一、纤维蛋白胶载神经生长因子促进周围神经再生的研究（论文文献综述）
王苏龙[1]（2021）在《保留外膜完全横断法构建坐骨神经小间隙缺损模型评估富血小板血浆（PRP）对于周围神经再生的影响》文中进行了进一步梳理目的:评估富血小板血浆（platelet rich plasma,PRP）对于周围神经再生的效果。方法:选取新西兰大白兔28只,并随机分为A（n=7）、B（n=21）,其中B组分为3个亚组即B1、B2、B3组（n=7）。每只家兔选取右侧坐骨神经并制作成保留外膜的坐骨神经小缺损模型,A组为实验对照组,即往小缺损中加入生理盐水;B组为PRP组,B1-B3组依次为低浓度组、中等浓度组、高浓度组,按照分组往小缺损中加入不同浓度的PRP。PRP组每2周局部注射一次PRP,共注射3次。模型制作:家兔麻醉后俯卧位固定手术台上,右臀区消毒铺无菌单并暴露家兔坐骨神经,见家兔坐骨神经可有4个神经束,中央两个神经束较粗,两边两个神经束较细,将两边的细的神经剪断,粗的神经束纵行切开神经外膜,并分离外膜下神经束,直视下予以剪断,剪断后的神经束因自身张力而回缩,并形成一个约2-3mm的神经间隙,两侧断端各修整1mm使其形成5mm的神经缺损区域,缝合神经外膜。PRP制备:家兔耳中央动脉取血,B1组血样10ml（1ml输血用枸橼酸钠注射液+9ml全血）,B2组血样为15ml（1.5ml输血用枸橼酸钠注射液+13.5ml全血）,B3组血样20ml（2ml输血用枸橼酸钠注射液+18ml全血）,采用文献中两步离心法制作PRP,留取0.02ml血样进行血小板计数,其余血样置入无菌离心管中进行第一步离心（2000rpm 10min）,离心完毕后可见血样分为三层,由上到下依次是上清液层、白膜层（PRP层）、红细胞层,抽取并保留1ml红细胞层,进行第二步离心（2400rpm 10min）,离心后抽取上清液并最终形成2ml的 PRP,取 0.02mlPRP 混合 0.98ml 血小板稀释液（Solarbio,G3590）进行人工血小板计数（稀释倍数50倍）,其余按照10:1的比例混合10%氯化钙并激活PRP。12周左右对于每个组的家兔进行电生理检测,获得家兔复合神经干动作电位、复合神经肌动作电位以及神经传导速度;对于家兔坐骨神经损伤部位进行组织切片并进Luxol fast blue染色;每只家兔去腓肠肌以及胫骨前肌测量肌肉的湿重比,取患侧腓肠肌肌腹进行Masson染色,并光镜下评估肌纤维和胶原纤维的构成比。结果:肌电图结果显示:A组均未引出正常波形,B1组仅1只家兔可以记录到复合肌动作电位,B2组家兔仅1只家兔未测出复合肌动作电位其余的家兔均测得复合肌动作电位,B3组家兔全部可以记录到复合肌动作电位。湿重比:B3组和B2组的靶肌肉的湿重比要大于A组和B1组,且组间差异具有统计学意义,即B3、B2组靶肌肉的失神经再支配程度要优于A组和B1组且肌肉萎缩程度也较A组和B1组要轻,而B3组与B2组之间比较,湿重比并无显着差异（P>0.05）,因此可认为两组间靶肌肉的萎缩程度以及再支配程度大致相同。肌肉Masson染色结果显示,B2、B3组肌纤维构成率要高于B1和 A 组（P<0.05）。神经Luxal fastblue染色结果可见B3组和B2组的有髓神经纤维数量要明显多于B1组和A组结论:富血小板血浆于周围神经组织的再生具有促进作用,主要作用方面包括1.PRP可以提高有髓神经纤维的再生数量和质量。2.PRP可以改善靶器官失神经萎缩的情况,促进失神经再支配进程。3.PRP可以改善损伤坐骨神经的肌电图参数。
董瑞一[2]（2021）在《静电纺聚己内酯（PCL）-羊膜纳米纤维膜预防神经松解术后粘连及促进修复的研究》文中研究指明慢性神经卡压（Chronic nerve compression,CNC）是周围神经损伤的一种常见形式,常导致神经性支配区的疼痛、麻木、肌肉萎缩和运动功能障碍。临床确诊的CNC患者,90%为腕管综合征（Carpal tunnel syndrome,CTS）,每年影响全球4.9%至7.1%的人口。由于CTS影响到中年活跃工作者,它与大量的医疗保健费用和经济负担有关。例如,在美国,与CTS相关的年度总成本超过20亿美元。手术能够精准的解除卡压,缓解症状、恢复功能。但术中出血、神经及周围组织损伤等不可避免导致神经粘连及瘢痕形成,严重者导致复发。神经卡压术后,如何对卡压神经加以保护,最大限度地减轻其继发性损害,尽快恢复其传导功能,仍是目前尚未解决的难题。通过对神经结构、恢复机制及粘连原因的深入研究,探索了很多防止神经粘连、促进神经恢复的方法和材料。羊膜是羊膜腔内表面的一层薄膜,来源充足,无血管、淋巴及神经的膜性结构,免疫原性低,富含胶原蛋白和弹性蛋白以及多种生长因子可以抑制炎性反应,减少瘢痕形成,改善微环境,促进神经修复,其独有的结构及性质使其成为理想的生物材料。课题组在临床应用中发现羊膜降解较快,机械强度低,抗挤压能力较差,易撕裂,无法为神经的修复支撑起足够的空间。为克服上述羊膜材料的局限性,需要引入其他材料来发挥羊膜材料的巨大潜能。本课题将生物羊膜,通过静电纺丝技术,在羊膜两个表面静电纺聚己内酯（polycaprolactone,PCL）纳米纤维,制备静电纺聚己内酯（PCL）-羊膜纳米纤维膜,使羊膜强度更大、体内存留时间延长,支撑起神经恢复的再生室,为松解后的神经恢复提供有力保障。本课题随访验证慢性神经卡压松解术预防神经粘连的有效性,并建立大鼠坐骨神经慢性卡压模型评估PCL-羊膜防治神经粘连及促进修复的效果。本研究发现:1.腕管综合征切开松解术应用几丁糖预防正中神经粘连治疗后,运动功能握力、捏力均明显增加,感觉功能两点辨别觉也明显恢复,BCTQ及DASH量表评分均明显改善,恢复工作时间明显缩短,达到了满意的效果。2.PCL-羊膜能够有效阻止巨噬细胞的侵袭,减轻炎性反应,抑制COL-I、COL-III合成,减少纤维蛋白的沉积,能够保护神经免受疤痕组织侵犯,预防神经与周围组织粘连。3.PCL-羊膜可为慢性卡压松解后的坐骨神经支撑起相对稳定微环境,通过释放NGF、BDNF、NT-3、GDNF、CNTF等生物活性物质,经纳米纤维膜的孔隙扩散至卡压部位,提高NGF、GAP-43表达,促进神经的修复与再生,获得良好的治疗效果。PCL纳米纤维膜作为内层,通过其适度的亲水性和光滑性来维持神经及肌腱的滑动。本课题利用静电纺丝技术构建PCL-羊膜纳米纤维膜,増强了羊膜的机械强度,延长了羊膜在体内的作用时间,减轻了炎性反应,抑制COL-I、COL-III合成,减少了纤维蛋白的沉积,预防神经粘连。而且能为松解后神经支撑起相对稳定微环境,缓释多种生长因子促进了神经的恢复,为解决松解后神经粘连及恢复这一临床难题提供了新的治疗策略,具有广阔的应用前景。第一部分预防腕管综合征手术正中神经粘连的临床研究目的:周围神经卡压（Chronic nerve compression,CNC）如腕管综合征是手外科常见病、多发病。术后神经粘连及瘢痕形成是导致复发的常见原因,迄今为止无有效的方法解决。本研究探讨在腕管切开正中神经松解术（OCTR）中联合应用几丁糖预防正中神经粘连,在改善患者临床症状方面是否比单独OCTR更有效。方法:本研究收集来自于河北医科大学第三医院、河北省沧州中西医结合医院共61例腕管综合征患者。根据术中是否应用几丁糖,分为对照组和实验组。分别于术前及术后1、3、6个月对患者进行评估,通过记录术后柱状痛发生率及术后恢复工作的时间,测量患肢握力、捏力值及示指远节指腹两点辨别觉,填写BCTQ及DASH量表,评估OCTR中联合应用几丁糖预防正中神经粘连的临床效果。结果:实验组术后恢复工作的时间短于对照组,各时间点握力、捏力值大于对照组,两点辨别觉小于对照组,BCTQ评分低于对照组,差异有统计学意义;实验组术后柱状痛发生率及术后第1个月DASH评分与对照组相比差异均无统计学意义,其余时间点DASH评分低于对照组,差异有统计学意义。小结:在OCTR中联合应用几丁糖预防正中神经粘连,经随访证实患者运动功能握力、捏力均明显增加,感觉功能两点辨别觉也明显恢复,BCTQ及DASH量表评分均明显改善,恢复工作时间明显缩短,达到了满意的效果。第二部分静电纺聚己内酯（PCL）-羊膜纳米纤维膜抑制神经松解后COL-I、Ⅲ合成预防粘连的实验研究目的:神经松解术后粘连及瘢痕形成是导致复发的常见原因,本章的研究目的是将仿静电纺聚己内酯（PCL）-羊膜纳米纤维膜应用于大鼠坐骨神经慢性卡压模型,明确其防止粘连的效果。方法:本实验按照Mackinnon法制备大鼠坐骨神经卡压模型,4周后行坐骨神经松解术,随机分为对照组、几丁糖组、PCL-羊膜组。术后2、4、8、12周行大体观察、切取卡压段神经行组织学观察,并通过Western-Blot测定I型和Ⅲ型胶原含量。结果:通过对松解后坐骨神经的大体观察对比发现,随着时间的延长粘连逐渐加重,12周时,PCL-羊膜组静电纺丝羊膜部分吸收,神经与周围组织粘连较疏松,易钝性分离。几丁糖组几丁糖完全吸收,神经与周围组织粘连较广泛,不易钝性分离。对照组与周围组织粘连广泛而致密,钝性分离困难。组织学观察PCL-羊膜组各时间点CD68阳性的总活化的巨噬细胞及CCR7阳性的促炎性M1巨噬细胞均少于几丁糖组及对照组。术后各时间点Ⅰ、Ⅲ型胶原相对含量PCL-羊膜组低于几丁糖组,几丁糖组低于对照组,3组结果组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。小结:在大鼠坐骨神经慢性卡压模型中,PCL-羊膜有效阻止了巨噬细胞的侵袭,减轻了炎性反应,抑制了COL-I、COL-III合成,减少了纤维蛋白的沉积,能够保护神经免受疤痕组织侵犯,预防神经与周围组织粘连。为解决神经松解术后粘连这一临床难题提供了理论依据和动物实验基础。第三部分静电纺聚己内酯（PCL）-羊膜纳米纤维膜促进神经松解后NGF、GAP-43表达加快修复的实验研究目的:神经松解术后,如何对松解后的神经加以保护,尽快恢复其传导功能,仍是目前尚未解决的难题。本章的研究目的是将仿静电纺聚己内酯（PCL）-羊膜纳米纤维膜应用于大鼠坐骨神经慢性卡压模型,明确其促进神经恢复的效果。方法:选用成年雄性SD大鼠（河北医科大学实验动物中心提供）96只,随机分为PCL-羊膜组、几丁糖组、对照组,每组32只。按照Mackinnon法制备大鼠坐骨神经慢性卡压模型,4周后验证造模成功行坐骨神经松解术,PCL-羊膜组神经卡压处应用PCL-羊膜包裹,几丁糖组应用医用几丁糖凝胶包裹,对照组不做任何处理,术后进行大体及组织学观察以及腓肠肌湿重比以及肌束面积比、热板试验、坐骨神经功能指数和RT-PCR检测NGF及GAP-43 m RNA表达。