 1.2.2 外周钟 |
| 1.3 哺乳动物细胞内转录时钟机制 |
| 1.3.1 转录-翻译负反馈环路的基本结构和组成 |
| 1.3.2 核心元件的转录调控以及转录后调控 |
| 1.3.3 核心元件的翻译后调控 |
| 1.4 生物节律的生理意义,与各个系统之间的联系 |
| 1.4.1 钟基因突变相关的睡眠障碍性疾病 |
| 1.4.2 代谢与昼夜节律性之间的相互作用 |
| 1.4.3 心血管系统的昼夜节律性调控 |
| 1.4.4 癌症中的昼夜节律紊乱 |
| 1.4.5 衰老与昼夜节律的联系 |
| 2. 生物钟非转录依赖振荡现象 |
| 2.1 原核生物的非转录振荡 |
| 2.2 真核生物的非转录振荡 |
| 3. 转录时钟与氧化还原系统之间相互作用的研究现状 |
| 3.1 转录时钟调控氧化还原 |
| 3.2 氧化还原调控转录时钟 |
| 3.3 研究现状分析 |
| 4. 探究昼夜节律与氧化还原振荡之间的关键耦合点是本研究工作的核心 |
| 4.1 H_2O_2是活性氧中能够作为信号分子的成分 |
| 4.2 H_2O_2介导的氧化还原反应 |
| 4.3 以TTFLs为核心的转录时钟系统中是否存在H202的直接作用靶点是本研究的主要内容 |
| 实验材料 |
| 1. 实验动物与细胞 |
| 1.1 实验小鼠 |
| 1.2 实验细胞 |
| 2. 试剂与耗材 |
| 2.1 试剂 |
| 2.2 抗体 |
| 2.3 试剂盒 |
| 2.4 仪器设备 |
| 2.5 溶液配制 |
| 3. 质粒与蛋白 |
| 3.1 载体构建 |
| 3.2 纯化蛋白 |
| 实验方法 |
| 1. 细胞培养 |
| 1.1 分离并培养小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs) |
| 1.2 分离并培养小鼠成体成纤维细胞(MAFs) |
| 2. 细胞转染 |
| 3. 细胞同步化 |
| 4. 双荧光素酶报告实验 |
| 5. 小鼠同步化与组织取材 |
| 6. 内源性过氧化氢水平检测 |
| 6.1 活细胞荧光成像工作站实时监测胞内H202含量变化 |
| 6.2 微孔板多功能酶标仪检测群体细胞荧光信号 |
| 6.3 化学法检测过氧化氢含量 |
| 7. 蛋白质组学水平上的活性转录因子筛选 |
| 8. 细胞或肝脏组织总蛋白质提取以及细胞核蛋白提取 |
| 8.1 总蛋白提取 |
| 8.2 核蛋白提取 |
| 9. 蛋白质浓度测定(BCA法) |
| 10. 对细胞样品和肝脏样品进行氧化还原标记 |
| 11.免疫沉淀(immunoprecipitation,IP) |
| 12. 蛋白质免疫印迹(Western Blotting,WB) |
| 13. 荧光定量聚合酶链反应检测RNA表达水平 |
| 13.1 RNA提取 |
| 13.2 反转录 |
| 13.3 荧光定量PCR反应 |
| 14. Dimedone质谱法鉴定次磺酸化的半胱氨酸位点 |
| 15. 测定半胱氨酸对过氧化氢的敏感性 |
| 16. 凝胶电泳迁移(Electrophoresis mobility shift assay,EMSA) |
| 17. 非变性丙烯酰胺凝胶电泳(Native polyacrylamide gel electrophoresis,Native-PAGE) |
| 18. Per2:Luc生物发光 |
| 19. 统计分析 |
| 实验结果 |
| 1. 内源性过氧化氢的水平存在昼夜节律性振荡 |
| 1.1 同步化之后,单个细胞内的过氧化氢含量呈现为节律性振荡 |
| 1.2 未经同步化处理的单个细胞内的过氧化氢含量也表现为节律性振荡 |
| 1.3 群体细胞内过氧化氢含量呈现为节律性振荡 |
| 1.4 小鼠肝脏内过氧化氢含量呈现为昼夜节律性振荡 |
| 2. 筛选能够感应内源性过氧化氢调节的转录因子 |
| 2.1 建立过氧化氢敏感的转录因子筛选策略 |
| 2.2 鉴定DNA结合活性受过氧化氢显着影响的转录因子 |
| 3. CLOCK蛋白受到内源性过氧化氢的节律性氧化还原修饰调控 |
| 3.1 CLOCK蛋白能够发生可逆的氧化还原修饰 |
| 3.2 过氧化氢能够激活CLOCK下游钟控基因的表达 |
| 3.3 CLOCK蛋白的氧化还原状态存在节律性振荡 |
| 4. CLOCK蛋白的195位半胱氨酸介导了其氧化还原状态的节律性振荡 |
| 4.1 CLOCK蛋白的Cys195突变显着增强下游基因的转录 |
| 4.2 CLOCK蛋白的195位半胱氨酸介导了其氧化还原反应 |
| 4.3 CLOCK蛋白的195位半胱氨酸对过氧化氢敏感且能够被氧化 |
| 4.4 CLOCK蛋白的Cys195介导了其氧化还原状态的节律振荡 |
