一、委内瑞拉成功的虾类养殖业（论文文献综述）
李英瑕[1]（2021）在《三种虾类病原现场快速高灵敏检测试剂盒的评价》文中研究表明近年来对虾重大和新发疾病不断肆虐,给我国对虾养殖业造成了重大经济损失。目前,养殖病害问题已成为限制我国对虾养殖业绿色高质量发展的主要因素之一。进行对虾疫病病原微生物早期检测并采取预防切断重大和新发病原传播,被认为是当前水产养殖中降低病原流行风险,减少病害大面积流行造成严重经济损失的有效手段。因此,研发对虾疫病病原的现场可用、简单易行检测技术,并开发相应检测试剂盒成为当下对虾病害防控中亟待解决的问题。为了更好的评估基于本实验室水产病原现场快速检测平台所研发的新发病原检测试剂盒,摸清其性能参数,阐明其具体测试效能,本研究以虾肝肠胞虫（EHP）、致急性肝胰腺坏死副溶血弧菌(VpAHPND)和虾血细胞虹彩病毒（SHIV）的现场快速高灵敏检测试剂盒为研究对象,依据世界动物卫生组织（OIE）《水生动物诊断手册》、农业部公告第683号和质检行业标准等规范性技术文件中有关检测试剂测试要求设计了试剂盒性能评估实验,随机抽取参试试剂盒对其分析特异性（Analytical specificity,ASp）、分析灵敏度（Analytical sensitivity,ASe）、诊断特异性（Diagnostic sensitivity,DSe）、诊断灵敏度（Diagnostic specificity,DSp）、重复性和稳定性等性能开展了全面和科学的测试和评价。取得了如下研究结果:（1）虾肝肠胞虫现场快速高灵敏检测试剂盒的分析灵敏度为101个拷贝/反应,分析特异性测试结果显示该试剂盒在检测中不与5种常见对虾病原产生交叉反应、具有良好的分析特异性;通过对298份临床样品的对比检测发现,该试剂盒相比于已报道的EHP Taq Man-qPCR检测法的诊断灵敏度为91.7%,诊断特异性为99.2%;该试剂盒对于阴性、强阳性及弱阳性组织匀浆液制备的膜片的检测重复率分别为100%、100%、95.8%;稳定性测试结果显示,该试剂盒在-20℃冰箱中至少可保存7个月,在-40℃冰箱中至少可保存12个月。总体上看,所测试的EHP现场快速高灵敏检测试剂盒与已报道的EHP Taq Man-qPCR检测法相比,检测性能基本持平。（2）副溶血弧菌现场快速高灵敏检测试剂盒的分析灵敏度为102拷贝/反应,分析特异性测试结果显示该试剂盒未与常见对虾病原产生交叉反应、具有很好的检测特异性;与已报道的VpAHPNDTaq Man-qPCR法相比,通过对322份临床样品的检测发现,该试剂盒相比于已报道的VpAHPNDTaq Man-qPCR检测法的诊断灵敏度为62.1%,诊断特异性为100%;该试剂盒对于VpAHPND阴性、强阳性及弱阳性组织匀浆液制备的膜片的检测重复率分别为100%、100%、83.3%;稳定性测试结果表明,试剂盒在4℃环境中最多可保存7天,在-20℃冰箱中至少可保存6个月,在-40℃冰箱中至少可保存8个月。总体上看,所测试的VpAHPND现场快速高灵敏检测试剂盒与已报道的VpAHPNDTaq Man-qPCR检测法相比,检测/诊断灵敏度略低,其他检测性能基本相仿。（3）虾血细胞虹彩病毒现场快速高灵敏检测试剂盒的分析灵敏度为101个拷贝/反应,分析特异性测试结果显示该试剂盒与参测的5种对虾病原及对虾组织核酸不反应,具有良好的检测特异性;与已报道的SHIV Taq Man-qPCR法相比,该试剂盒测试298份临床样品的诊断灵敏度为96.6%,诊断特异性为98.5%;该试剂盒对于SHIV阴性、强阳性及弱阳性组织匀浆液制备的膜片的检测重复率分别为100%、100%、91.6%;该试剂盒在4℃环境中最多可保存4天,在-20℃冰箱中至少可保存6个月,在-40℃冰箱中至少可保存8个月。总体上看,所测试的SHIV现场快速高灵敏检测试剂盒与已报道的SHIV Taq Man-qPCR法相比,检测性能基本持平。利用EHP、VpAHPND、SHIV三种病原的现场快速高灵敏检测试剂盒开展临床样品的检测过程,从样品核酸提取到检测结束耗时仅1.5 h;结合上述性能测试的结果可以发现,该试剂盒具有快速、高灵敏度、强特异性、稳定性好和可以实现重复检测等优点,适用于生产现场或检疫实践中开展对虾EHP、VpAHPND、SHIV的现场快速检测,以及对虾类疾病的辅助诊断。
