一、颌骨骨肉瘤中p~(27)的表达及意义（论文文献综述）
李克义[1]（2019）在《口腔鳞状细胞癌HCPT耐药中CDKL1的作用和机制研究》文中指出目的口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤,恶性程度高,易发生转移。羟基喜树碱（hydroxycamptothecine,HCPT）已被应用于口腔鳞状细胞癌的临床治疗,并取得较好的临床效果,但仍有部分患者对HCPT表现出耐药性。本研究的目的旨在探讨口腔鳞状细胞癌对HCPT耐药的机制,寻找能够用于个体化地预测口腔鳞状细胞癌对HCPT敏感性的生物标志物,以及为口腔鳞状细胞癌的治疗和HCPT化疗增敏提供潜在的靶点。方法1.探讨CDKL1是否参与口腔鳞状细胞癌细胞对HCPT耐药应用浓度梯度递增法筛选HCPT耐药口腔鳞状细胞癌细胞株;RIPA裂解液提取蛋白,应用Western blot检测HCPT耐药口腔鳞状细胞癌细胞中CDKL1表达;应用慢病毒基因敲除技术构建稳定敲除CDKL1的口腔鳞状细胞癌细胞;应用MTT细胞增殖实验、流式细胞术分别检测细胞增殖、细胞周期进程和细胞凋亡。2.探讨CDKL1是否通过调控内质网应激介导口腔鳞状细胞癌对HCPT耐药RIPA裂解液提取蛋白,应用Western blot检测内质网应激相关蛋白IRE1、BIP表达;应用IRE1抗体进行免疫共沉淀实验评价内质网相关蛋白IRE1和BIP的结合。应用BIP抑制剂HA15处理口腔鳞状细胞癌HCPT耐药细胞,降低内质网应激阈值,MTT实验检测HCPT处理后细胞增殖,评价降低内质网应激阈值能否增加细胞对HCPT的敏感性。在口腔鳞状细胞癌细胞中过表达CDKL1,Western blot检测细胞中IRE1、BIP表达,并用免疫共沉淀实验检测细胞中IRE1和BIP的结合;在口腔鳞状细胞癌HCPT耐药细胞中敲除CDKL1,Western blot检测细胞中IRE1、BIP表达,并用免疫共沉淀实验检测细胞中IRE1和BIP的结合,以评价CDKL1对内质网应激阈值的调控作用。3.探讨口腔鳞状细胞癌HCPT耐药细胞中CDKL1表达的调控机制应用Western blot检测测CDKL1蛋白表达,应用9RT-PCR检测CDKL1mRNA表达;应用基因克隆技术构建CDKL1启动子活性报告基因;应用萤火虫荧光素酶活性检测实验检测CDKL1启动子活性;应用定点诱变技术依次突变CDKL1启动子上可能的Sp1结合位点;应用染色质免疫共沉淀实验验证Sp1是否与CDKL1启动子结合。结果1.CDKL1过表达介导口腔鳞状细胞癌HCPT耐药应用HCPT处理对数生长期口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞,筛选出其中的耐药细胞,并通过挑选单克隆,选出2株HCPT耐药细胞株CAL-27H1和CAL-27H2。通过MTT细胞增殖实验证实,HCPT对CAL-27H1和CAL-27H2的增殖抑制程度明显弱于对CAL-27的抑制程度。选取CAL-27H1进行后续试验,将其命名为CAL-27H,将CAL-27H和CAL-27细胞接种于BALB/c裸鼠皮下,成瘤后腹腔注射HCPT,测量肿瘤的体积和质量发现,CAL-27H组肿瘤体积和质量低于CAL-27组。应用Trizol法提取CAL-27和CAL-27H两种细胞中RNA,反转录后,应用qRT-PCR评价两种细胞中CDKL1 mRNA表达水平,结果显示CAL-27H细胞中CDKL1 mRNA水平高于CAL-27细胞中;分别裂解CAL-27和CAL-27H两种细胞,提取蛋白,Western Blot检测两种细胞中CDKL1表达,结果显示CAL-27H细胞中CDKL1蛋白表达高于CAL-27细胞。将CAL-27和CAL-27H细胞进行裸鼠荷瘤实验,成瘤后,取肿瘤组织制备组织切片,进行免疫组织化学染色,标记肿瘤组织中CDKL1表达,结果显示CAL-27H组阳性着色明显多于CAL-27细胞,提示CAL-27H细胞中CDKL1表达较CAL-27细胞中表达增高。应用慢病毒感染技术,将CAL-27细胞感染Lv-shCDKLl,敲除CAL-27细胞中CDKL1,检测CDKL1敲除对CAL-27细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。MTT细胞增殖实验结果显示敲除CDKL1较不敲除CDKL1,细胞增殖能力明显减弱;细胞周期检测发现敲除CDKL1后,G0/G1期细胞明显所占比例明显增多,提示敲除CDKL1能够使细胞周期阻滞在G0/G1期;应用Annexin V/PI流式细胞学检测敲除CDKL1和未敲除CDKL1的CAL-27细胞中凋亡细胞比例,结果显示敲除CDKL1后,细胞凋亡率明显增高。通过慢病毒感染技术,在CAL-27细胞中过表达CDKL1,应用HCPT处理过表达CDKL1和未过表达CDKL1的细胞,应用检测细胞增殖,MTT细胞增殖实验结果显示,HCPT能够抑制两组细胞增殖,但对过表达CDKL1的细胞的增殖抑制程度明显弱于未过表达CDKL1的细胞。应用Annexin V/PI流式细胞学检测凋亡细胞比例,结果显示,应用HCPT能够诱导CAL-27细胞和CAL-27H细胞凋亡率增加,应用HCPT处理后,CAL-27H凋亡率较CAL-27细胞低。提示过表达CDKL1后,细胞对HCPT的耐药性增强。2.CDKL1通过内质网应激介导口腔鳞状细胞癌对HCPT耐药应用HCPT处理CAL-27细胞,提取蛋白,Western blot检测细胞中IRE1,结果显示,HCPT能够上调CAL-27细胞中IRE1表达,提示HCPT能够激活内质网应激。