结果:大体及透射电镜观察显示:PCL-羊膜组与对照组相比术后神经充血水肿轻,与周围组织粘连疏松,炎性反应小,髓鞘厚度厚,轴突直径更大;与几丁糖组相比术后2、4周差别不大,术后8、12周PCL-羊膜组神经粘连更轻,髓鞘厚度更厚,神经恢复更好;神经电生理检测显示:PCL-羊膜组与对照组组相比神经波幅更高,传导速度更快,术后2、4周与几丁糖组比较无明显差异,术后8、12周PCL-羊膜组比几丁糖组神经波幅更高,传导速度更快,差异有统计学意义（P<0.05）;免疫组化结果显示:神经中S-100蛋白表达PCL-羊膜组明显多于几丁糖组及对照组;腓肠肌湿重比及肌束面积比PCL-羊膜组>几丁糖组>对照组（P<0.05）;热板试验结果显示:大鼠对热刺激的潜伏期随时间延长逐渐缩短,各时间点PCL-羊膜组明显短于对照组,术后4周以后PCL-羊膜组潜伏期短于几丁糖组（P<0.05）;RT-PCR结果显示:坐骨神经中NGF及GAP-43 m RNA表达相对含量羊膜组羊膜组>几丁糖组>对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。小结:在大鼠坐骨神经慢性卡压模型中,PCL-羊膜可为慢性卡压松解后的坐骨神经支撑起相对稳定微环境,通过释放NGF、BDNF、NT-3、GDNF、CNTF等生物活性物质,经纳米纤维膜的孔隙扩散至卡压部位,提高NGF、GAP-43表达,促进神经的修复与再生,获得良好的治疗效果。为解决神经松解术后粘连这一临床难题提供了新的治疗策略,具有广阔的应用前景。
黄志强[3]（2020）在《石墨烯及其衍生材料对雪旺细胞的调控作用探讨》文中研究表明周围神经损伤（peripheral nerve injury,PNI）是常见的临床病症,目前PNI修复的临床技术仍然有限,迫切需要新的修复方案及技术。以生物材料、种子细胞和外界刺激为主的神经组织工程技术表现出良好的应用前景。雪旺细胞是周围神经系统内重要的一类胶质细胞,PNI损伤后行使一系列促进神经再生的功能。神经系统具有电本性及取向性结构,因此研究电刺激（electrical stimulation,ES）及调控支架形貌对雪旺细胞行为的调控作用具有重要意义。本论文中基于石墨烯及其衍生材料独特的物理化学性能,制备了含石墨烯（及其衍生材料）的复合材料。将RSC-96雪旺细胞作为研究对象,研究ES和支架材料理化性能对RSC-96雪旺细胞行为的影响,为PNI修复提供理论依据。主要研究结果如下:1、利用溶液浇筑法制备了掺杂不同浓度石墨烯的热塑性聚氨酯薄膜。随石墨烯含量的增加,薄膜导电和力学性能先增加后回落。石墨烯浓度为4 wt%时,薄膜导电率可达33.45±5.357 S/m。体外生物学评价中,薄膜的溶血率均低于5%。10 m V直流电刺激可有效促进RSC-96细胞的增殖和生长,且过高的ES电压条件对雪旺细胞的生长有抑制作用。2、利用HUMMER法制备氧化石墨烯（graphene oxide,GO）,采用真空辅助抽滤技术将其涂覆于取向的纤维膜。研究了涂覆工艺对支架形貌特征及理化性能的影响。GO负载后纤维膜表面亲水性显着提高,机械性能增强约30%。GO浓度为0.35 wt%时,纤维膜表面取向特征较完整保留。体外试验表明,高度取向的纤维特征引导RSC-96细胞的呈伸长铺展,GO的存在对RSC-96细胞生长增殖无显着影响。3、通过抗坏血酸还原GO得到还原氧化石墨烯产物（reduced graphene oxide,r GO）,结合上节中静电纺丝技术制备的取向型纤维膜,对其表面进行r GO的电活性功能化涂覆,并研究ES与取向特征对RSC-96细胞多种行为的协同调控作用。纤维膜的亲水性、导电性能和机械性能随着r GO负载有一定程度增强。r GO浓度为0.1 wt%时,纤维膜导电率为0.105 S/m,且取向特征较好保留。在10 m V电刺激作用下,纤维取向和ES的协同作用有效增强了RSC-96细胞的迁移、增殖和神经生长因子表达,且细胞均匀铺展高度有序。本论文的新颖之处在于:（1）基于石墨烯制备了导电性能优越的取向神经工程支架,并探讨ES对雪旺细胞生长行为的影响;（2）利用简易的物理加工工艺,实现了纤维膜表面功能化并有效保留纤维膜的取向特征;（3）研究支架的形貌特征与ES对雪旺细胞行为的协同影响,表明ES和取向结构的协同作用有效地促进了雪旺细胞迁移、增殖及神经生长因子的分泌等行为。上述研究为PNI修复治疗技术的研发提供了有力的支撑。
黄慜璐[4]（2020）在《鼠自体组织神经导管修复坐骨神经缺损的实验研究》文中进行了进一步梳理第一部分小鼠骨骼肌神经导管促进坐骨神经损伤修复的机制研究目的:骨骼肌神经导管可以促进小鼠坐骨神经损伤修复,然而作用机制尚不明确。本研究旨在探索其促进周围神经修复的机制以及观察导管管壁内活细胞对神经再生的正向促进作用。方法:体外实验部分:1)对骨骼肌神经导管的原材料——小鼠腹外斜肌薄片修剪后进行贴壁培养,4天后行免疫荧光染色分析从肌肉中迁移增殖的细胞种类;2)肌源性干细胞条件培养分化检测,从C57BL/6小鼠骨骼肌中分离培养肌源性干细胞,将肌源性干细胞与损伤后的小鼠坐骨神经匀浆上清液共培养,研究其分化趋势;3)对腹外斜肌薄片在体外进行辐照（细胞抑制）、脱细胞（细胞灭活）处理,观察肌源性细胞的增殖和迁移特性变化。体内实验,为探讨导管内肌源性细胞的作用,将实验动物分为未处理骨骼肌神经导管组、辐照神经导管组以及脱细胞神经导管组,每组16只C57BL/6小鼠。将腹外斜肌修剪为带有骨骼肌肌纤维的肌外膜薄片,卷曲后制备为中空的骨骼肌神经导管,第一组无特殊处理,第二组导管经辐照处理,第三组导管经脱细胞处理,采用3种7mm长度的导管桥接小鼠5 mm坐骨神经缺损。于术后8周、12周,采用免疫荧光染色和透射电镜对再生神经组织进行评价。利用小鼠足印分析、腓肠肌湿重检测和腓肠肌切片染色,评价神经功能及靶器官的恢复程度。另取C57BL/6小鼠,每组3只,于术后7天经心脏行埃文斯蓝-明胶血管灌注染色,评价各组再生神经组织中段血管早期重建情况。结果:1.将小鼠腹外斜肌薄片贴壁培养后,迁移增殖的细胞中包含成纤维细胞、肌源性细胞、干细胞。2.骨骼肌中的肌源性干细胞在体外损伤神经的微环境下,可以向雪旺细胞方向分化。3.脱氧胆酸钠和混合酶对腹外斜肌进行脱细胞处理可在有效破坏细胞核、破坏细胞活性以及抑制细胞迁移的同时,维持组织结构完整性;辐照可以有效抑制腹外斜肌内细胞的增殖与迁移。4.无特殊处理、辐照后或脱细胞后的腹外斜肌均可以制备为中空导管状结构作为神经导管。5.体内实验结果表明:神经导管桥接坐骨神经缺损术后8周和12周,骨骼肌神经导管组在大体外观、轴突髓鞘分布均匀程度、有髓神经纤维数目以及改善腓肠肌萎缩方面明显优于辐照组和脱细胞组。导管管壁内活性细胞可分化为雪旺样细胞参与辅助小鼠坐骨神经再生。6.神经导管桥接坐骨神经缺损术后7天骨骼肌神经导管管壁内血管已经出现再通,再生组织内血管密度显着高于辐照组、脱细胞组。但术后8周、12周中晚期时间点观察骨骼肌神经导管组、辐照组、脱细胞组的神经导管表面均存在密集的血管分布,再生组织中段横截面血管密度差异无统计学意义。结论:研究结果揭示了损伤后神经产生的微环境可能对肌源性干细胞起到诱导分化作用。骨骼肌神经导管修复小鼠坐骨神经缺损效果优于辐照后的骨骼肌神经导管以及脱细胞后的骨骼肌神经导管,表明骨骼肌内中的活性细胞参与并正向促进小鼠坐骨神经再生。骨骼肌神经导管的另一优势在于早期管壁内血管再通,以及内部血管的新生,为神经再生创造了良好的血运和环境。本研究为合理、高效地利用肌源性组织促进周围再生提供一种新方法,同时扩展了肌源性组织促进再生的相关机制。第二部分富血小板纤维蛋白膜神经导管对小鼠坐骨神经损伤修复的实验研究目的:富血小板纤维蛋白是新一代血小板纤维蛋白凝胶制品,具有良好的促进组织再生潜能。目前尚无研究将膜片状富血小板纤维蛋白制备成神经导管,用于周围神经损伤修复。本研究的目的是探讨富血小板纤维蛋白膜神经导管对周围神经修复的作用。方法:采集供体SD大鼠中5 ml血液进行离心,取中间凝胶状富血小板纤维蛋白,用金属压膜盒将凝胶状的纤维蛋白压制成致密薄膜状。膜片状富血小板纤维蛋白卷曲可制备成为中空神经导管。将24只BALB/c裸小鼠随机分为3组进行研究（每组8只）。在小鼠右侧坐骨神经制造5 mm神经离断性损伤后,接受富血小板纤维蛋白膜神经导管移植治疗组作为实验组,接受自体神经移植治疗组作为阳性对照组,接受聚氨酯导管治疗组作为阴性对照组。采用免疫荧光染色法和透射电镜对再生神经进行组织学分析;对坐骨神经靶器官腓肠肌测量湿重并对腓肠肌切片进行马松三色染色,观察腓肠肌萎缩恢复程度。结果:成功制备富血小板纤维蛋白膜神经导管,扫描电镜下显示膜状的富血小板纤维蛋白表面布满交错的纤维,形成网状结构。通过评价再生组织中段免疫组织切片中的有髓神经纤维数量、神经纤维直径、髓鞘厚度,以及靶器官腓肠肌的恢复程度,发现小鼠坐骨神经损伤修复术后12周,富血小板纤维蛋白膜神经导管组有髓神经纤维数量（p<0.0001）、神经纤维直径（p=0.0052）、髓鞘厚度（p=0.0038）、腓肠肌萎缩恢复程度均明显优于聚氨酯导管组（p<0.01）。富血小板纤维蛋白膜神经导管组的再生轴突数量较自体神经移植组少（p<0.05）,髓鞘厚度稍低（p=0.0129）,而神经纤维直径、腓肠肌恢复程度方面与金标准自体神经移植相似,差异无统计学意义。结论:研究显示膜片状富血小板纤维蛋白可以制备成中空神经导管,该神经导管桥接小鼠坐骨神经缺损后可以促进周围神经再生。有望今后应用于临床创伤修复中。