胡吉卉,李正民,段健诚,高焕[2]（2020）在《虾类肝肠胞虫流行病学研究进展》文中研究说明虾肝肠胞虫（Enterocytozoon hepatopenaei）作为虾类养殖过程中的重要病原之一,会导致虾类生长缓慢甚至停滞,极大的影响了养殖业的经济效益。该文就虾肝肠胞虫的流行情况、致病机理、传播途径、检测方法及防治措施等方面进行了综述,以期为虾类肝肠胞虫的研究和防治提供参考。
马来,童桂香,韦信贤,曾德乾,熊建华,王瑞,黄光华,江林源[3]（2020）在《基于TaqMan-MGB探针的虾肝肠胞虫荧光定量PCR检测方法》文中提出【目的】基于TaqMan-MGB探针建立虾肝肠胞虫（EHP）荧光定量PCR检测方法,为EHP的快速定量检测及实时监测提供技术手段。【方法】以EHP的SSU rDNA基因为检测靶基因,在其保守区设计特异性的扩增引物和TaqMan-MGB探针,将PCR扩增目标片段克隆至pMD18-T载体构建重组质粒pMD18-T-SSUEHP（标准品）,以标准品DNA为模板优化反应体系,建立检测EHP的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR;以10倍梯度稀释的标准品DNA为模板构建扩增标准曲线,并进行特异性、敏感性、重复性及临床应用试验。【结果】制备的重组质粒pMD18-T-SSUEHP DNA稳定性好,可满足作为标准品和阳性对照的要求;标准品(pMD18-T-SSUEHP)起始模板范围为2.0×101～2.0×109拷贝/反应时,建立的标准曲线线性关系良好,对应的线性回归方程为y=-3.232×lg（x）+39.51。基于TaqMan-MGB探针建立的EHP荧光定量PCR对标准品的检测灵敏度可达20拷贝/反应,对临床虾样品EHP的检测灵敏度约10拷贝/mg,较农业农村部推荐的套式PCR约提高10倍;对虾类其他常见病原均无扩增反应,其组内和组间变异系数分别为0.26%～0.72%和0.56%～0.92%,整个检测过程可在1 h内完成。采用建立的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR与套式PCR同时对276份临床虾样品进行检测比较,发现两种方法的符合率为96.7%,检测低拷贝数虾样品时前者具有更高的灵敏度;2018和2019年广西虾样品的EHP阳性检出率分别为16.2%和30.6%。【结论】基于TaqMan-MGB探针建立的EHP荧光定量PCR检测方法具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量范围宽及简单快速等优点,适用于虾类样品的EHP定量检测,可为EHP实时监测及EHPD快速诊断提供一种新的技术手段。