分别提取CAL-27细胞和CAL-27H细胞蛋白,Western blot检测两种细胞中BIP表达,结果显示CAL-27H细胞中BIP表达明显高于CAL-27细胞;此外,应用IRE1抗体进行免疫沉淀实验,结果发现,CAL-27H细胞中,免疫沉淀中BIP的量明显高于CAL-27细胞,因此,在CAL-27H细胞中BIP与IRE1结合能力更强,提示激活CAL-27H细胞内质网应激的阈值较CAL-27细胞更高。应用BIP抑制剂HA15处理CAL-27H细胞后,向细胞中加入HCPT,检测细胞增殖,结果显示,应用HA15预处理后,细胞在HCPT的作用下细胞增殖抑制程度较未用HA15预处理者更高,提示抑制BIP,降低内质网应激阈值能够增加CAL-27细胞对HCPT的敏感性。分别提取了过表达和未过表达CDKL1的CAL-27细胞蛋白,Western blot检测两种细胞中BIP表达,发现过表达CDKL1能够上调细胞中BIP的表达;应用免疫沉淀实验评价过表达CDKL1对细胞中BIP和IRE1结合的影响,结果显示过表达CDKL1的CAL-27细胞BIP和IRE1结合较未过表达CDKL1的细胞增强。而敲除CDKL1能够下调BIP,减弱BIP与IRE1结合。提示CDKL1能够使CAL-27细胞内质网应激阈值增高。3.口腔鳞状细胞癌中Sp1上调CDKL1表达本实验构建了 CDKL1启动子活性报告基因pGL3-CDKL1,将其转染至CAL-27细胞和口腔鳞状细胞癌HCPT耐药细胞CAL-27H细胞中,应用萤火虫荧光素酶活性检测试剂盒检测两种细胞中CDKL1启动子活性,结果显示CAL-27H细胞中CDKL1启动子活性较CAL-27细胞中增高。提取CAL-27细胞和CAL-27H细胞RNA,反转录后,qRT-PCR检测两种细胞中转录因子Sp1表达,结果显示在CAL-27H细胞CDKL1 mRNA水平高于CAL-27细胞;提取CAL-27细胞和CAL-27H细胞蛋白,检测两种细胞中转录因子Sp1表达,Western blot结果显示在CAL-27H细胞中CDKL1表达增高。在CAL-27细胞中过表达Sp1,检测CDKL1启动子活性,发现过表达Sp1能够上调CDKL1启动子活性;而敲除Sp1下调CDKL1启动子活性。CDKL1启动子上存在5个可能的Sp1识别位点,将各位点依次突变,检测各突变报告基因的活性,发现突变位点A和位点C能够下调CDKL1启动子活性,其中突变位点C能够阻断Sp1对CDKL1启动子活性的上调作用。结论口腔鳞状细胞癌中Sp1通过调控CDKL1启动子活性,在转录水平上调CDKLI表达。CDKL1表达增多能够通过上调BIP,上调内质网应激阈值,介导口腔鳞状细胞癌对HCPT耐药。Sp1/CDKL1/BIP能够作为判断口腔鳞状细胞癌对HCPT敏感性的潜在肿瘤标志物以及作为口腔鳞状细胞癌的治疗和HCPT化疗增敏药物研发的潜在靶点。
樊志华[2]（2014）在《颌骨软骨肉瘤的临床病理学研究》文中提出目的通过回顾性分析来系统认识颌骨软骨肉瘤的临床病理学特点。方法收集并系统复习北京大学口腔医院19902012年收治的40例颌骨软骨肉瘤患者的临床病理、治疗及随访资料，分析其临床病理学特点；采用沙黄-O染色，观察红色染色部位，分析软骨细胞的分布。通过免疫组织化学方法观察S-100、CD99、NSE和Syn在颌骨软骨肉瘤中的表达，分析其组织来源；观察Ki67、CollagenⅡ和Vimentin蛋白在颌骨软骨肉瘤中的表达并做半定量分析，分析细胞增殖特性、胶原分布和中间丝蛋白的表达对生物学行为的影响。结果1.40例颌骨软骨肉瘤患者年龄1569岁（平均37.6岁），高发年龄在3039岁（30%）。男性18例（45%），女性22例（55%），男女比例1:1.2。上颌13例（32.5%），下颌27例（67.5%），上下颌部位比例为1:2.07。2.临床表现主要表现为肿胀、膨隆、疼痛、麻木等。33例获得影像学资料中，边界不清17例（51.25%），边界呈虫蚀状2例（6%）；影像学密度增高5例（15.15%），密度降低4例（12.12%），高低不均7例（21.21%）；牙根吸收1例（3.03%）；死骨形成2例（6%），骨破坏10例（30.30%），颌骨病理骨折3例（9.09%）。3.40例患者，37例进行手术治疗；术后36例患者获得随访资料，随访时间15天14年零6个月。其中，35例复发（97.22%），4例发生肺转移（11.11%），1例因肿瘤死亡（2.78%）。4.组织学上，参照WHO（2005）对颌骨软骨肉瘤的组织学分级标准，18例患者，Ⅰ型4例，Ⅱ型10例，Ⅲ型4例。沙黄-O染色为红色部位是软骨细胞分布区域。5.免疫组化结果显示，S-100阳性9例（50%），CD99阳性13例（72.22%），NSE阳性9例（50%），Syn阴性18例（100%）。复发病例中，Ki67LI为（23.97±18.65）%，略高于无复发病例（P＞0.05）；CollagenⅡLI为（50.04±25.56）%，略低于无复发病例（P＞0.05）；VimentinLI为（48.40±11.10）%，显着高于无复发病例（P＜0.05）。结论颌骨软骨肉瘤平均发病年龄37.6岁，3039岁为第一发病高峰。略多见于女性，多发生于下颌。X线多为边界不清、密度不均的软组织影。它具有较高的复发率，可发生肺转移，预后差。Safranin-O染色可提高对软骨肉瘤细胞形态学的认识。颌骨软骨肉瘤来源于间叶组织，Vimentin阳性表达可作为软骨肉瘤预后不良的参考指标。