侯袁婧[5]（2019）在《腔内基质填充导管的制备及其修复周围神经缺损的研究》文中提出外伤性周围神经损伤是临床上一种常见的疾病,对离断性长段缺损（>1cm）来说,实现自我神经修复过程非常困难。虽然已有几种神经支架已获得FDA批准用于生产和临床使用,但神经功能恢复程度有限,而且将这些支架用于修复3cm以上缺损时效果不尽人意,其主要原因是修复长段缺损需要的修复时间较长,再生的神经缺乏有力的引导而错乱的分散在支架中,造成神经不能实现正确对接,最终难以实现神经功能上的恢复。目前研究主要通过在神经导管内引入纤维、基质、水凝胶等填充基质的方式来解决这个问题,对填充基质通过一定的仿生设计以发挥对轴突的趋触性引导作用,从而达到促进神经修复的目的。细菌纤维素（bacterial cellulose,BC）作为新型天然高分子,由于具有高比表面积、高持水性、良好的生物相容性等特性被广泛用于生物医用领域,但是在神经支架方面鲜有报道,将其作为神经导管腔内填充基质用于修复神经缺损的研究更少。本文旨在制备一种新型腔内基质填充型神经导管,评价该导管的理化性能和生物相容性,进一步将其植入大鼠体内进行坐骨神经10 mm缺损修复的研究,为实现其在神经修复中的应用提供理论指导和实验依据。本文制备的腔内基质填充型导管包括静电纺丝技术制备的聚乳酸-羟基乙酸（polyglycolic acid,PLGA）外导管和冷冻干燥法制备的氧化细菌纤维素-胶原基质复合填充支架。首先通过静电纺丝工艺探索,优化了电纺PLGA纳米纤维膜的实验条件,选用浓度为15%的PLGA-DCM/DMF溶液进行纺丝,设置电压15 k V,推注速度0.4 m L/h,接收距离15 cm时可获得均匀连续的纳米纤维膜。所制备的纤维直径为283±73 nm,纤维直径分布在100-500 nm之间。厚度为0.2mm的膜拉伸强度达到3.1 MPa,断裂伸长率为24.9%,PLGA纳米纤维膜良好的孔隙结构和力学性能,不仅为营养物质和气体的交换提供多孔通道结构,同时能为神经再生提供足够的力学支撑,所以选择其作为神经支架进行进一步研究。由于人体内没有纤维素酶,将BC植入体内后难以降解,本文利用高碘酸钠对BC进行选择性氧化以制备了可降解氧化细菌纤维素（oxidized bacterial cellulose,OBC）,并对其进行了理化性能表征、细胞相容性和血液相容性的评价。研究了氧化度（oxidation degree,O.D.）对OBC支架的分子结构、形貌、孔隙度、力学性能和生物降解性的影响,评价了将OBC作为神经支架研究了其生物相容性。氧化度的提高降低了力学性能,但OBC0.05/3和OBC0.05/6的拉伸强度仍有3Mpa以上,满足手术和神经修复过程中所需要的力学强度和力学支撑。不同氧化度的OBC在7天内发生不同程度的降解,其中O.D.值为9.3%的OBC0.05/3的体外降解率为BC的15倍。将OBC与生物相容性较好的胶原（collagen,COL）通过席夫碱反应复合,制备了OBC-COL复合支架。OBC与COL质量比为7:3的OBC-COL2样品中的交联度最高。OBC-COL复合支架仍维持着三维互通的网状多孔结构,各孔隙之间由高长径比纤维互相连接和交织,孔隙率达70%以上,孔径在10-100μm的孔占70%。OBC与COL复合后热稳定性提升,细胞实验结果表明OBC-COL2表现出更好的生物相容性。将静电纺丝法和冷冻干燥法结合制备了腔内基质填充导管（intraluminal sponge filled nerve guidance conduit,ISF-NGC）,其中PLGA纳米纤维作为导管的外壁,OBC-COL复合支架作为腔内填充基质。将ISF-NGC植入大鼠体内研究用于修复坐骨神经缺损,结果表明ISF-NGC对神经再生有积极作用,其中再生髓鞘的成熟度优于中空导管（hollow nerve guidance conduit,H-NGC）,并与自体神经移植组无明显差异。第8周后ISF-NGC组大鼠SFI值接近自体移植组。腓肠肌恢复情况结果表明,ISF-NGC更有利于缓解肌肉萎缩的症状。H-NGC为神经再生提供了一个通道,而ISF-NGC中填充的多孔支架为神经再支配提供了模拟了自体神经中细胞外基质的结构,可以引导再生神经生长和延伸,从而促进神经再支配过程。综合实验结果表明,该导管能很好的促进神经再生和神经功能恢复,具有很好的应用价值。
王宇强[6]（2019）在《透明质酸水凝胶缓释雪旺细胞外泌体修复坐骨神经长节段缺损的实验研究》文中研究指明目的:（1）体外分离新生SD大鼠雪旺细胞并培养,超速离心法提取雪旺细胞分泌的外泌体并进行特异性蛋白鉴定。透射电镜观察雪旺细胞外泌体的粒径和分布。（2）研究雪旺细胞外泌体对神经元及雪旺细胞的生物学作用。观察和研究透明质酸凝胶缓释外泌体的生物学特征参数。（3）探讨透明质酸水凝胶包裹缓释雪旺细胞外泌体填充PCL神经导管修复大鼠坐骨神经长节段缺损的形态学和功能学效果。方法:（1）采用0.1%Ⅳ型胶原酶消化法提取原代大鼠雪旺细胞,并采用DMEM/F12完全培养基培养和纯化。采用S100和Sox10进行纯度鉴定。采用CCK-8试剂盒对雪旺细胞的增殖状态进行检测。采用超高速离心法提取雪旺细胞分泌的外泌体,利用BCA试剂盒检测外泌体中蛋白的含量。Western blot法对雪旺细胞分泌外泌体表面标志物CD63、TSG101、CD9、Rab5和Na+/K+ATP酶进行鉴定。（2）构建1%浓度的透明质酸水凝胶,并将雪旺细胞外泌体进行包裹。体外放置于PBS中采用BCA试剂盒检测外泌体的缓释曲线。应用雪旺细胞外泌体干预雪旺细胞和神经元,CCK-8试剂盒检测外泌体对雪旺细胞的增殖作用,以及对两种细胞生物活性蛋白分泌的作用。ELISA法检测培养第1、3、5天后,外泌体干预的雪旺细胞表达神经生长因子（NGF）、脑源性神经生长因子（BDNF）、髓鞘零蛋白（P0）、细胞极性蛋白Par-3的水平。同时ELISA法检测外泌体干预后第1、3、5天时神经元中生长相关蛋白43（Growth-associatedprotein-43,GAP-43）、神经丝蛋白-200（Neurofilament-200,NF-200）、βIII–Tubulin的表达水平。（3）静电纺丝制备PCL神经导管,并采用扫描电镜观察导管的大体形态及显微结构,测量纤维丝的直径。采用小量程的力学仪器检测PCL神经导管的的杨氏模量、最大应力、最大载荷、最大断裂张力等力学参数。采用透明质酸水凝胶包裹雪旺细胞外泌体填充PCL神经导管,制备15mm长节段大鼠坐骨神经缺损,并进行端端吻合。采用单纯透明质酸填充PCL导管作为对照组,自体神经移植组也进行对照。在术后4、8、12周时检测大鼠坐骨神经指数、再生神经电生理功能。荧光金逆行示踪检测大鼠神经元胞体的存活情况及神经再生的情况。透射电镜观察三组再生神经的有髓轴突的直径、有髓轴突的数量、再生轴突的面积。NF-200和S100对各组再生神经的免疫荧光染色,观察期神经结构再生情况。HE染色观察三组大鼠腓肠肌肌纤维直径的差异。结果:（1）雪旺细胞在光镜下可以看到呈梭型,体积不大,存在双极,细胞核在中间,比较明显,有折光性。细胞多呈纵行排列的形态。雪旺细胞在接种2小时后,贴壁的比率约为23.5%,6小时时的贴壁比率增加到47.9%,而在12小时的时候有88.9%的细胞贴壁,在16小时以后细胞贴壁的比率均高于99%。在培养3天时,雪旺细胞数量较最初增长了3.9倍,而培养7天时增长了11.4倍。S-100和Sox-10双标荧光染色对雪旺细胞鉴定的纯度为97%。外泌体粒径主要分布在100-160 nm之间,本研究测得的外泌体的平均直径在125 nm。Western blot检测显示外泌体特异性蛋白CD63、TSG101、CD9在本研究所提取的雪旺细胞外泌体中均有表达,而非外泌体表达蛋白Rab5和Na+/K+ATP酶则未见表达。（2）外泌体在透明质酸凝胶中前3天释放比率较大,第一天释放比率为34%,第三天达到41%,随着时间的延长,释放逐渐缓慢。在第4、5、6、8、16、32天时的累积释放比率为43%、47%、51%、53%、75%、90%,而在第64天时候检测得出累积释放率为99%,几乎完全释放。对照组轴突数量为35.4±4.3,而外泌体刺激组为126.3±14.4（P<0.05）。在轴突生长长度方面,外泌体组的平均长度长达（1563.0±132.5）μm,显着高于对照组的（864.3±77.4）μm（P<0.05）。外泌体干预组雪旺细胞在培养后的第3、5、7天时细胞增殖水平均显着高于对照组（P<0.05）。外泌体刺激后的雪旺细胞分泌NGF、BDNF、髓鞘零蛋白（P0）、细胞极性蛋白Par-3的水平在培养后第3天和第5天较第1天时均显着升高,而第5天的表达量也均显着高于第3天的水平（P<0.05）。外泌体刺激后的DRG神经元细胞分泌的标志性蛋白进行检测,结果发现GAP-43、NF-200、βIII–Tubulin的水平在培养后第3天和第5天较第1天时均显着升高,而第5天的表达量也均显着高于第3天的水平（P<0.05）。（3）PCL神经导管的内孔直径为1500μm左右,而管壁的厚度约为500μm,表面纤维丝均匀分布,纤维丝平均直径为4.9μm。PCL神经导管孔隙率为（89.7±2.6）%、最大应力为（7.5±0.6）MPa、杨氏模量为（22.4±2.1）MPa、最大断裂张力为（596.4±33.8）%、最大载荷为（5.6±0.8）N,符合神经再生要求。术后第4、8、12周时PCL/HA-EXO组大鼠的再生神经有髓轴突的直径、有髓轴突的数量、再生轴突的面积显着高于PCL/HA组,而G-ratio值则显着低于PCL/HA组（P<0.05）。而三个时间点中,PCL/HA-EXO的有髓轴突的数量、再生轴突的面积和G-ratio值均与自体神经移植组差异无统计学意义（P>0.05）。术后12周时可见PCL/HA-EXO组大鼠轴突沿着导管顺行生长,有明显的方向性。并且神经轴突及雪旺细胞的表达显着高于PCL/HA组,与自体神经移植组差异不明显。各组大鼠术后随着时间的延长,复合肌动作电位幅度、神经传导速度及潜伏期均有所改善,但PCL/HA-EXO组和自体神经组较PCL/HA组改善更为明显,术后4、8、12周三个时间点均显着高于PCL/HA组（P<0.05）。在术后第8周时,PCL/HA-EXO组和自体神经移植组的神经传导速度及潜伏期均无显着性差异,而复合肌动作电位仍存在一些差异（P<0.05）。而术后12周时,三个指标则在PCL/HA-EXO组和自体神经移植组中无统计学差异（P>0.05）。PCL/HA-EXO组和自体神经移植组的SFI指数在术后三个时间点均显着高于PCL/HA组（P<0.05）,并且在术后第8,12周时PCL/HA-EXO组和自体神经移植组的SFI指数相似,无统计学差异（P>0.05）。术后12周PCL/HA-EXO组和自体神经移植组的腓肠肌纤维直径分别为（68.4±6.2）μm和（72.3±7.6）μm,显着高于PCL/HA组（P<0.05）,而PCL/HA-EXO组和自体神经移植组则无统计学差异（P>0.05）。结论:（1）本研究成功分离提取了新生SD大鼠雪旺细胞,纯度高,满足后续实验要求。采用超速离心法加超滤法能够成功提取雪旺细胞分泌的外泌体,经鉴定是雪旺细胞分泌的外泌体,纯度较高。（2）透明质酸水凝胶能够有效的包裹和缓释雪旺细胞分泌的外泌体,其缓释曲线与体内雪旺细胞增殖迁移及神经轴突再生的时间相似,能够更好的在体内应用。雪旺细胞分泌的外泌体能够有效的促进雪旺细胞增殖,促进雪旺细胞和神经元特异性蛋白分泌,能够较好的促进神经再生。（3）PCL/HA-EXO神经导管能够有效的促进大鼠长节段神经缺损的运动功能康复及组织学及电生理学明显改善。