| 5. 过氧化氢介导的氧化还原修饰参与CLOCK蛋白功能的调控 |
| 5.1 由Cys195介导的CLOCK蛋白的氧化还原反应影响CLOCK/BMAL1异二聚体的形成 |
| 5.2 由Cys195介导的CLOCK蛋白的氧化还原反应影响CLOCK/BMAL1异二聚体的转录活性 |
| 5.3 CLOCK蛋白中氧化还原敏感的Cys195影响钟控基因的转录节律 |
| 5.4 CLOCK蛋白中氧化还原敏感的Cys195影响细胞节律 |
| 讨论 |
| 1. 本研究概述 |
| 2. CLOCK蛋白的翻译后修饰对其生物学功能的调控作用 |
| 3. CLOCK/BMAL1异二聚体感应氧化还原状态的改变 |
| 4. 昼夜节律与氧化还原在进化过程上的联系 |
| 5. 本研究尚未解决的问题及展望 |
| 5.1 Clock~(C195S)小鼠是否存在重要功能的改变 |
| 5.2 过氧化氢昼夜节律性振荡的驱动力仍需进一步研究 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 氧化还原振荡与昼夜节律之间的调控网络 |
| 参考文献 |
| 英文名词及缩写 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）基于氧化锌和硫化亚铜修饰的多功能生物医用复合材料的制备及其在抗菌消炎领域的应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 生物医用材料概述及研究现状 |
| 1.2 乳胶和果胶材料的概述及研究现状 |
| 1.3 氧化锌的概述与在生物医学领域的应用 |
| 1.4 硫化亚铜纳米粒子的概述与在生物医学领域的应用 |
| 1.5 本文的选题依据和创新点 |
| 第二章 基于氧化锌修饰的乳胶材料用于心脏起搏器植入相关炎症的治疗 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 实验试剂、材料 |
| 2.2.2 仪器设备 |
| 2.2.3 乳胶泡沫的合成 |
| 2.2.4 氧化锌纳米粒子的制备及原位负载 |
| 2.2.5 体外抗菌实验 |
| 2.2.6 体外细胞毒性实验 |
| 2.2.7 动物实验 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 乳胶泡沫和氧化锌的表征 |
| 2.3.2 乳胶泡沫力学性能表征 |
| 2.3.3 体外抗菌评估 |
| 2.3.4 生物安全性评估 |
| 2.3.5 体内植入过程与抗菌分析 |
| 2.3.6 体内炎症评估 |
| 2.4 结论 |
| 第三章 基于氧化锌和硫化亚铜纳米修饰的光敏果胶复合膜用于创面的修复 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 实验试剂、耗材 |
| 3.2.2 仪器设备 |
| 3.2.3 果胶膜的合成 |
| 3.2.4 果胶膜-硫化亚铜/氧化锌复合材料的制备 |
| 3.2.5 表征 |
| 3.2.6 果胶-硫化亚铜/氧化锌复合膜的透气及光热性能 |
| 3.2.7 体外抗菌实验 |
| 3.2.8 体外细胞实验 |
| 3.2.9 铜离子和锌离子在模拟体液中的释放 |
| 3.2.10 内皮小管生成实验 |
| 3.2.11 细胞划痕实验 |
| 3.2.12 体内动物实验 |
| 3.2.13 大鼠疼痛微表情实验 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 果胶-硫化亚铜/氧化锌复合膜的制备和表征 |
| 3.3.2 果胶-硫化亚铜/氧化锌的透气性、溶解性和光热性能 |
| 3.3.3 体外抗菌性能评估 |
| 3.3.4 细胞相容性评估 |
| 3.3.5 体内伤口愈合评估 |
| 3.3.6 免疫组化、血管生成和胶原沉积分析 |
| 3.4 结论 |
| 第四章 结论与展望 |
| 4.1 结论 |
| 4.2 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士期间的研究成果 |
（9）柔性植入式燃料电池电极的制备及其用于自发电神经导管的研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写清单 |
| 1 引言 |
| 2 文献综述 |
| 2.1 植入式供能器件 |
| 2.1.1 有源植入式医疗器械及其能量供应 |
| 2.1.2 植入式葡萄糖燃料电池及其分类 |
| 2.1.3 植入式非生物催化燃料电池研究进展 |
| 2.1.4 小结 |
| 2.2 周围神经修复 |
| 2.2.1 周围神经及其结构 |
| 2.2.2 周围神经损伤 |