辛俊彤[3]（2011）在《MMP-2、Cyclin D1和S-100在微创功能治疗颌骨囊性病变中表达的研究》文中进行了进一步梳理目的：研究基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、细胞周期调节蛋白D1（Cyclin D1）和角蛋白（S-10）0))在颌骨囊性病变囊壁组织中的表达,探讨三者在颌骨巨大囊性病变微创功能治疗前后的表达变化。方法：选取青岛大学医学院附属医院口腔颌面外科2006年8月-2009年4月治疗的7例颌骨巨大囊性病变病例,包括壁性成釉细胞瘤（AB）1例、牙源性角化囊性瘤（KCOT）2例、含牙囊肿（DC）4例,均应用开窗灌洗治疗,其中6例经过5月-26月的治疗后,囊腔减退,行二次手术刮除残留囊壁,1例DC经开窗灌洗治疗3月后无明显效果,行手术刮除。获取所有病例开窗灌洗治疗前后的囊壁组织,应用SABC法行免疫组织化学染色检测,研究MMp-2、CyclinDl和S-100)在颌骨巨大囊性病变开窗灌洗治疗前后的表达情况。7例AB、7例KCOT、7例DC、7例口腔鳞状细胞癌（SCC）和7例口腔正常粘膜组织作为对照,采用SPSS17.0软件进行统计学分析。结果：MMP-2在AB中阳性表达率为1 00%,与对照组比较,有显着差异（H=17.433,P=0.001）,开窗灌洗治疗前、后的表达无差异。MMP-2在KCOT中阳性率为42.86%,与对照组比较,有显着差异（H=12.574,P=0.002）；在开窗灌洗治疗前、后的表达无差异（Z=-1.000,P=0.317）。MMP-2在DC中阳性率为35.68%,与对照组比较,有显着差异（H=14.231,P=0.00）1)；开窗灌洗治疗前、后的表达无差异（Z=-1.414,P=0.157）。Cycln D1在AB中呈弱阳性表达,阳性率为14.17%,与对照组比较,有显着差异（H=12.500,P=0.002）,开窗灌洗治疗前、后的表达无差异。Cyclin D1在KCOT中呈弱阳性表达,阳性率为14.26%,与对照组比较,有显着差异（H=9.333,P=0.009）；开窗灌洗治疗前、后的表达无差异（Z=0.000,P=1.000）。Cyclin D1在DC中呈弱阳性表达,阳性率为14.28%,与对照组比较,有显着差异（H=12.500,P=0.002）；开窗灌洗治疗前、后的表达无差异（Z=0.000,P=1.000）。S-100在AB中呈阳性表达,阳性率为71.43%,与对照组比较,有显着差异（H=9.711,P=0.008）,开窗灌洗治疗前、后的表达无差异。S-10)0)在KCOT中呈阳性表达,阳性率为28.57%,与对照组比较,有显着差异（H=11.548,P=0.003）；开窗灌洗治疗前、后的表达无差异（Z=-1.000,P=0.317）。S-10)0)在DC中呈阳性表达,阳性率为21.43%,与对照组比较,有显着差异（H=11.315,P=0.003）；开窗灌洗治疗前、后的表达无差异（Z=-1.414,P=0.157）。结论：MMP-2、S-100、Cyclin D1在AB、KCOT、DC中呈阳性表达,开窗灌洗治疗前、后,MMP-2、S-100、Cyclin D1在AB、KCOT、DC中的表达无差异。开窗灌洗治疗颌骨巨大囊性病变的内在机制尚需进一步研究。
唐祎,王立坤,贺国权[4]（2010）在《P27在涎腺良恶性肿瘤中的表达》文中研究表明目的:研究涎腺良恶性肿瘤中P27蛋白表达的特点。方法:对60例涎腺良恶性肿瘤标本进行回顾性研究,检测其P27的表达,并以正常腮腺组织做对照,对比P27的表达量及表达的特点。结果:P27在正常腮腺组织和涎腺良性肿瘤中正常表达,在涎腺恶性肿瘤中表达弱或不表达,其中低分化的肿瘤表达更弱,5年内复发的涎腺癌P27表达量较之未复发者为低。结论:P27在涎腺恶性肿瘤中表达弱,与在正常腮腺组织及良性肿瘤中的表达有显着差异。
叶招明[5]（2006）在《HA表位标记的azurin基因真核表达载体的构建及其转染人骨肉瘤U2OS细胞的实验研究》文中指出研究背景 骨肉瘤（osteosarcoma）是最常见的原发性骨恶性肿瘤之一,转移发生早,预后差。目前临床上对骨肉瘤的治疗多采用手术、化疗等综合治疗,使得患者的五年生存率较以前显着提高。大剂量化疗带来的严重副反应以及多药耐药等问题使得骨肉瘤的治疗难以完全治愈。最近,使用活致病菌、减毒致病菌或致病菌的纯化产物用于肿瘤治疗是研究热点之一。 微生物病原体感染能引起人类和动物体内恶性肿瘤的退变,但活菌因其产生明显的毒性和副作用限制了其在人类肿瘤治疗中的应用。因此,目前倾向于寻找具有抗肿瘤作用的致病菌的纯代谢产物用于癌症治疗。azurin就是近年发现的一种很有前途的抗肿瘤生物蛋白之一。 azurin最初是从铜绿假单胞菌分泌的一种参与细胞氧化还原反应中的电子