杨倩[4]（2012）在《桃拉综合症病毒和草鱼呼肠孤病毒外壳蛋白抗体的制备与分析》文中认为水产动物病毒性疾病给水产养殖业带来了严重危害。桃拉综合症病毒（Taurasyndrome virus，TSV）和草鱼呼肠孤病毒（Grass carp reovirus，GCRV）分别是感染南美白对虾和草鱼的主要病原，严重影响了其养殖业的健康发展，因此展开对这两种水产动物病毒结构蛋白的研究显得尤为必要。TSV隶属双顺反子病毒科（Dicistroviridae），蜜蜂麻痹病毒属（Aparavirus）；其基因组大小约为10kb，包含两个开放性阅读框架（ORF），ORF1编码非结构蛋白，ORF2编码三种结构蛋白：VP1，VP2，VP3。GCRV隶属呼肠孤病毒科，水生呼肠孤病毒属（Aquareovirus），其基因组共编码7种结构蛋白和5种非结构蛋白。其中VP7是一种结构蛋白，由S10基因组片段编码，与VP5蛋白形成异源二聚体进而形成外壳蛋白层；VP7蛋白可以结合dsRNA，与病毒的细胞吸附有关。本研究对TSV结构蛋白基因vp2、vp3进行了克隆表达，并对结构蛋白VP2、VP3及GCRV病毒外壳蛋白VP7进行了表达纯化、相应的多克隆及单克隆抗体的抗体制备，主要内容如下：1．桃拉综合症病毒结构蛋白基因vp2、vp3的克隆表达及抗体制备根据GeneBank中桃拉综合症病毒的全基因组序列，分别设计该病毒的主要结构蛋白基因vp2、vp3的对应引物，提取感染TSV的南美白对虾中的总RNA并以此为模板，利用RT-PCR技术对目的基因进行了扩增;将目的基因vp2和vp3分别克隆到表达载体pET-16b-1和pGEX-4t-3质粒中，并转化入Escherichia coli BL2（1DE3）和DH5α中。经IPTG诱导和SDS-PAGE分析后，分别获得大小分别为42kDa和48kDa的重组蛋白VP2和VP3，且两种目的蛋白均以包涵体形式存在。将蛋白胶上目的蛋白条带割胶纯化并作为多抗制备的免疫原获得抗VP2血清（P-vp2）和抗VP3血清（P-vp3）。单克隆抗体的制备以合成的VP2及VP3多肽为免疫原，经BALB/c小鼠免疫、细胞融合及克隆亚克隆筛选获得杂交瘤细胞，对培养上清液纯化后获得抗VP2单克隆抗体（M-vp2）和抗VP3单克隆抗体（M-vp3）。Western blot分析显示四种均可与体外表达的蛋白发生特异性免疫反应，且与大肠杆菌中其他蛋白无交叉反应。Immunodot-blot结果显示两种多抗血清与两种单克隆抗体均可以从TSV感染的对虾中检测到VP2蛋白和VP3蛋白；同时，单克隆抗体对TSV结构蛋白的特异性较多抗血清高；单克隆抗体M-vp2的效价较单克隆抗体M-vp3略高。该结果为TSV的免疫检测方法的建立提供了技术基础，为实现TSV的免疫学防控提供了可能。2．草鱼呼肠孤病毒外壳蛋白VP7的表达及单克隆抗体的制备将体外构建的VP7表达质粒转化至Escherichia coli DH5α感受态细胞中，经IPTG诱导后，获得重组蛋白VP7，对诱导产物进行SDS-PAGE分析。SDS-PAGE结果显示VP7蛋白以包涵体形式存在。将蛋白胶上目的蛋白条带割胶纯化并作为多抗制备的免疫原获得抗VP7血清。采用体外微量中和实验分析该多抗血清的中和能力。无菌取免疫小鼠脾细胞与SP2/0瘤细胞融合，经两次筛选及再克隆得到12株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞。通过ELISA及Western blot方法筛选出最佳单抗株，获得GCRV病毒外壳蛋白VP7单抗株，制备单克隆抗体。采用辛酸饱和硫酸铵法对小鼠腹水及细胞培养上清液进行纯化并鉴定该单克隆抗体的亚型。微量中和实验及病毒滴度实验结果证明该多抗血清能够特异性中和GCRV粒子，并且能够有效的阻止GCRV病毒的感染。ELISA及Western blot分析显示单克隆抗体对50TCID50GCRV病毒的最低检测浓度为0.737μg/ml，且对GST标签蛋白无交叉反应。抗体亚型鉴定结果显示该单克隆抗体的亚型为IgG2b。采用该抗体分别对采自不同地区的草鱼病样进行ELISA检测，以RT-PCR检测法作为对照。对采集的草鱼出血病样品的ELISA结果显示：样品检出阳性率与RT-PCR结果一致，该单抗对GCRV病原具有高度特异性和灵敏性，可用于GCRV的检测和结构蛋白分析。本研究制备的草鱼呼肠孤病毒单克隆抗体具有较好的特异性以及灵敏性，可用于草鱼呼肠孤病毒临床的免疫学检测，为GCRV的免疫检测技术研发提供了资料。同时，为以后对GCRV病毒与宿主之间的免疫反应以及对现有GCRV疫苗的评价提供了基础资料。