| 2.2.3 周围神经损伤的修复方法 |
| 2.2.4 电刺激在神经修复中的应用 |
| 2.2.5 导电神经导管结合电刺激用于神经再生 |
| 2.2.6 小结 |
| 2.3 BC在柔性电子器件中的应用 |
| 2.3.1 BC的结构及性能特点 |
| 2.3.2 BC在柔性电子器件中的应用 |
| 2.4 本论文研究内容及意义 |
| 2.4.1 课题来源 |
| 2.4.2 研究内容 |
| 2.4.3 研究意义 |
| 3 BC/PtAu柔性植入式燃料电池阳极的制备与性能测试 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 BC/PtAu电极的制备 |
| 3.3.2 XRD测试 |
| 3.3.3 SEM观察 |
| 3.3.4 XPS测试 |
| 3.3.5 细胞活死染色 |
| 3.3.6 电化学测试 |
| 3.3.7 力学性能测试 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 BC复合纳米PtAu合金的机理 |
| 3.4.2 PtAu合金纳米颗粒在BC纤维上的复合 |
| 3.4.3 反应次数对PtAu合金纳米颗粒大小及负载量的影响 |
| 3.4.4 BC/PtAu元素分析 |
| 3.4.5 合金纳米颗粒负载量对BC/PtAu生物相容性的影响 |
| 3.4.6 BC/PtAu柔性电极的葡萄糖催化氧化性能 |
| 3.4.7 BC/PtAu柔性电极的力学性能 |
| 3.5 本章小结 |
| 4 BC/PDA/Ag柔性植入式燃料电池阴极的制备与性能测试 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料与仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 BC/PDA/Ag柔性氧还原电极的制备 |
| 4.3.2 FT-IR测试 |
| 4.3.3 XRD测试 |
| 4.3.4 SEM观察 |
| 4.3.5 XPS测试 |
| 4.3.6 导电率测试 |
| 4.3.7 银含量测试 |
| 4.3.8 BC/PDA/Ag氧还原性能测试 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 PDA及纳米银复合机理 |
| 4.4.2 PDA在BC上的复合 |
| 4.4.3 BC/PDA/Ag物相分析 |
| 4.4.4 PDA对复合纳米银的影响 |
| 4.4.5 BC/PDA/Ag元素价态分析 |
| 4.4.6 BC/PDA/Ag的银含量及导电率 |
| 4.4.7 BC/PDA/Ag膜电极的力学性能 |
| 4.4.8 BC/PDA/Ag膜电极的氧还原催化活性 |
| 4.5 本章小结 |
| 5 BC/PPy自发电神经支架导电基底膜的制备与性能测试 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料与仪器 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 BC/PPy导电基底膜的制备 |
| 5.3.2 FT-IR测试 |
| 5.3.3 XPS测试 |
| 5.3.4 SEM观察 |
| 5.3.5 PPy负载量测试 |
| 5.3.6 导电率测试 |
| 5.3.7 力学性能测试 |
| 5.3.8 热稳定性测试 |
| 5.4 结果与讨论 |
| 5.4.1 BC与PPy的复合 |
| 5.4.2 BC/PPy元素状态分析 |
| 5.4.3 吡咯单体浓度对BC/PPy微观形貌的影响 |
| 5.4.4 BC与PPy复合的机理 |
| 5.4.5 BC/PPy导电基底膜PPy负载量及导电率分析 |
| 5.4.6 BC/PPy导电基底膜力学性能分析及优化 |
| 5.4.7 BC/PPy导电基底膜的热稳定性 |
| 5.5 本章小结 |
| 6 Pt-BC/PPy-NCNTs二维自发电神经支架的制备与性能测试 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 实验材料与仪器 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 阳极制备 |
| 6.3.2 阴极制备 |
| 6.3.3 XRD测试 |
| 6.3.4 SEM观察 |
| 6.3.5 XPS测试 |
| 6.3.6 CCK-8测试 |
| 6.3.7 电极催化活性及电势差测试 |
| 6.4 结果与讨论 |
| 6.4.1 自发电神经支架的设计原理 |
| 6.4.2 阳极物相分析 |
| 6.4.3 阳极微观形貌分析 |