秦洁[7]（2016）在《CGF对雪旺细胞生物学行为及神经再生影响的研究》文中研究表明周围神经损伤是种植手术中一种严重的并发症,神经损伤后患者会出现粘膜、颏部及下唇皮肤等不同程度的感觉功能障碍。雪旺细胞是周围神经中主要的胶质细胞,在周围神经损伤后的再生过程中发挥重要作用。如何促进雪旺细胞的增殖、迁移、分泌等一系列生物学行为,具有重要的研究意义。研究发现,某些生长因子如血管内皮生长因子（VEGF）、成纤维细胞生长因子（FGF）、胰岛素样生长因子（IGF）具有促进雪旺细胞增殖、迁移等生物学行为的作用。但传统生长因子的临床应用面临很多问题,如提取步骤复杂、提取纯度不高、存在免疫排斥反应、体内稳定性低、需要反复局部注射来保证作用浓度,且单一的生长因子注射在模拟复杂体内环境上存在局限性,因而需要寻求一种更理想的生长因子治疗措施解决上述问题。浓缩生长因子（CGF）作为新一代的血小板浓缩物,内含多种生长因子如转化生长因子-β1（TGF-β1）、血小板衍生生长因子-BB（PDGF-BB）、FGF、IGF和VEGF等,是一种可靠的生长因子来源。它取自患者自体静脉血,兼具采集方便、制作简单、成本低廉、无免疫排斥反应等优点。同时因为它内含大量血小板及生长因子,相比单一生长因子,可能提供一种更丰富的更能满足细胞生长需求的生理环境,这为其治疗周围神经损伤提供了可能。本实验利用体外实验研究了CGF对雪旺细胞增殖、神经营养因子分泌功能及迁移能力的影响,并探究了CGF促进雪旺细胞迁移的机制;利用体内试验研究了CGF对周围神经损伤后功能恢复及再生神经组织结构的影响,以期为临床应用CGF治疗种植术中神经损伤提供一定的理论基础。1.CGF的结构和生长因子释放规律本实验使用扫描电子显微镜观察CGF的超微结构,通过酶联免疫吸附实验（ELISA）检测CGF内TGF-β1的释放规律。扫描电镜观察显示CGF具有纤细的纤维结构,纤维相互交错,形成三维网状结构,其中可见大量中央凹陷呈扁圆形的红细胞和表面多突起的血小板。纤维平均直径为0.36±0.14μm,孔隙率为40.44±2.97%。ELISA检测显示CGF中TGF-β1的释放可以至少持续13天,在第1天时TGF-β1的释放浓度为75 pg/ml,随后逐渐增加,至第5天时达到高峰130 pg/ml,之后逐渐减少,至第13天时减少至60pg/ml。CGF的结构特点和生长因子持续释放能力为其成为良好的细胞支架和生长因子供体提供了基础。2.CGF对雪旺细胞增殖能力的影响本实验通过CCK-8实验及细胞周期分析检测了CGF对雪旺细胞增殖能力的影响。CCK-8结果显示,200%、100%、50%浓度的CGF条件培养液均可促进雪旺细胞增殖,其中100%的CGF条件培养液促进增殖效果最明显。因而,选择100%的CGF条件培养液作为最佳浓度进行后续实验。细胞周期分析结果显示,CGF条件培养液组的细胞增殖指数（PI）显着高于DMEM对照组,进一步证明了CGF对雪旺细胞的增殖具有促进作用。3.CGF对雪旺细胞神经营养分泌功能的影响本实验通过RT-q PCR和Western blot,分别从m RNA及蛋白水平检测了CGF对雪旺细胞分泌NGF和GDNF的影响。RT-q PCR结果显示,在第1、2、3天时,CGF组NGF及GDNF的m RNA表达水平均显着高于DMEM组（p<0.05）:在各个检测时间点,CGF组NGF m RNA表达量分别是DMEM组的1.3、1.6、1.8倍,CGF组GDNF m RNA表达量分别是DMEM组的1.8、1.6、1.6倍。Werstern blot结果显示,CGF组NGF蛋白表达量在培养第2、3天显着增高,分别是DMEM组的1.1倍和1.5倍;CGF组GDNF蛋白表达量在培养第3天显着增高,是DMEM对照组的1.3倍。综上,CGF可以促进雪旺细胞的神经营养因子分泌功能。4.CGF对雪旺细胞迁移能力的影响及其机制本实验中采用细胞划痕实验观察CGF对雪旺细胞的迁移能力有无影响。雪旺细胞的迁移受多种信号通路的调节,其中整合素通路是重要调控通路之一,本实验采用Western blot检测整合素β1及其下游信号分子（p-FAK）的表达情况,以确定整合素β1信号通路是否参与了CGF介导的雪旺细胞迁移过程。利用RNA干扰技术,使整合素β1基因沉默,观察在整合素β1基因缺失状态下,CGF对雪旺细胞迁移作用的影响有无改变。划痕实验结果显示,CGF培养组的细胞迁移率是DMEM培养组的4.25倍,表明CGF可以促进雪旺细胞的迁移。Western blot结果显示CGF作用后雪旺细胞内整合素β1和p-FAK的表达水平升高,表明整合素β1信号通路参与了CGF诱导的雪旺细胞迁移过程。构建不同的si RNA质粒（si RNA-1、si RNA-2和si RNA-3）转染雪旺细胞后,RT-q PCR和Western blot结果显示,si RNA-2具有最佳的基因沉默效果:si RNA-2可使细胞整合素β1的m RNA表达水平降低70-80%,使其蛋白表达水平降低70%。整合素β1被si RNA-2沉默后,Transwell细胞迁移实验显示,CGF仍然可以促进雪旺细胞的迁移。综上,CGF可以促进雪旺细胞迁移,整合素β1信号通路参与了该过程。但CGF诱导的细胞迁移并非完全通过该信号通路,可能还存在其他分子作用途径。5.CGF促进周围神经再生的体内研究本实验建立了大鼠体内坐骨神经压迫损伤模型,利用足迹分析来观察CGF对神经损伤后功能恢复的影响,利甲苯胺蓝染色和透射电镜观察CGF对损伤后神经组织结构的影响。足迹分析实验显示CGF治疗后,其坐骨神经功能指数（SFI）显着高于对照组,表明CGF可以促进损伤后神经的功能恢复。甲苯胺蓝染色结果显示,神经损伤后其髓鞘发生变形,新生有髓神经纤维较少,而使用CGF治疗后,神经纤维髓鞘形状规则,并可见到大量新生的有髓神经纤维。透射电镜观察显示神经损伤后轴突与髓鞘内层分离,有髓神经纤维形状不规则,板层扭曲,排列不均;使用CGF治疗的有髓神经纤维排列比较整齐,板层无明显的扭曲,周围出现较多新生的有髓神经纤维,且雪旺细胞增殖明显。综上,CGF可以促进周围神经损伤后功能的恢复及组织结构的改善。
尹德馨[8]（2015）在《新剂型神经生长因子联合丙戊酸促进大鼠坐骨神经损伤再生协同作用的实验研究》文中认为周围神经损伤实质上是神经元轴突的损伤，周围神经损伤后轴突逆向运输提供的神经营养因子骤减，导致部分神经元死亡，再生乏力。研究表明，靶组织合成的神经营养物质有利于损伤神经的再生与修复。神神经生长因子在神经损伤的再生过程中起着极其重要的营养和调控作用。但NGF存在无法通过血脑屏障、全身用药毒副作用大、水溶液中生物活性半衰期短等缺陷，基于此我们利用聚乙二醇/聚（γ-乙基-L-谷氨酸酯）（PEG-PELG）水凝胶担载NGF，制备出具有缓释能力的新剂型NGF。在体外试验证实NGF与VPA联合应用有促进PC12细胞分化的协同作用的基础上，采用Wistar大鼠坐骨神经损伤后创建硅胶管神经再生室的动物模型，将新剂型NGF（注射入神经再生室内）与VPA（口服）联合使用，观察神经损伤后轴突再生的数量、质量及神经电生理功能恢复变化情况。实验结果显示：1、B、C、D、E、F、G各组在D42时间点坐骨神经的肌电图检测呈现恢复期表现，通过神经再生室远端所产生的MUAP波形欠规则、离散，时限延长，各段波形不完全相同，经过神经再生室后均有明显AMP衰减，同时经过神经再生室的CV均有明显减慢，各组与A相比，均有统计学意义（P<0.05）；其中D、E、F、G四组之间相比有差异，但无统计学意义（P>0.05），B、C两组之间相差不大无统计学意义（P>0.05），D、E、F、G四组与B、C两组相比较AMP衰减率更小、CV增高明显存在统计学差异（P<0.05）。2、观察各组再生神经轴突总面积及相对恢复率结果显示各组再生的神经均通过吻合口：A组神经轴突的髓鞘较厚，数目较多，平均直径大，其余各组光镜下观察见间质增多，再生的轴突髓鞘细小、分布分散，计算得出轴突总面积较空白组明显减少，轴突面积恢复率组间也有差异，与A组对比有明显统计学差异（P<0.05）各组之间进行比较分析，其中E、F、G三组轴突总面积及轴突面积恢复率组间无统计学差异（P>0.05），E、F、G三组轴突总面积及轴突面积恢复率分别均高于B、C、D三组具有统计学差异（P<0.05）；D组轴突总面积及轴突面积恢复率高于B、C两组具有统计学差异（P<0.05）；B、C两组轴突总面积及轴突面积恢复率组间相比无统计学差异（P>0.05）。研究结论：硅胶管神经再生室内使用新剂型NGF可以促进神经再生，且可以表现出高剂量效果优于低剂量。低剂量新剂型NGF联合使用VPA效果与高剂量及高剂量联合VPA效果类似，具有协同作用。硅胶管神经再生室模型可以有效地进行促进神经再生药物效果的测定。
李波翰[9]（2013）在《周围神经吻合后神经生长因子—纤维蛋白胶包埋的临床观察》文中进行了进一步梳理研究背景：周围神经损伤在骨科创伤中十分常见。周围神经损伤后病理过程比较复杂,神经再生速度缓慢,神经吻合后局部组织粘连,肌肉失神经萎缩及运动终板退化变性等因素,均制约着损伤神经再生及功能恢复,临床治疗效果仍不十分理想。目前周围神经离断的主要治疗手段主要有神经直接修复的手术和神经移植与桥接类手术。神经直接修复存在吻合后神经与周围组织粘连、局部缺乏含有促进神经再生的各种生长因子的微环境、易形成神经纤维瘤等缺点,效果并不理想。自休神经移植虽可提供良好的神经营养并防止神经纤维瘤,但供体有限,而且存在供体神经支配区感觉缺失、运动障碍以及可能发生痛经神经瘤等后遗症。异体神经移植又存在免疫排斥等问题。血.管、膜管等天然生物材料虽与机体有极好的生物相容性，但缺点在于存在管型塌陷、再生不良等问题。非可吸收非生物移植体需二次手术取出而可吸收非生物移植体桥接则大多处于动物实验阶段,临床应用较少。目的：回顾性分析周围神经损伤吻合后神经生长因子-纤维蛋白胶（NGF-FG）包埋的临床疗效。方法：收集山东大学第二医院2006年1月～2011年12月四肢周围神经损伤住院患者病历76例。分为两组（2006～2007年为对照组,2008～2011年为治疗组）,治疗组40例均采用外膜吻合后加用NGF-FG包埋,对照组36例采用单纯外膜缝合。通过感觉运动功能、临床疗效和肌电图检查结果,分析治疗效果。两组术后均对症治疗,定期换药,均于术后14天拆线,对相同的受损神经均采用早期肢体功能锻炼和理疗来促进神经功能的恢复。