林谅[6]（2005）在《人E2F3基因的克隆与表达研究》文中认为目的:E2F转录因子是细胞周期中G1期进入S期的重要调控因子。同时,E2F因子与肿瘤的发生和细胞凋亡有着紧密的关系。为了研究人E2F3（E2F家族成员）转录因子的结构和功能,了解其与肿瘤发生的联系,从人组织中克隆E2F3基因,构建其原核表达载体和真核表达载体,实现其原核表达和真核表达,从而为进一步的研究奠定基础。 方法:通过Trizol法抽提人肝癌细胞的总RNA,然后逆转录制备cDNA。以cDNA为模板通过巢式PCR和桥联PCR的方法克隆E2F3基因,构建了四种E2F3基因的原核表达载体pET28a-E2F3、pET32a-E2F3、pQE30-E2F3和pGEX-4T-E2F3和一种真核表达载体pEGFP-N1-E2F3。原核表达载体转化BL21工程菌进行诱导,用Western blot检测重组蛋白。真核表达载体转染T24细胞观察克隆的E2F3基因在真核细胞中有无表达活性。 结果:成功克隆出E2F3全长基因,通过更换不同的表达载体实现了对E2F3基因的原核表达并且对表达的重组蛋白用Western方法进行了检测。另外还构建了E2F3基因的真核表达载体,通过转染T24细胞表明构建的E2F3真核表达载体具有表达活性,这为以后的细胞学实验做好了前期的准备。 结论:E2F3基因近5’端一段富含GC的序列会严重影响E2F3基因的PCR扩增,我们推测这段序列可能是E2F3基因的一个内部调控区,它可能会通过形成二级发夹结构来调控E2F3基因的表达。另外发现E2F3基因在不同的原核表达载体中存在表达差异,融合有GST的E2F3基因较易实现原核表达,这可能是因为表达载体功能元件的差异和E2F3基因本身的一些特点所致。
原向伟[7]（2004）在《人骨肉瘤中P14ARF、P53和E2F-1的表达及其意义》文中指出肿瘤是机体细胞失去正常调控而发生的一种异常增殖现象，癌基因激活和抑癌基因失活引起的细胞周期调控失常是肿瘤发生发展的重要原因。 骨肉瘤（osteosarcoma,OS）是最常见的原发于骨组织的恶性肿瘤，占骨原发恶性肿瘤的20％，其生物学行为呈高度恶性，生长快，早期即易发生血道转移，虽然近年来新辅助化疗和保肢术的应用大大改善了骨肉瘤患者的预后，但其仍为一死亡率致残率较高的恶性疾病。 INK4a／ARF（cyclin dependent kinase 4 inhibitor a／alternative reading flame）基因位点位于人类染色体9P21处，可通过阅读框架的变化编码两种抑癌蛋白：P16INK4a和P14ARF，二者均参与对细胞周期的调控。P14ARF可通过P53途径和E2F-1途径负性调节细胞周期，使细胞周期在G1期发生停滞，从而抑制细胞的过度增殖来发挥抑癌作用；P53是抑癌基因，可通过多种机制负性调节细胞周期，促进缺陷细胞的凋亡，从而抑制细胞异常增殖；E2F-1是转录因子家族成员之一，活化后可引起与DNA合成有关的靶基因表达，以促进DNA合成，引起细胞增殖。P14ARF可通过与MDM2的相互作用而降低MDM2介导的对P53的降解作用，稳定P53，使P53在细胞核中累积而引起细胞周期停滞或凋亡；另外P14ARF可通过多个结合结构域与转录因子E2F-1结合，下调E2F-1的转录活性，促使细胞周期停滞，引发E2F-1依赖性细胞凋亡。作为新发现的抑癌基因，P14ARF及其作用通路在骨肉瘤中联合表达的研究国内外尚未见报道。 目的：本研究采用免疫组织化学技术，检测P14ARF、P53和E2F-1在人骨肉瘤中的表达，并分析各研究指标之间的相互关系，探讨它们在人骨肉瘤发生发展中的作用，为阐明骨肉瘤的发病机制、辅助诊断和基因治疗提供理论依据和实验基础。 材料与方法：本研究收集手术切除或切取活检的30例人骨肉瘤石蜡标本，所有2004年郑州大学硕士研究生毕业论文人骨肉瘤中P14A只F、P53和曰F一1的表达及其意义标本均经病理证实并依据细胞和组织分化程度分为三级:I级8例，11级12例，111级10例，所有病例术前均未放化疗。以10例骨软骨瘤（osteoehondroma，OC）石蜡标本作为对照。采用免疫组化S一P法，检测P14ARF、P53和EZF一1蛋白在人骨肉瘤中的表达。所有资料采用SPSS10.0软件处理，以泛二0.05作为检验标准。结果:1.P14ARF蛋白的表达:1.1骨软骨瘤组P14ARF染色阳性率为90.0%（9/10）， 其中阴性（一）1例，弱阳性（+）3例，中度阳性〔++)4例，强阳性（+++） 2例;骨肉瘤组P14ARF染色阳性率为43.3%（13召0），其中阴性（一）17例， 弱阳性（十）8例，中度阳性（+十）4例，强阳性（+十十）1例。两组间染色 阳性率和染色强度均有显着性差异（P<0 .05）。1.2骨肉瘤I级组P14ARF染色 阳性率为75.0%（6/8），其中阴性（一）2例，弱阳性（+）3例，中度阳性（++） 2例，强阳性（+++）1例;n、m级组P14ARF染色阳性率为31.8%（7忍2）， 其中阴性（一）15例，弱阳性（十）5例，中度阳性（++）2例。两组间染色 阳性率和染色强度均有显着性差异（尸<0.05）。2.P53蛋白的表达:2.1骨软骨瘤组染色阳性率为10.0%（1八0），其中阴性（一） 9例，中度阳性（++）1例:骨肉瘤组染色阳性率为50.0%（15/’30），其中阴 性（一）15例，弱阳性（+）4例，中度阳性（+十）4例，强阳性（十+十）7例。 两组间染色阳性率和染色强度均有显着性差异（P<O.05）。2.2骨肉瘤I级组 染色阳性率为25.0%（2，/8），其中阴性（一）6例，中度阳性（++）1例，强 阳性（+十十）1例;11、皿级组染色阳性率为59.1%（13爪2），其中阴性（一） 9例，弱阳性（+）4例，中度阳性（++）3例，强阳性（十十十）6例。两组间 染色阳性率和染色强度无显着性差异（P>0.05）:3，EZF-1蛋白的表达:3.1骨软骨瘤组染色阳性率为20.0%（2，/10），其中阴性 （一）8例，弱阳性（+）2例:骨肉瘤组染色阳性率为73.3%〔22/30)，其中 阴性（一）8例，弱阳性（+）13例，强阳性（+十）9例。