颜家安[5]（2006）在《海南岛生态环境变迁史研究 ——以植物和动物变迁为研究视角》文中研究说明生态环境问题是当今世界最重大问题之一，我国的生态环境问题也日趋严重。有专家断言；中国自然环境仍处于整体不断恶化之中。 海南岛生态环境也不容乐观，据调查，海南岛西汉前森林覆盖率约达90％，明清以来就开始急剧下降，尤其是近100年来下降的速度大大加快，到1956年本岛的天然林覆盖率已降至25.5％，1964年降至18.19％，1987年再降至7.2％，1999年仅为4％；在1956年至1999年的43年间，本岛还丧失了80％的珊瑚礁，红树林也由解放初期15万亩，下降到1982年的7.2万亩。生物多样性也在不断丧失，野生动物种群数量日趋减少，分布区域不断缩小，前景令人担忧。 本文旨在描述和阐释海南岛生态环境在人类活动的干扰下的变迁过程、原因及其生态后果，在此基础上提出保护海南岛生态环境的新理念：创建海南生态特区。研究的空间范围是海南岛，研究的主要对象是植物和动物的变迁。时间上溯到第四纪全新世初(本岛第一个人类活动遗址三亚落笔洞，14C年代为10642±207aBP)。大尺度的时间似乎更能说明生态环境变迁的来龙去脉。 作为研究视角，动植物是生态环境中最基本的元素之一。在生物环境中，人是中心，动物和植物是人类活动的环境效应首当其冲的对象，也是生态环境变迁的重要标志。海南岛生态环境近百年来变化最大、最快的就是动植物环境。 作为研究客体，海南岛的生态环境演变研究具有重要的科学价值。首先，海南是中国不可多得的热带地区，生物多样性程度高，具有重要的保护价值。其次，海南岛整个地形是从中部山体向外，由山地、丘陵、平原顺序逐级递降，构成层状垂直分布和环状水平分布带，生态系统结构层次较为分明且结构完整，自成体系。第三，海南岛开发较迟，其生态结构的系统性尚未溃散，演变的连续性亦有规律可寻。 作为一份不可多得的大自然遗产，海南岛生态环境研究具有重要的现实意义，海南岛是中国的，也是世界的，是今天的，也是明天的宝贵财富。它栖息着为数众多的生物种类，保存了难以替代的“遗传因子组合”和生物进化的果实。研究海南岛生态环境的演变规律、阐释人与生态环境之间的共生关系，对于中国生态环境保护建设乃至世界正在消失的热带雨林的抢救都具有重要的现实意义。 中国海南岛在可持续发展战略中扮演着重要角色。海南是中国第一个申报成功的生态示范省，海南生态建设的成功与否，对国内其他省生态建设乃至国际社会具有重
高俊岭[6]（2003）在《委内瑞拉成功的虾类养殖业》文中研究指明本文在总体介绍委内瑞拉成功的虾类养殖业的基础上,扼要分析了其成功的主要原因,并 列举了Aquatec养殖场成功的具体做法。
王宇[7]（1986）在《国外养虾概况》文中研究说明 虾是高蛋白高级水产品,深受人们喜爱。近年来,“养虾热”正在掀起。据统计,目前世界虾产量为170万吨左右,养殖为10—15万吨。到1990年,世界虾类养殖产量将达到26万吨,约占那时世界虾类总产量190万吨的13.5％。其中主要产在亚洲、北美和拉丁美洲。
二、委内瑞拉成功的虾类养殖业（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、委内瑞拉成功的虾类养殖业（论文提纲范文）
（1）三种虾类病原现场快速高灵敏检测试剂盒的评价（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 引言 |