患者应用NFG-FG并未出现集体排斥反应等不良反应。结果：治疗组感觉功能评定的有效率为86.96%,优良率为69.56%；对照组有效率为75.00%,优良率为45.00%。两组比较差异有统计学意义（P<0.05）。治疗组运动功能评定的有效率为86.96%,优良率为65.22%；对照组有效率为72.50%,优良率为45.00%。两组比较差异有统计学意义（JP<0.05）。治疗组临床疗效评定的有效率为86.96%,优良率为67.39%；对照组有效率为72.50%,优良率为47.50%。两组比较差异有统计学意义（P<0.05）。治疗组肌电图恢复评定的有效率为86.96%,优良率为69.57%；对照组有效率为72.50%,优良率为47.50%。两组比较差异有统计学意义（P<0.05）。治疗组尺神经临床疗效评定有效率为66.67%,优良率为41.67%；对照组有效率为54.55%,优良率为27.27%。两组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论及意义：1.周围神经采吻合后应用周围神经生长因子-纤维蛋白胶包埋,神经功能恢复效果优于单纯外膜缝合。2.感觉功能、运动功能及临床疗效评定比较的结果间接反映出吻合口应用NGF-FG包埋可能减少了瘢痕组织粘连、神经纤维瘤等术后相关并发症所产生的不良表现,从而提高了疗效。3.吻合口应用周围神经生长因子-纤维蛋白胶包埋是治疗周围神经离断的一种更有利于神经功能恢复的手术方法,在临床上有较好的应用前景。如何更加有效地促进尺神经损伤的恢复,仍须进一步研究。
王宇清[10]（2013）在《PFTBA水凝胶促进周围神经再生的效能及机制研究》文中研究表明周围神经损伤的治疗，尤其是神经缺损的治疗，是尚未解决的世界性难题。虽然应用自体神经移植来修复神经缺损是目前临床上最为可靠的修复方法，但是自体神经移植本生所带来的并发症往往限制了这种方法的临床应用。因此，利用组织工程学原理构建人工神经来替代自体神经修复神经缺损是目前的研究趋势。然而，由于神经支架体积较大或支架血管化较慢的原因，植入体内后早期神经支架内部往往处于缺氧环境下。大量研究表明：缺氧是影响迁移入神经支架内雪旺细胞存活和再生神经功能的重要因素。而且，低氧环境可以显着降低植入支架内种子细胞的存活率，从而在很大程度上限制了其修复神经缺损效能的发挥。因此，提高神经支架内部氧分压，尤其是在移植入早期，可明显改善神经再生微环境，提高种子细胞的存活率，并促进神经的有效再生。目前，有关改善神经支架内低氧环境的研究主要集中于神经支架血管化和高压氧治疗。然而，神经支架的血管化需要较长的时间，而高压氧治疗又存在着种种缺陷，诸如较低的局部氧供改善效率、高昂的治疗费用、高压氧舱封闭条件带来不利影响等。因此，寻找一种更迅速、更方便、更有效和更安全的神经支架氧供解决方案，规避上述缺点，对于更好的实现人工神经修复周围神经损伤具有重要的临床意义。本研究在制备胶原-壳聚糖神经导管和全氟三丁胺（Perfluorotributylamine, PFTBA）水凝胶的基础上，在体外或体内将神经导管、PFTBA水凝胶与嗅鞘细胞（种子细胞）有机结合，用于周围神经缺损的相关研究，以研究PFTBA水凝胶促进周围神经再生的效能及相关机制。整个研究分为以下四个部分：实验一：胶原-壳聚糖神经导管的制备及相关理化性质和生物学性能检测背景：在众多神经组织工程支架材料中，神经导管修复神经缺损的效果是经多项动物或临床研究证实的。而且，已经有部分神经导管经过FDA认证，并应用于临床桥接患者神经缺损。然而，大多数神经导管的管壁为密封式设计且不可降解，这样虽然可以使导管具有良好的机械强度和有效限制疤痕组织长入的能力，但是同时也不利于营养物质、氧和代谢产物的运输，且需要二次手术取出残留的植入结构。因此，制备出具有良好生物学性能的多微孔可降解的神经导管，有望改善神经导管修复神经缺损的效果。目的：构建可降解的胶原-壳聚糖神经导管，并检测其理化性质和生物学性能。方法：以胶原和壳聚糖为原料，利用改良的配方和溶质配比方案制备出具有不同理化性质的胶原-壳聚糖神经导管，并通过扫描电镜检测等方法，对各神经导管的性能进行纵向对比研究，筛选出具有良好理化性质的多微孔可降解胶原-壳聚糖神经导管，用于本实验的体内研究，验证其生物学性能。结果：随着配比方案中胶原成分从0%-100%的增加，神经导管的微孔直径呈进行性下降的趋势。其中，胶原：壳聚糖（4：1）神经导管的孔隙率为92.72±1.83%，且体外降解速度适中，符合组织工程神经支架的构建要求。将该神经导管（胶原：壳聚糖=4：1）植入体内后，发现其具有较好的组织相容性，植入体内后仍保持较好的大体形态和防止管外细胞成分长入的能力，且该神经导管具有促进并引导神经再生的潜力。结论：胶原：壳聚糖（4：1）神经导管具有良好的理化和生物学性质，具有促进并引导神经再生的潜力。实验二：PFTBA水凝胶复合神经导管修复大鼠12mm坐骨神经缺损的有效性及机制研究背景：目前，应用组织工程神经导管来修复周围神经缺损是该类损伤的治疗趋势。然而，植入体内后早期神经导管内部的低氧环境很大程度上限制了其修复神经缺损效能的发挥。因此，提高早期神经导管内部氧分压，有望明显改善神经再生微环境，并促进神经的有效再生。以往研究表明：高压氧可提高神经损伤局部的氧分压，并明显促进神经的再生。但是，这种方法存在着局部氧供改善效率低等诸多缺点。因此，将含有增氧剂PFTBA的水凝胶与神经导管直接复合，可能是一种更迅速、更方便、更有效和更安全的神经支架氧供解决方案，有望明显改善支架内部早期的缺氧环境，并促进神经再生和功能恢复。目的：探讨PFTBA水凝胶复合神经导管后，促进神经再生的效能和机制。方法：应用复合PFTBA水凝胶的神经导管修复SD大鼠12mm坐骨神经缺损，通过对不同时间点和不同部位的再生神经的形态计量学分析、免疫组化染色和荧光金逆行示踪评估术后神经再生情况；通过对大鼠术侧下肢的神经电生理、行为学评估以及靶位肌肉的形态学染色，来评估术后神经功能恢复情况；通过对再生神经的微血管计数以及BDNF、NGF、VEGF和S-100的RT-PCR检测和Western Blot检测，来分析PFTBA水凝胶促进神经再生的机制。结果：虽然自体神经的修复效果仍然最好，但是复合PFTBA水凝胶的神经导管与没有复合PFTBA水凝胶的神经导管相比，可以更加有效的促进周围神经的再生和神经功能的恢复。此外，PFTBA明显的提高了再生神经内部BDNF、NGF和S-100的转录与表达。因此，PFTBA可以有效的促进迁移入导管内雪旺细胞的存活以及功能的发挥，从而促进神经的有效再生。结论：PFTBA水凝胶可以明显改善神经导管内部早期的缺氧环境，促进宿主雪旺细胞的存活以及功能的发挥，从而促进周围神经的再生和功能恢复。实验三：PFTBA在嗅鞘细胞缺氧模型中保护作用的研究背景：随着神经组织工程的发展，研究者们发现：接种种子细胞是赋予神经支架活性最有效的方法。其中，大量研究已经证实：嗅鞘细胞（Olfactory ensheathing cells,OECs）作为一种具有雪旺细胞和星形胶质细胞特性的大胶质细胞，在周围神经损伤的治疗中可发挥重要的修复作用。然而，移植后早期支架内部的低氧环境不利于嗅鞘细胞的存活和功能状态的发挥，以至于降低应有的修复效果。因此，研究嗅鞘细胞对缺氧的耐受能力以及改善缺氧环境的有效方法成为了目前一个亟需解决的问题。目的：探讨PFTBA对体外嗅鞘细胞缺氧模型的保护作用。方法：将分离纯化后的嗅鞘细胞分为4组：正常培养组（A组）、正常培养+PFTBA组（B组）、缺氧培养组（C组）和缺氧培养+PFTBA组（D组），继续培养12h和24h。其中，B组和D组，按照PFTBA的浓度不同，B组分为正常培养+5%PFTBA组（B1组）和正常培养+10%PFTBA组（B2组），而D组分为缺氧培养+5%PFTBA组（D1组）和缺氧培养+10%PFTBA组（D2组）。随后，应用流式细胞技术检测各组嗅鞘细胞的凋亡比率；应用扫描电镜检测各组嗅鞘细胞的形态学变化；应用DAPI染色和MTT检测各组嗅鞘细胞的活性；应用RT-PCR、Western Blot和ELISA检测各组嗅鞘细胞NGF和BDNF表达、合成和分泌的情况。结果：缺氧12h后，嗅鞘细胞即开始出现凋亡现象，而且随着时间的延长，凋亡的细胞数目激增，同时存活细胞的活性也明显下降，合成、分泌BDNF和NGF的能力也明显降低；而应用10%PFTBA与嗅鞘细胞在缺氧环境下共培养，可以显着的降低凋亡细胞的比例，提高存活细胞的活性，并在一定程度上维持细胞合成和分泌BDNF、和NGF的能力。结论：含有10%PFTBA的培养液可以有效的抵抗体外的低氧环境，促进嗅鞘细胞的存活和功能状态的发挥。实验四：PFTBA-嗅鞘细胞水凝胶复合神经导管修复大鼠15mm坐骨神经缺损的有效性以及机制研究背景：将种子细胞和神经支架相复合，构建功能性细胞神经支架是目前神经组织工程发展的趋势。然而，由于支架本身体积较大和支架血管化程度较慢的原因，移植早期神经支架内部的氧分压难以维持种子细胞的存活，从而导致细胞的死亡，以至于修复效果大打折扣。因此，如何才能够保证接种到神经支架中的种子细胞，既能够大量、均匀的分布，又能够保持良好的活性和功能状态，成为了目前一个亟需解决的问题。目的：研究PFTBA-嗅鞘细胞水凝胶复合神经导管后，促进神经再生的效能和机制。方法：将绿色荧光蛋白（Green fluorescent protein, GFP）标记的嗅鞘细胞和PFTBA混合入水凝胶，并充填入神经导管内，用于修复SD大鼠15mm坐骨神经缺损。通过对再生神经的形态计量学分析和荧光金逆行示踪评估术后神经再生情况；通过对大鼠术侧下肢的神经电生理、行为学评估以及靶位肌肉的形态染色，来评估术后神经功能恢复情况；通过对再生神经的微血管计数、GFP阳性细胞计数以及BDNF、NGF、VEGF和S-100的RT-PCR检测，来分析PFTBA水凝胶促进嗅鞘细胞存活和神经再生的机制。结果：虽然自体神经的修复效果仍然最好，但是复合PFTBA的细胞支架与没有复合PFTBA的细胞支架相比，可以更加有效的促进周围神经的再生和神经功能的恢复，且复合PFTBA可以明显缓解细胞支架内表达GFP嗅鞘细胞数目的下降趋势，提高了再生神经内部BDNF、NGF和S-100的mRNA的水平。因此，PFTBA可以有效的促进移植入导管内嗅鞘细胞的存活，使其生物学功能得到充分发挥，从而为神经再生提供适宜的微环境，促进神经的有效生长。结论：PFTBA水凝胶可以明显改善神经导管内部早期的缺氧环境，促进移植入导管内嗅鞘细胞的存活以及功能的发挥，从而更好的促进周围神经的再生和功能恢复。