两组间染色阳性率 和染色强度均有显着性差异（尸<O‘05），12骨肉瘤I级组染色阳性率为:37 .5% （3了8），其中阴性（.）5咧，弱泪性、、)2例.强泪性（十一）1例:H、[II 级组染乞阳性率为肠.生件交19二二、，其中昵性:、.)3列，弱石性(衬n咧， 强旧性（十二）8列，两组闰染色花生至礼染色强变均有显着性盖异甲<0.05、，，2004年郑州大学硕士研究生毕业论文人骨肉瘤中P14ARF、P53和EZF一1的表达及其意义 4.在30例骨肉瘤组织中，13例P14A获卫蛋白表达阳性的病例中，P53蛋白表达 阴性者10例:15例P53蛋白表达阳性的病例中，P14ARF表达阴性者12例; 两者均阳性表达3例;均阴性表达5例。P14ARF和P53的表达具有负相关 关系（P<0.05）， 5.在30例骨肉瘤组织中，13例P14ARF蛋白表达阳性的病例中，EZF一1蛋白表 达阴性者5例:22例EZF一1蛋白表达阳性的病例中，P14ARF蛋白表达阴性 者14例;两者均阳性表达8例;均阴性表达3例。P14ARF和EZF一1之间的 表达关系无统计学意义（P>O.05）o 结论: 1.P14A丑f在骨肉瘤中表达下调，并随着病理分级的增高而降低，提示其与骨 肉瘤发生发展
刘文书[8]（2004）在《人p27kiplcDNA克隆及其对人舌癌细胞系Tca8113细胞生物学作用的研究》文中提出目的：舌鳞状细胞癌是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤之一，它生长快，浸润强，早期常有淋巴结转移，治疗效果不够理想。近年来，随着分子生物学的快速发展，基因治疗在肿瘤治疗中表现出不可估量的作用。本实验以体外培养的人舌鳞状细胞癌细胞Tca8113为研究对象。将克隆的人p27kip1基因连接到pcDNA3载体上，通过脂质体介导转染Tca8113细胞。探讨其对人舌癌细胞系Tca8113细胞的生物学作用。方法：从正常肝组织中，提取组织中的总RNA。应用RT-PCR将RNA逆转录为cDNA。参照Gene Bank中人p27kip1 cDNA序列，设计2个引物，应用PCR扩增p27kip1 cDNA。将PCR产物行TA克隆进行测序。测序后选择真核表达载体pcDNA3构建重组表达质粒。将pcDNA3-p27kip1和pcDNA3质粒DNA分别用脂质体包裹转染培养细胞，而后通过G418培养液进行筛选，应用PCR法鉴定p27kip1基因转染的Tca8113细胞株。采用流式细胞术检测p27kip1蛋白的表达；凋亡相关蛋白Bcl-2的表达；细胞周期及细胞凋亡。用MTT法检测p27kip1基因转染对Tca8113细胞生长的影响；检测化疗药物对p27kip1基因转染的Tca8113细胞生长的影响。结果：1.经测序我们所获得的p27kip1cDNA与Gene Bank登录的序列一致为具有完整阅读框架的p27kip1基因。成功地构建了pcDNA3-p27kip1重组表达质粒，pcDNA3-p27kip1重组表达质粒经酶切鉴定正确。筛选出了抗G418阳性细胞克隆，建立二个新的细胞株。分别命名为：转染质粒pcDNA3-p27kip1的细胞株为Tca-P27；转染空载体pcDNA3的细胞株为Tca-P3。应用PCR鉴定，pcDNA3-p27kip1质粒转染的Tca8113细胞基因组DNA出现p27kip1cDNA扩增带，Tca8113细胞和转染空载体pcDNA3的Tca-P3细胞基因组DNA的PCR产物为阴性。证明了pcDNA3-p27kip1质粒成功地转染入Tca8113细胞。2.流式细胞术检测p27kip1蛋白的表达结果以p27kip1蛋白表达的阳性细胞百分数表示。Tca-P27细胞p27kip1蛋白表达的阳性细胞百分数明显高于Tca-P3、Tca8113细胞，差异显着（P<0.05）。Tca8113与Tca-P3细胞p27kip1蛋白阳性细胞百分数无显着性差异（P>0.05）。显示转染p27kip1基因的<WP=91>Tca8113细胞获得了p27kip1蛋白的高表达。3.MTT法检测Tca8113细胞、Tca-P3细胞、Tca-P27细胞24h（小时）、48h、72h、96h OD值，以OD值代表细胞相对数量，结果Tca-P27细胞增殖速度明显低于Tca8113细胞和Tca-P3细胞。24h、48h，Tca-P27细胞比Tca8113、Tca-P3细胞增殖速度慢，72h、96h时，Tca-P27细胞出现增殖下降。而Tca8113、Tca-P3细胞在24h、48h、72h、96h呈持续增殖状态，三者增殖速度差异显着（P<0.05）。显示转染p27kip1基因后抑制了Tca8113细胞生长。4.流式细胞术检测细胞周期 结果Tca-P27细胞G0/G1期占细胞百分数明显高于Tca-P3和Tca8113细胞G0/G1期细胞百分数，显着差异（P<0.05）。Tca-P27细胞出现了G0/G1期阻滞。表明转染外源性p27kip1基因在Tca8113细胞中的高表达抑制了细胞周期向S期过渡，使细胞阻滞于G0/G1期，抑制了细胞的增殖。G2/M和S期所占细胞百分数Tca-P27细胞明显低于Tca8113细胞和Tca-P3细胞所占的细胞百分数（P<0.05）。通过计算细胞的增殖指数，Tca-P27细胞增殖指数明显低于Tca-P3细胞和Tca8113细胞的增殖指数。三者增殖指数比较差异显着（P<0.05）。显示了转染外源性p27kip1基因，使Tca8113细胞出现G0/G1期阻滞，细胞增殖下降，抑制了细胞生长。5.流式细胞术检测凋亡结果 在G1期前Tca-P27细胞出现了凋亡峰，表明Tca-P27细胞出现了凋亡。