| 6.4.4 阳极元素状态分析 |
| 6.4.5 阴极微观形貌及元素状态分析 |
| 6.4.6 Pt-BC/PPy-NCNTs神经支架的生物相容性 |
| 6.4.7 Pt-BC/PPy-NCNTs神经支架的自发电性能 |
| 6.5 本章小结 |
| 7 Pt-hPCL/PPy-NCNTs三维自发电取向导电神经导管的设计制备 |
| 7.1 引言 |
| 7.2 实验材料与仪器 |
| 7.3 实验方法 |
| 7.3.1 静电纺丝制备取向PCL膜 |
| 7.3.2 取向PCL膜的亲水改性 |
| 7.3.3 hPCL复合PPy |
| 7.3.4 SEM观察 |
| 7.3.5 导电率测试 |
| 7.3.6 雪旺细胞培养及荧光染色观察 |
| 7.3.7 离子溅射法复合纳米铂催化剂 |
| 7.3.8 浸渍法复合N-CNTs催化剂 |
| 7.3.9 卷管法制备自发电取向导电神经导管 |
| 7.4 结果与讨论 |
| 7.4.1 条件参数对静电纺丝PCL的影响 |
| 7.4.2 亲疏水性对静电纺丝PCL复合聚吡咯的影响 |
| 7.4.3 细胞在hPCL/PPy取向导电膜上的生长行为 |
| 7.4.4 离子溅射法复合纳米铂 |
| 7.4.5 自发电取向导电神经导管的结构及作用机理 |
| 7.5 本章小结 |
| 8 Pt-BC/PPy-NCNTs二维自发电神经支架的体内外功能评价 |
| 8.1 引言 |
| 8.2 实验材料与仪器 |
| 8.3 实验方法 |
| 8.3.1 DRG培养及观察 |
| 8.3.2 皮下植入实验 |
| 8.3.3 大鼠坐骨神经缺损修复实验 |
| 8.3.4 步态测试 |
| 8.3.5 HE染色及免疫荧光染色观察 |
| 8.3.6 TEM观察 |
| 8.3.7 统计分析 |
| 8.4 结果与讨论 |
| 8.4.1 自发电神经支架对DRG轴突生长的影响 |
| 8.4.2 自发电支架的组织相容性 |
| 8.4.3 自发电神经支架对坐骨神经功能恢复的影响 |
| 8.4.4 自发电神经支架对神经再生的影响 |
| 8.5 本章小结 |
| 9 结论 |
| 本论文的创新点 |
| 未来工作建议 |
| 参考文献 |
| 作者简历及在学研究成果 |
| 学位论文数据集 |
（10）钠-葡萄糖共转运载体1（SGLT-1）在促进心肌肥厚中作用机理的研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 SGLT-1在人肥厚心肌组织中的表达情况 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 SGLT-1在小鼠肥厚心肌中表达情况及作用机理 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第三部分 SGLT-1在离体肥厚心肌细胞中表达情况及作用机理 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 钠-葡萄糖共转运载体在心脏疾病中的作用研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
四、143例Sigma系列起搏器临床分析（论文参考文献）
- [1]人诱导多能干细胞向Nkx2.5-窦房结样起搏细胞诱导分化的实验研究[D]. 陈雅婷. 福建医科大学, 2021(02)
- [2]Rev-Erbα在颞叶癫痫发病机理中的作用及其作为抗癫痫靶点初探[D]. 岳炯. 中国人民解放军陆军军医大学, 2021(01)
- [3]miR-221-3p介导电针治疗功能性消化不良大鼠的机制研究[D]. 周丽. 湖北中医药大学, 2021(01)
- [4]基于杂化交联策略的可注射抗菌透明质酸水凝胶的构建及其预防CIED囊袋感染的研究[D]. 董泉彬. 南昌大学, 2021(01)
- [5]LncRNA TCONS-00106987在实验性心房颤动中对心房电重构的影响及作用机制[D]. 杜娟娟. 山东大学, 2020(04)
- [6]转录组分析揭示MPTP/p诱导的进行性帕金森模型小鼠神经退变的分子调节机制[D]. 杨伟伟. 南京中医药大学, 2020(02)
- [7]昼夜节律性振荡的内源性过氧化氢对生物钟的调控作用[D]. 李文琪. 北京协和医学院, 2020(05)
- [8]基于氧化锌和硫化亚铜修饰的多功能生物医用复合材料的制备及其在抗菌消炎领域的应用[D]. 张威. 南昌大学, 2020(01)
- [9]柔性植入式燃料电池电极的制备及其用于自发电神经导管的研究[D]. 孙乙. 北京科技大学, 2020
- [10]钠-葡萄糖共转运载体1（SGLT-1）在促进心肌肥厚中作用机理的研究[D]. 费俊杰. 昆明医科大学, 2020(02)