二、纤维蛋白胶载神经生长因子促进周围神经再生的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、纤维蛋白胶载神经生长因子促进周围神经再生的研究（论文提纲范文）
（1）保留外膜完全横断法构建坐骨神经小间隙缺损模型评估富血小板血浆（PRP）对于周围神经再生的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstruct |
| 英文缩写词表 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 综述 |
| 2.1 周围神经再生过程 |
| 2.1.1 Wallerian变性 |
| 2.1.2 神经再生过程 |
| 2.1.3 施万细胞的作用 |
| 2.2 PRP介绍 |
| 第3章 动物实验 |
| 3.1 实验背景及目的 |
| 3.2 实验材料与方法 |
| 3.2.1 动物模型制作 |
| 3.2.2 PRP制备 |
| 3.2.3 组织形态学评估 |
| 3.2.4 靶肌肉评估 |
| 3.2.5 电生理评估 |
| 3.3 统计学分析方法 |
| 第4章 实验结果 |
| 4.1 PRP浓度及富集指数 |
| 4.2 靶肌肉湿重比 |
| 4.3 肌纤维构成比 |
| 4.4 坐骨神经Luxal Fast Blue染色 |
| 4.5 肌电图振幅及潜伏期RI值，以及传导速度比值 |
| 第5章 讨论 |
| 5.1 PRP对施万细胞的调控作用 |
| 5.2 PRP对炎症细胞的调控作用 |
| 5.3 PRP内的生长因子对神经轴突再生的促进作用 |
| 5.4 其他相关性实验证据 |
| 5.5 PRP促进周围神经损伤修复的临床应用 |
| 5.6 PRP临床应用的展望 |
| 第6章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（2）静电纺聚己内酯（PCL）-羊膜纳米纤维膜预防神经松解术后粘连及促进修复的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 第一部分 预防腕管综合征手术正中神经粘连的临床研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 静电纺聚己内酯(PCL)-羊膜纳米纤维膜抑制神经松解后COL-I、Ⅲ合成预防粘连的实验研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 静电纺聚己内酯(PCL)-羊膜纳米纤维膜促进神经松解后NGF、GAP-43 表达加快修复的实验研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 复发及顽固性腕管综合征的治疗 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）石墨烯及其衍生材料对雪旺细胞的调控作用探讨（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 石墨烯及其衍生材料简介 |
| 1.1.1 石墨烯及其衍生材料 |
| 1.1.2 石墨烯及其衍生材料在生物医学中的应用研究 |
| 1.1.3 石墨烯及其衍生材料基复合材料 |
| 1.2 周围神经损伤修复研究进展 |
| 1.2.1 周围神经损伤的简介 |
| 1.2.2 雪旺细胞在周围神经系统中的作用 |
| 1.2.3 电刺激在周围神经损伤修复中的应用 |
| 1.2.4 拓扑结构在周围神经损伤修复中的研究 |
| 1.3 周围神经修复用生物材料的研究进展 |
| 1.3.1 天然生物材料 |
| 1.3.2 合成生物材料 |
| 1.4 课题设计 |
| 1.4.1 课题的提出 |
| 1.4.2 新颖之处 |
| 第二章 导电石墨烯薄膜的制备及电刺激对雪旺细胞行为的影响 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验过程 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 主要实验仪器 |
| 2.2.3 石墨烯-聚氨酯薄膜的制备 |
| 2.2.4 材料表征 |
| 2.2.5 体外试验 |
| 2.2.6 统计分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 薄膜形貌和结构 |
| 2.3.2 材料组成 |
| 2.3.3 热学、力学及电学性能表征 |
| 2.3.4 血液相容性 |
| 2.3.5 电刺激对雪旺细胞影响 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 石墨烯含量对电学、机械性能的影响 |
| 2.4.2 电刺激对雪旺细胞行为的影响 |
| 2.4.3 石墨烯的潜在生物毒性 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 拓扑结构及氧化石墨烯对雪旺细胞行为的协同作用 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验过程 |
| 3.2.1 主要试剂 |
| 3.2.2 主要实验仪器 |
| 3.2.3 实验过程 |
| 3.2.4 材料表征 |
| 3.2.5 体外试验 |
| 3.2.6 统计分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 氧化石墨烯形貌和成分表征 |
| 3.3.2 纤维膜形貌及物理化学表征 |
| 3.3.3 薄膜成分分析 |
| 3.3.4 亲水性分析 |
| 3.3.5 纤维膜力学性能表征 |
| 3.3.6 血液相容性 |
| 3.3.7 雪旺细胞增殖 |
| 3.3.8 雪旺细胞形态 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 支架拓扑结构对细胞行为的影响 |
| 3.4.2 GO涂层对细胞行为的影响 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 拓扑结构及电刺激对雪旺细胞行为的协同作用 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验过程 |
| 4.2.1 主要试剂 |
| 4.2.2 主要实验仪器 |
| 4.2.3 实验方法 |
| 4.2.4 材料表征 |
| 4.2.5 体外试验 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 材料组成和结构 |
| 4.3.2 材料表面特征 |
| 4.3.3 材料成分分析 |
| 4.3.4 材料力学性能 |
| 4.3.5 雪旺细胞粘附、增殖及NGF分泌量 |
| 4.3.6 雪旺细胞迁移 |
| 4.3.7 雪旺细胞形态 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 全文总结与展望 |
| 5.1 全文总结 |
| 5.2 研究展望 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间的成果 |
| 致谢 |
（4）鼠自体组织神经导管修复坐骨神经缺损的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一部分 小鼠骨骼肌神经导管促进坐骨神经损伤修复的机制研究 |
| 前言 |
| 第一节 坐骨神经匀浆条件培养基对肌源性干细胞的诱导分化 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二节 骨骼肌神经导管、辐照导管和脱细胞导管对小鼠坐骨神经缺损修复的作用 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第三节 骨骼肌神经导管的早期血运重建 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 第二部分 富血小板纤维蛋白膜神经导管对小鼠坐骨神经损伤修复的实验研究 |
| 前言 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 周围神经损伤修复中新生血管的作用 |
| 综述参考文献 |
| 附录 英文缩略语表 |
| 傅士期间已发表或待发表文章 |
| 致谢 |
（5）腔内基质填充导管的制备及其修复周围神经缺损的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 周围神经结构与功能、损伤与再生 |
| 1.2.1 周围神经结构与功能 |
| 1.2.2 周围神经损伤与再生 |
| 1.3 周围神经损伤修复研究进展 |
| 1.3.1 周围神经损伤修复材料 |
| 1.3.2 周围神经支架设计原则 |
| 1.3.3 周围神经组织工程支架研究 |
| 1.4 周围神经支架制备方法 |
| 1.4.1 冷冻干燥技术 |
| 1.4.2 静电纺丝技术 |
| 1.5 国内外研究现状小结 |
| 1.6 本课题研究的目的和意义 |
| 1.7 本课题主要研究内容 |
| 第2章 静电纺PLGA纳米纤维膜的制备与性能研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 实验原料与试剂 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.2.3 PLGA电纺膜的制备 |
| 2.2.4 测试与表征 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 影响纳米纤维形态的因素 |
| 2.3.2 PLGA纤维膜孔隙率分析 |
| 2.3.3 PLGA纤维膜的力学性能分析 |
| 2.3.4 PLGA纤维膜的体外降解性能分析 |
| 2.3.5 PLGA纤维膜的溶胀性能及亲疏水性分析 |
| 2.4 本章小结 |