| 1.1 我国养殖虾类中的三种重要新发病害 |
| 1.1.1 对虾肝肠胞虫病 |
| 1.1.2 致急性肝胰腺坏死弧菌 |
| 1.1.3 虾血细胞虹彩病毒 |
| 1.2 对虾病原检测方法 |
| 1.2.1 组织核酸提取 |
| 1.2.2 核酸扩增 |
| 1.2.3 扩增产物检测 |
| 1.3 现场快速检测技术发展趋势 |
| 1.4 研究的必要性 |
| 第2章 虾肝肠胞虫现场快速高灵敏度检测试剂盒的评价 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 核酸、病料样品及实验动物 |
| 2.1.2 主要仪器及试剂 |
| 2.1.3 组织样品DNA提取 |
| 2.1.4 EHP DNA片段的克隆及标准品的制备 |
| 2.1.5 对虾EHP现场快速高灵敏检测试剂盒 |
| 2.1.6 对虾EHP现场快速高灵敏检测试剂盒使用方法 |
| 2.1.7 试剂盒性能参数的评价 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 分析特异性测试 |
| 2.2.2 分析灵敏度测试 |
| 2.2.3 诊断特异性和诊断灵敏度 |
| 2.2.4 重复性 |
| 2.2.5 稳定性 |
| 2.3 讨论 |
| 第3章 对虾副溶血弧菌现场快速高灵敏度检测试剂盒的评价 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 核酸、病料样品及实验动物 |
| 3.1.2 主要试剂及仪器 |
| 3.1.3 组织样品DNA提取 |
| 3.1.4 Vp_(AHPND)DNA片段的克隆及标准品的制备 |
| 3.1.5 对虾Vp_(AHPND)LAMP检测试剂盒 |
| 3.1.6 对虾Vp_(AHPND)LAMP检测试剂盒使用方法 |
| 3.1.7 试剂盒性能参数的评价 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 分析特异性 |
| 3.2.2 分析灵敏度 |
| 3.2.3 诊断特异性和诊断灵敏度 |
| 3.2.4 重复性实验结果 |
| 3.2.5 稳定性 |
| 3.3 讨论 |
| 第4章 虾血细胞虹彩病毒现场快速高灵敏度检测试剂盒的评价 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 核酸、病料样品及实验动物 |
| 4.1.2 主要试剂及仪器 |
| 4.1.3 组织样品DNA提取 |
| 4.1.4 SHIV DNA片段的克隆及标准品的制备 |
| 4.1.5 对虾SHIV LAMP检测试剂盒中扩增体系 |
| 4.1.6 对虾SHIV LAMP检测试剂盒使用方法 |
| 4.1.7 试剂盒性能参数的评价 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 分析特异性(ASp) |
| 4.2.2 分析灵敏度(ASe) |
| 4.2.3 诊断特异性(DSp)和诊断灵敏度(DSe) |
| 4.2.4 重复性 |
| 4.2.5 稳定性 |
| 4.3 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（2）虾类肝肠胞虫流行病学研究进展（论文提纲范文）
| 1 流行情况 |
| 2 病理症状 |
| 3 感染机制 |
| 4 传播途径 |
| 4.1 水平传播 |
| 4.2 垂直传播 |
| 5 检测方法 |
| 5.1 组织学方法 |
| 5.2 分子生物学方法 |
| 5.2.1 环介导等温扩增技术 |
| 5.2.2 原位杂交技术（ISH) |