Tca8113细胞没有明显凋亡峰出现；Tca-P3细胞也没有明显凋亡峰出现，Tca-P27细胞凋亡指数明显高于Tca8113细胞和Tca-P3细胞的凋亡指数，差异显着（P<0.05）。显示了转染p27kip1基因由于p27kip1基因的高表达，诱导了Tca8113细胞出现了凋亡。6.流式细胞术检测Bcl-2蛋白的表达结果以Bcl-2蛋白表达阳性细胞百分数表示，Tca-P27细胞阳性细胞百分数明显低于Tca8113细胞和Tca-P3细胞阳性细胞百分数，差异显着（P<0.05）。Tca8113细胞与Tca-P3细胞阳性细胞百分数比较无显着差异（P>.05）。显示了转染p27kip1基因由于p27kip1基因的高表达，引起了凋亡相关蛋白Bcl-2的表达的下调。Bcl-2是一种抗凋亡蛋白，推测转染外源p27kip1基因诱导了Tca8113细胞的凋亡，可能与Bcl-2蛋白表达下调有关。7.用MTT法对8种化疗药作用Tca-P27细胞、Tca-P3细胞、Tca8113细胞，24h、48h测OD值计算化疗药对三组细胞的生长抑制率。结果顺铂、丝裂霉素、氟尿嘧啶对三组细胞都有明显的抑制作用。平阳 霉素对三组细胞有一定的抑制作用，但以上化疗药对三组细胞的抑制率比较无显着差异（P>0.05）均未显示出转染p27kip1基因有提高以上化疗药对Tca8113细胞的生长抑制作用。环磷酰胺、甲氨蝶呤、阿霉素对三组细胞无明显抑制作用。长春新碱对Tca-P27细胞抑制率明显高于Tca8113细胞和Tca-P3细胞，差异显着（P<0.05）。随时间的增加，细胞抑制率增高（P<0.05）。显示出转染p27kip1基因提高了长春新碱对Tca8113细胞的生长抑制作用。长春新碱使<WP=92>转染外源p27kip1基因的Tca8113细胞抑制率增加，推测可能因长春新碱作用于M期及其干扰细胞肌醇磷脂代谢而影响细胞增殖。同
司晓辉,杨连君[9]（2001）在《颌骨骨肉瘤细胞周期相关蛋白的免疫组织化学分析》文中指出目的:分析细胞周期相关蛋白在颌骨骨肉瘤的表达及意义。方法:利用免疫组化ABC法对 cyclinD1,CDK4,E2F-1和Ets-1在20例颌骨骨肉瘤和8例软骨瘤的表达进行半定量检测。结果: 骨肉瘤cyclinD1,CDK4,p27,E2F01和Ets-1的阳性表达率分别为65（13／20）,60％（12／20）,20％（4／20）, 70％（14／20）和5％（11／20）,这些蛋白的表达在各病理分型间无显着性差异（P>0．05）。颌骨骨软骨瘤
司晓辉,金岩,杨连甲,TipoeGL[10]（2000）在《颌骨骨肉瘤中p27的表达及意义》文中进行了进一步梳理目的 :分析细胞周期素依赖激酶抑制物 （CKI）p2 7蛋白在颌骨骨肉瘤的表达及意义。方法 :采用免疫组织化学ABC法检测p2 7蛋白在 2 0例颌骨骨肉瘤和 8例骨软骨瘤中的表达。结果 :2 0 % （4 2 0 ）的骨肉瘤中p2 7呈阳性表达 ,87 5 % （7 8）的骨软骨瘤呈p2 7阳性 ,阳性表达率与骨肉瘤相比有显着性差异 （p <0 0 5 ）。结论 :p2 7在颌骨骨肉瘤中低表达并可作为骨肉瘤发生和发展过程中的一个抑癌基因标志物
二、颌骨骨肉瘤中p~(27)的表达及意义（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、颌骨骨肉瘤中p~(27)的表达及意义（论文提纲范文）
（1）口腔鳞状细胞癌HCPT耐药中CDKL1的作用和机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词和中文对照 |
| 前言 |
| 第一部分 CDKL1促进口腔鳞状细胞癌对HCPT耐药 |
| 1.引言 |
| 2. 材料与方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 小结 |
| 第二部分 CDKL1通过调控内质网应激介导口腔鳞状细胞癌对HCPT耐药 |
| 1.引言 |
| 2. 材料与方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 小结 |
| 第三部分 口腔鳞状细胞癌HCPT耐药株中CDKL1表达上调的机制 |
| 1.引言 |
| 2. 材料与方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 小结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 综述一 |
| 参考文献 |
| 综述二 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表学术论文目录 |
| 英文论文一 |
| 英文论文二 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（2）颌骨软骨肉瘤的临床病理学研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略表 |
| 引言 |
| 第1章 颌骨软骨肉瘤的临床病理学研究 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 病例选择和临床病理资料 |
| 1.1.2 主要实验设备和主要试剂 |
| 1.1.3 实验方法 |
| 1.1.4 统计分析 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 JCS 的临床结果 |