| 第3章 可降解细菌纤维素的制备与性能研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 实验原料与试剂 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.2.3 氧化细菌纤维素的制备 |
| 3.2.4 氧化程度的测定 |
| 3.2.5 红外光谱分析(FT-IR) |
| 3.2.6 广角X射线衍射分析(WAXD) |
| 3.2.7 形貌及表面性能分析 |
| 3.2.8 力学性能测试 |
| 3.2.9 体外降解性测试 |
| 3.2.10 细胞培养与毒性检测 |
| 3.2.11 血液相容性评价 |
| 3.2.12 统计学分析 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 BC的氧化程度分析 |
| 3.3.2 红外光谱分析 |
| 3.3.3 WAXD结果分析 |
| 3.3.4 形貌结构分析 |
| 3.3.5 孔隙率及孔径分布分析 |
| 3.3.6 力学性能分析 |
| 3.3.7 体外降解性能分析 |
| 3.3.8 细胞毒性分析 |
| 3.3.9 溶血率(HR)分析 |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章 氧化细菌纤维素-胶原复合支架的制备与性能研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 实验原料与试剂 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.2.3 氧化细菌纤维素-胶原复合支架的制备 |
| 4.2.4 交联度测定 |
| 4.2.5 红外光谱分析(FT-IR) |
| 4.2.6 广角X射线衍射分析(WAXD) |
| 4.2.7 形貌及表面性能分析 |
| 4.2.8 热稳定性能分析(TGA) |
| 4.2.9 溶解性能测试 |
| 4.2.10 细胞培养与毒性检测 |
| 4.2.11 统计学分析 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 复合支架交联度分析 |
| 4.3.2 红外光谱(FT-TR分析) |
| 4.3.3 WXAD结果分析 |
| 4.3.4 表面形貌分析 |
| 4.3.5 热稳定性分析 |
| 4.3.6 溶解度分析 |
| 4.3.7 复合支架对RSC96 细胞增殖的影响 |
| 4.4 本章小结 |
| 第5章 腔内基质填充导管用于神经缺损修复 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验部分 |
| 5.2.1 实验原料与试剂 |
| 5.2.2 实验仪器 |
| 5.2.3 腔内基质填充型导管(ISF-NGC)的制备 |
| 5.2.4 ISF-NGC理化性能表征 |
| 5.2.5 动物实验 |
| 5.2.6 术后大致观察 |
| 5.2.7 组织学观察与分析 |
| 5.2.8 透射电镜观察与分析 |
| 5.2.9 免疫组织化学分析 |
| 5.2.10 神经再生相关因子的RT-PCR检测 |
| 5.2.11 大鼠运动功能测试 |
| 5.2.12 腓肠肌恢复情况 |
| 5.2.13 统计学分析 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 ISF-NGC的设计与表征 |
| 5.3.2 动物实验手术前后大体观察 |
| 5.3.3 再生神经组织学评价和形态分析 |
| 5.3.4 再生神经免疫组织化学分析 |
| 5.3.5 RT-PCR分析 |
| 5.3.6 再生神经功能恢复评价 |
| 5.3.7 腓肠肌恢复评价 |
| 5.3.8 ISF-NGC促神经再生分析 |
| 5.4 本章小结 |
| 第6章 结论与展望 |
| 6.1 全文结论 |
| 6.2 本论文主要创新点 |
| 6.3 不足与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表论文及申请专利 |
（6）透明质酸水凝胶缓释雪旺细胞外泌体修复坐骨神经长节段缺损的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、外泌体的分离与鉴定 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 主要材料与试剂 |
| 1.1.2 主要仪器和设备 |
| 1.1.3 主要试剂配置方法 |
| 1.1.4 实验方法 |
| 1.1.5 统计学分析 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 雪旺细胞的形态 |
| 1.2.2 雪旺细胞在体外的贴壁和增殖活性 |
| 1.2.3 雪旺细胞体外培养纯度鉴定 |
| 1.2.4 雪旺细胞分泌的外泌体的形态和粒径鉴定 |
| 1.2.5 雪旺细胞分泌的外泌体表面标志物的鉴定 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、外泌体的体外生物学功能及体外缓释研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 主要材料与试剂 |
| 2.1.2 主要仪器和设备 |
| 2.1.3 主要试剂配置方法 |
| 2.1.4 实验方法 |
| 2.1.5 统计学分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 透明质酸水凝胶包裹雪旺细胞外泌体及体外缓释曲线 |
| 2.2.2 雪旺细胞外泌体促进DRG组织轴突生长 |
| 2.2.3 雪旺细胞外泌体对雪旺细胞增殖的影响 |
| 2.2.4 雪旺细胞外泌体对雪旺细胞生物活性物质表达的影响 |
| 2.2.5 雪旺细胞外泌体对DRG神经元的生物活性物质表达影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 三、雪旺细胞外泌体促进大鼠长节段坐骨神经缺损修复 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 主要材料和试剂 |
| 3.1.2 主要仪器和设备 |
| 3.1.3 实验动物及分组 |
| 3.1.4 实验方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 扫描电镜观察电纺PCL导管大体及微细结构 |
| 3.2.2 静电纺丝PCL神经导管的力学参数和孔隙率 |
| 3.2.3 雪旺细胞外泌体促进神经轴突再生 |
| 3.2.4 NF-200和S100 对各组再生神经的免疫荧光染色 |
| 3.2.5 三组大鼠坐骨神经电生理参数比较 |
| 3.2.6 三组大鼠坐骨神经指数比较 |
| 3.2.7 三组大鼠荧光金逆行示踪 |
| 3.2.8 三组大鼠腓肠肌HE染色分析 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 附录 |
| 综述 外周神经损伤修复的材料与治疗进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）CGF对雪旺细胞生物学行为及神经再生影响的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 周围神经再生的研究进展 |
| 1.1.1 周围神经的组织结构 |
| 1.1.2 周围神经损伤后的变性与再生 |
| 1.1.3 雪旺细胞在周围神经再生中的作用 |
| 1.1.4 周围神经损伤后的治疗方案 |
| 1.2 浓缩生长因子（CGF）的研究进展 |
| 1.2.1 血小板浓缩物的发展历程 |
| 1.2.2 CGF的特点及应用 |
| 1.3 实验设计 |
| 1.4 实验创新性 |
| 第2章 CGF的结构和生长因子释放规律 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 仪器和耗材 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要软件 |
| 2.1.4 实验动物 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 CGF的制备 |
| 2.2.2 CGF的结构 |
| 2.2.3 CGF中TGF-β1 释放规律 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 CGF的结构 |
| 2.3.2 CGF中TGF-β1 释放规律 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第3章 CGF对雪旺细胞增殖能力的影响 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 仪器和耗材 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要软件 |
| 3.1.4 实验动物及细胞 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 CGF条件培养基的制备 |
| 3.2.2 雪旺细胞的培养 |
| 3.2.3 CCK-8 检测细胞增殖情况 |
| 3.2.4 流式细胞仪检测细胞周期 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 雪旺细胞形态观察 |
| 3.3.2 CCK-8 检测细胞增殖情况 |
| 3.3.3 流式细胞仪检测细胞周期 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第4章 CGF对雪旺细胞神经营养分泌功能的影响 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 仪器和耗材 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 主要软件 |
| 4.1.4 实验动物及细胞 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 RT-q PCR检测NGF及GDNF m RNA表达情况 |