| 5.2.3 PCR检测法 |
| 6 防治措施 |
| 6.1 严格的清塘处理 |
| 6.2 育苗生物安全 |
| 6.3 加强池塘管理 |
| 7 展望 |
（3）基于TaqMan-MGB探针的虾肝肠胞虫荧光定量PCR检测方法（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料与试剂 |
| 1.2 引物及TaqMan-MGB探针设计与合成 |
| 1.3 病原DNA提取 |
| 1.4 重组质粒标准品制备 |
| 1.5 荧光定量PCR反应体系优化 |
| 1.6 标准曲线建立及敏感性试验 |
| 1.7 特异性试验 |
| 1.8 重复性试验 |
| 1.9 荧光定量PCR与套式PCR的敏感性比较 |
| 1.10 荧光定量PCR和套式PCR检测临床样品的比较 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 重组质粒标准品制备情况 |
| 2.2 荧光定量PCR反应体系优化结果 |
| 2.3 荧光定量PCR扩增标准曲线及其敏感性 |
| 2.4 荧光定量PCR的特异性 |
| 2.5 荧光定量PCR的重复性 |
| 2.6 荧光定量PCR与套式PCR的敏感性比较 |
| 2.7 荧光定量PCR和套式PCR检测临床样品的结果比较 |
| 3 讨 论 |
| 4 结 论 |
（4）桃拉综合症病毒和草鱼呼肠孤病毒外壳蛋白抗体的制备与分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一章 桃拉综合症病毒与草鱼呼肠孤病毒的研究概述 |
| 1 桃拉综合症病毒研究概述 |
| 1.1 对虾养殖中的主要病毒性疾病 |
| 1.2 桃拉综合症病毒的发现 |
| 1.3 桃拉综合症病毒的基因组结构与特征 |
| 1.3.1 桃拉综合症病毒的形态结构及理化特性 |
| 1.3.2 桃拉综合症病毒感染的组织嗜性和病理变化 |
| 1.4 桃拉综合症病毒的检测方法 |
| 1.5 TSV 的防治措施 |
| 2 草鱼呼肠孤病毒的研究概述 |
| 2.1 鱼类主要的病毒性疾病 |
| 2.2 草鱼呼肠孤病毒的发现 |
| 2.3 草鱼呼肠孤病毒的基因组结构与特征 |
| 2.3.1 草鱼呼肠孤病毒的形态结构及理化特性 |
| 2.3.2 草鱼呼肠孤病毒感染的组织嗜性和病理变化 |
| 2.4 草鱼呼肠孤病毒多肽的免疫原性研究 |
| 2.5 草鱼呼肠孤病毒的检测方法 |
| 2.6 草鱼呼肠孤病毒的防治措施 |
| 第二章 桃拉综合症病毒结构蛋白 VP2 及 VP3 的克隆、表达及抗体的制备 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 试验细胞 |
| 1.1.2 抗体、酶类及试剂盒 |
| 1.1.3 试验试剂及溶液配制 |
| 1.1.4 溶液配制 |
| 1.1.5 培养基 |
| 1.1.6 主要仪器设备 |
| 1.2 病样的采集及前处理 |
| 1.3 桃拉综合症病毒 RNA 的提取及 RT-PCR |
| 1.3.1 桃拉综合症病毒 RNA 的提取 |
| 1.3.2 桃拉综合症病毒 vp2 及 vp3 基因引物的引物合成 |
| 1.3.3 cDNA 链的合成及目的基因的扩增 |
| 1.3.4 VP2 及 VP3 多肽的合成 |
| 1.4 重组表达载体的构建及表达 |
| 1.4.1 重组表达载体的构建 |
| 1.4.2 连接产物的转化 |
| 1.4.3 阳性克隆的筛选 |
| 1.4.4 目的蛋白的诱导表达及纯化 |
| 1.5 多抗血清的制备 |
| 1.6 单克隆抗体的制备 |