| 1.2.2 JCS 组织病理学特点 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 结论 |
| 参考文献 |
| 第2章 颌骨软骨肉瘤的组织来源研究和预后相关研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 病例选择 |
| 2.1.2 主要实验设备和主要试剂 |
| 2.1.3 实验方法 |
| 2.1.4 统计学分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 与组织来源相关的蛋白的表达 |
| 2.2.2 与生物学行为相关的蛋白的表达 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 结论 |
| 参考文献 |
| 第3章 综述 颌面部软骨肉瘤和骨肉瘤的研究进展 |
| 3.1 颌面部软骨肉瘤中肿瘤标志物的研究进展 |
| 3.2 骨肉瘤中 Hedgehog 信号通路和 Wnt 信号通路的研究进展 |
| 3.2.1 骨肉瘤临床表现 |
| 3.2.2 骨肉瘤的病理机制研究现状 |
| 3.2.3 Hedgehog 信号通路 |
| 3.2.4 Wnt 信号通路 |
| 3.2.5 IHH 和 WNT 与 OS 的治疗 |
| 参考文献 |
| 附录 病例报告 |
| 致谢 |
| 导师简介 |
| 作者简介 |
| 学位论文数据集 |
（3）MMP-2、Cyclin D1和S-100在微创功能治疗颌骨囊性病变中表达的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 |
| 引言 |
| 第一章 材料与方法 |
| 第二章 结果 |
| 第三章 讨论 |
| 第四章 结论 |
| 第二部分 |
| 引言 |
| 第一章 材料与方法 |
| 第二章 结果 |
| 第三章 讨论 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 致谢 |
（4）P27在涎腺良恶性肿瘤中的表达（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 标本来源 |
| 1.2 结果判断 |
| 2 结果 |
| 2.1 临床资料 |
| 2.2 P27的表达特点 |
| 2.3 涎腺癌P27表达与组织病理的关系 |
| 3 讨论 |
（5）HA表位标记的azurin基因真核表达载体的构建及其转染人骨肉瘤U2OS细胞的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 论文正文 |
| 前言 |
| 第一部分 |
| 实验材料和仪器设备 |
| 实验方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 |
| 实验材料和仪器设备 |
| 实验方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述一 |
| 综述二 |
| 发表的文章 |
| 申请的课题 |
| 致谢 |
（6）人E2F3基因的克隆与表达研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 前言 |
| 第二部分 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂和材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 人E2F3基因的克隆 |
| 2.2.2 E2F3原核表达载体的构建、表达诱导和Western检测 |
| 2.2.3 真核表达载体pEGFP-N1-E2F3的构建 |
| 第三部分 结果与分析 |
| 3.1 基因的克隆 |
| 3.1.1 RT-PCR |
| 3.1.2 两轮PCR |
| 3.1.3 降落PCR(Touch-down PCR) |
| 3.1.4 巢式PCR(nested-PCR) |
| 3.1.5 TA克隆测序 |
| 3.1.6 桥联PCR(overlap-PCR) |
| 3.2 E2F3原核表达载体的构建及原核表达 |
| 3.2.1 原核表达载体pET28a-E2F3和pET32a-E2F3质粒构建 |
| 3.2.2 原核表达载体pQE30-E2F3的构建 |
| 3.2.3 原核表达载体pGEX-4T-E2F3的构建 |
| 3.2.4 原核蛋白表达诱导 |
| 3.2.5 重组蛋白的Western检测 |
| 3.3 真核表达载体的构建及其细胞学实验 |
| 3.3.1 真核细胞表达载体pEGFP-N1-E2F3的构建 |
| 3.3.2 E2F3在真核细胞中的表达 |
| 第四部分 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附图 |
（7）人骨肉瘤中P14ARF、P53和E2F-1的表达及其意义（论文提纲范文）
| 论文部分 人骨肉瘤中P14ARF、P53和E2F-1的表达及其意义 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 综述部分 INK4a／ARF基因位点与肿瘤的发生和发展 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 致谢 |