| 4.2.2 Western-blot检测NGF及GDNF蛋白表达情况 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 NGF及GDNF m RNA表达情况 |
| 4.3.2 NGF及GDNF蛋白表达情况 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第5章 CGF对雪旺细胞迁移能力的影响及其机制 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 仪器和耗材 |
| 5.1.2 主要试剂 |
| 5.1.3 主要应用软件 |
| 5.1.4 实验动物及细胞 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 细胞划痕实验检测细胞迁移能力 |
| 5.2.2 Western blot检测整合素 β1 及其下游信号分子的表达 |
| 5.2.3 构建si RNA质粒 |
| 5.2.4 整合素 β1 基因沉默 |
| 5.2.5 RT-q PCR和Western blot验证整合素 β1 沉默情况 |
| 5.2.6 Transwell检测整合素 β1 沉默后细胞迁移能力 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 CGF对雪旺细胞迁移能力的影响 |
| 5.3.2 Western blot检测整合素 β1 及其下游信号分子的表达 |
| 5.3.3 整合素 β1 基因沉默情况 |
| 5.3.4 Transwell检测整合素 β1 沉默后细胞迁移能力 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第6章 CGF促进周围神经再生的体内研究 |
| 6.1 材料 |
| 6.1.1 仪器和耗材 |
| 6.1.2 主要试剂 |
| 6.1.3 实验动物 |
| 6.2 方法 |
| 6.2.1 建立动物模型 |
| 6.2.2 足迹分析 |
| 6.2.3 神经组织结构观察 |
| 6.2.4 神经组织超微结构分析 |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 足迹分析 |
| 6.3.2 神经组织结构观察 |
| 6.3.3 神经组织超微结构分析 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 小结 |
| 第七章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在读期间科研成果 |
| 致谢 |
（8）新剂型神经生长因子联合丙戊酸促进大鼠坐骨神经损伤再生协同作用的实验研究（论文提纲范文）
| 前言 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 引言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第1章 关于周围神经损伤的研究现状与进展 |
| 1.1 神经损伤的分类 |
| 1.2 神经损伤后的病理生理变化 |
| 1.3 关于影响神经修复的问题 |
| 1.4 周围神经的再生理论 |
| 1.5 周围神经损伤修复技术的演进 |
| 1.6 结语 |
| 第2章 神经生长因子的研究现状 |
| 2.1 NGF 的理化特征及药代动力学 |
| 2.2 NGF 的药理作用 |
| 2.3 制备 NGF |
| 2.4 NGF 的给药方式 |
| 2.5 NGF 的临床应用 |
| 2.6 结语 |
| 第3章 丙戊酸的药理作用及其神经保护作用的研究进展 |
| 3.1 VPA 药代动力学(Pharmacokinetics，PK) |
| 3.2 VPA 的神经保护机制 |
| 3.3 结语 |
| 第二篇 |
| 第一部分： NGF 联合 VPA 促进 PC12 细胞神经元样细胞分化的协同作用研究 |
| 第1章 前言 |
| 第2章 实验方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 方法 |
| 第3章 实验结果 |
| 3.1 使用不同浓度的 NGF 处理 PC12 后细胞分化的形态结果 |
| 3.2 不同浓度 NGF 处理 PC12 细胞时 ERK 蛋白表达变化情况 |
| 3.3 不用浓度的 VPA 处理 PC12 细胞时 ERK 蛋白表达变化情况 |
| 3.4 使用 2mM 浓度的 VPA 处理 PC12 后细胞分化的形态结果 |
| 3.5 应用不同浓度 NGF 处理 PC12 细胞时 P38 蛋白表达的变化情况 |
| 3.6 应用不同浓度 VPA 处理 PC12 细胞时 P38 蛋白表达的变化情况 |
| 3.7 NGF 和 VPA 分别联合 ERK 与 P38 抑制剂处理 PC12 细胞分化情况 |
| 3.8 NGF 和 VPA 联合使用诱导 PC12 细胞分化情况 |
| 3.9 使用 NGF 和 VPA 联合处理 PC12 细胞时 ERK 蛋白与 P38 蛋白表达的变化情况 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 第二部分:PEG-PELG 水凝胶缓释 NGF 的制备及体外性能检测的实验研究 |
| 第1章 前言 |
| 第2章 实验方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 方法 |
| 第3章 实验结果 |
| 3.1 聚乙二醇/聚（γ-乙基-L-谷氨酸酯）（PEG-PELG）的制备与表征（由长春市应用化学研究所研制完成给予提供） |
| 3.2 体内成胶测试 |
| 3.3 体内降解和组织相容性 |
| 3.4 新剂型 NGF 的释放行为 |
| 3.5 体外检测新剂型 NGF 的生物活性规律结果 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 第三部分：新剂型神经生长因子联合丙戊酸治疗外周神经损伤的实验研究 |
| 第1章 前言 |
| 第2章 实验方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验动物的造模与分组 |
| 2.3 观察指标 |
| 2.4 组织标本取材与检查方法 |
| 2.5 统计学分析 |
| 第3章 实验结果 |
| 3.1 大体形态观察 |
| 3.2 神经外膜检测结荧光标记检查结果 |
| 3.3 神经电生理功能检测结果 |
| 3.4 神经组织学观察 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 硅胶管神经再生室建立的意义 |
| 4.2 神经外膜荧光标记结果的分析 |
| 4.3 神经电生理功能结果分析 |
| 4.4 神经组织学检测结果分析 |
| 4.5 关于本实验需要进一步完善的方面 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文及参加的科研课题 |
| 致谢 |
（9）周围神经吻合后神经生长因子—纤维蛋白胶包埋的临床观察（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 资料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图表 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（10）PFTBA水凝胶促进周围神经再生的效能及机制研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 一、组织工程神经的研究进展 |
| 二、改善神经支架内部缺氧状态的研究进展 |
| 三、全氟碳化合物在组织工程中应用的研究进展 |
| 实验一 胶原-壳聚糖神经导管的制备及相关理化性质和生物学性能检测 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验二 PFTBA 水凝胶复合神经导管修复大鼠 12mm 坐骨神经缺损的有效性及机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验三 PFTBA 在嗅鞘细胞缺氧模型中保护作用的研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验四 PFTBA-嗅鞘细胞水凝胶复合神经导管修复大鼠 15mm 坐骨神经缺损的有效性以及机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
四、纤维蛋白胶载神经生长因子促进周围神经再生的研究（论文参考文献）
- [1]保留外膜完全横断法构建坐骨神经小间隙缺损模型评估富血小板血浆（PRP）对于周围神经再生的影响[D]. 王苏龙. 吉林大学, 2021(01)
- [2]静电纺聚己内酯（PCL）-羊膜纳米纤维膜预防神经松解术后粘连及促进修复的研究[D]. 董瑞一. 河北医科大学, 2021(02)
- [3]石墨烯及其衍生材料对雪旺细胞的调控作用探讨[D]. 黄志强. 暨南大学, 2020(03)
- [4]鼠自体组织神经导管修复坐骨神经缺损的实验研究[D]. 黄慜璐. 北京协和医学院, 2020(05)
- [5]腔内基质填充导管的制备及其修复周围神经缺损的研究[D]. 侯袁婧. 武汉理工大学, 2019
- [6]透明质酸水凝胶缓释雪旺细胞外泌体修复坐骨神经长节段缺损的实验研究[D]. 王宇强. 天津医科大学, 2019(02)
- [7]CGF对雪旺细胞生物学行为及神经再生影响的研究[D]. 秦洁. 吉林大学, 2016(08)
- [8]新剂型神经生长因子联合丙戊酸促进大鼠坐骨神经损伤再生协同作用的实验研究[D]. 尹德馨. 吉林大学, 2015(08)
- [9]周围神经吻合后神经生长因子—纤维蛋白胶包埋的临床观察[D]. 李波翰. 山东大学, 2013(10)
- [10]PFTBA水凝胶促进周围神经再生的效能及机制研究[D]. 王宇清. 第四军医大学, 2013(02)