（8）人p27kiplcDNA克隆及其对人舌癌细胞系Tca8113细胞生物学作用的研究（论文提纲范文）
| 英 文 缩 写 |
| 第一章 绪 论 |
| 1 细胞周期调控的研究进展 |
| 1.1 cyclin |
| 1.2 CDK |
| 1.3 CKI |
| 1.4 细胞周期的调控途径 |
| 2 基因治疗的研究进展 |
| 2.1 基因治疗途径 |
| 2.2 基因治疗的转移系统 |
| 2.3 基因治疗策略 |
| 3 舌癌的治疗 |
| 3.1 化疗 |
| 3.2 手术 |
| 3.3 放疗 |
| 3.4 舌癌基因治疗的研究 |
| 4 立题依据 |
| 第二章 材料与方法 |
| 1 主要试剂及器材 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 主要器材 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 细胞株 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 RT-PCR获得目的cDNA |
| 2.2 表达载体的构建 |
| 2.3 pcDNA3-p27kip1重组质粒转染Tca8113细胞 |
| 2.4 流式细胞术检测蛋白质的表达 |
| 2.5 细胞生长速率测定 |
| 2.6 细胞周期的检测 |
| 2.7 化疗药物对细胞生长影响的检测 |
| 2.8 统计学方法 |
| 第三章 实验结果 |
| 1 p27kip1重组质粒的构建 |
| 1.1 人野生型p27kip1基因的扩增及序列测定 |
| 1.2 重组表达质粒pcDNA3-p27kip1的构建与转染 |
| 2 p27kip1基因转染Tca8113细胞中的p27kip1蛋白的表达 |
| 3 p27kip1基因转染对Tca8113细胞生长的影响 |
| 4 p27kip1基因转染对Tca8113细胞周期的影响 |
| 5 p27kip1基因转染对Tca8113细胞凋亡的影响 |
| 6 p27kip1基因转染的Tca8113细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2的表达 |
| 7 化疗药物对p27kip1基因转染的Tca8113细胞生长的影响。 |
| 7.1 顺铂 |
| 7.2 丝裂霉素 |
| 7.3 氟尿嘧啶 |
| 7.4 环磷酰胺 |
| 7.5 甲氨蝶呤 |
| 7.6 平阳霉素 |
| 7.7 阿霉素 |
| 7.8 长春新碱 |
| 第四章 讨 论 |
| 1 目的基因p27kip1cDNA克隆及重组质粒的构建 |
| 1.1 RT-PCR法克隆p27kip1cDNA |
| 1.2 重组表达质粒pcDNA3-p27kip1的构建 |
| 2 重组表达质粒的转染及稳定转染细胞的筛选 |
| 3 p27kip1基因在Tca8113细胞中的整合及表达 |
| 4 p27kip1基因转染对Tca8113细胞生长的影响 |
| 5 p27kip1基因转染对Tca8113细胞增殖抑制作用的机制 |
| 5.1 p27kip1基因转染对Tca8113细胞周期的影响 |
| 5.2 p27kip1基因转染诱导了Tca8113细胞凋亡 |
| 6 化疗药物对p27kip1基因转染的Tca8113细胞生长的影响 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 攻读博士期间发表论文 |
| 致谢 |
| 论文摘要(中文) |
| 论文摘要(英文) |
| 吉林大学博士学位论文原创性声明 |
（10）颌骨骨肉瘤中p27的表达及意义（论文提纲范文）
| 材 料 和 方 法 |
| 1 标本来源: |
| 2 主要材料: |
| 3 免疫组化染色方法: |
| 4 结果判定: |
| 5 统计学分析: |
| 结 果 |
| 讨 论 |
四、颌骨骨肉瘤中p~(27)的表达及意义（论文参考文献）
- [1]口腔鳞状细胞癌HCPT耐药中CDKL1的作用和机制研究[D]. 李克义. 山东大学, 2019(02)
- [2]颌骨软骨肉瘤的临床病理学研究[D]. 樊志华. 河北联合大学, 2014(01)
- [3]MMP-2、Cyclin D1和S-100在微创功能治疗颌骨囊性病变中表达的研究[D]. 辛俊彤. 青岛大学, 2011(06)
- [4]P27在涎腺良恶性肿瘤中的表达[J]. 唐祎,王立坤,贺国权. 实用医学杂志, 2010(22)
- [5]HA表位标记的azurin基因真核表达载体的构建及其转染人骨肉瘤U2OS细胞的实验研究[D]. 叶招明. 浙江大学, 2006(08)
- [6]人E2F3基因的克隆与表达研究[D]. 林谅. 西北大学, 2005(02)
- [7]人骨肉瘤中P14ARF、P53和E2F-1的表达及其意义[D]. 原向伟. 郑州大学, 2004(04)
- [8]人p27kiplcDNA克隆及其对人舌癌细胞系Tca8113细胞生物学作用的研究[D]. 刘文书. 吉林大学, 2004(04)
- [9]颌骨骨肉瘤细胞周期相关蛋白的免疫组织化学分析[A]. 司晓辉,杨连君. 第一届全国口腔颌面部肿瘤学术会议论文汇编, 2001
- [10]颌骨骨肉瘤中p27的表达及意义[J]. 司晓辉,金岩,杨连甲,TipoeGL. 口腔医学, 2000(04)