| 1.7 Western Blot 及 ELISA 分析 |
| 1.7.1 Western blot 法检测单克隆抗体及多克隆抗体的免疫特异性 |
| 1.7.2 单克隆抗体的 ELISA 分析 |
| 1.8 Immunodot Blot 分析 |
| 2.结果与分析 |
| 2.1 vp2 及 vp3 基因的克隆 |
| 2.2 表达载体的构建及重组子的鉴定 |
| 2.3 目的蛋白的表达及其可溶性分析 |
| 2.4 Western Blot 检测多抗血清及单克隆抗体备 |
| 2.4.1 单抗及多抗的 Western blot 分析 |
| 2.4.2 M-vp2 及 M-vp3 的 ELISA 分析 |
| 2.5 Immunodot Blot 检测 |
| 3.讨论 |
| 第三章 草鱼呼肠孤病毒外壳蛋白 VP7 的表达及其单克隆抗体的制备 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 试验细胞及抗体 |
| 1.1.2 抗体、酶类及试剂盒 |
| 1.1.3 试验试剂 |
| 1.1.4 溶液配制 |
| 1.1.5 培养基 |
| 1.1.6 主要仪器设备 |
| 1.2 样品的采集与处理 |
| 1.3 草鱼呼肠孤病毒宿主细胞的传代培养 |
| 1.4 草鱼呼肠孤病毒的病毒扩增 |
| 1.5 抗原制备 |
| 1.6 多克隆抗体及单克隆抗体的制备 |
| 1.6.1 多克隆抗体的效价测定及微量中和作用 |
| 1.6.2 单克隆抗体的制备 |
| 1.6.3 腹水制备及抗体纯化 |
| 1.6.4 抗体亚型的鉴定 |
| 1.7 草鱼出血病病灶组织上清过滤液中草鱼呼肠孤病毒的检测 |
| 1.7.1 ELISA 法对草鱼病样的检测 |
| 1.7.2 RT-PCR 法对草鱼病样的检测 |
| 2.结果与分析 |
| 2.1 VP7 蛋白的诱导表达及其多抗血清的制备 |
| 2.2 多抗血清的微量中和效应 |
| 2.3 杂交瘤细胞筛选 |
| 2.4 单克隆抗体分型鉴定 |
| 2.5 单克隆抗体对临床标本的检测 |
| 3 讨论 |
| 结论 |
| 附录：论文发表情况 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（5）海南岛生态环境变迁史研究 ——以植物和动物变迁为研究视角（论文提纲范文）
| 原创性声明 |
| 学位论文版权使用授权书 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一章：导论 |
| 第一节：论文的选题及研究思路 |
| 一、问题的提出及其意义 |
| 二、基本框架 |
| 三、研究假设 |
| 四、文献综述 |
| 五、研究方法 |
| 六、创新之处 |
| 第二节：研究区概况 |
| 一、海南岛自然生态描述 |
| 二、海南岛人文生态描述 |
| 第二章：海南岛第四纪古生态环境 |
| 第一节：海南岛第四纪古环境 |
| 一、古植被与古气候环境 |
| 二、古动物环境 |
| 第二节：先住民及其对环境的扰动 |
| 一、先住民 |
| 二、先住民对生态环境的扰动 |
| 三、先住民对生态环境扰动的生态后果 |
| 小结 |
| 第三章：海南岛的森林变迁 |
| 第一节：汉代以来的森林变迁 |
| 一、汉唐时期的森林残损 |
| 二、宋元时期的森林残损 |
| 三、明清时期的森林残损 |
| 四、近百年森林的剧变 |
| 第二节 森林百年剧变原因探析 |
| 一、人口增长与森林剧变 |
| 二、森林采伐与森林变迁 |
| 三、橡胶种植与森林变迁 |
| 四、刀耕火种与森林变迁 |
| 五、热带农业开发与森林的变迁 |
| 六、森林火灾与森林变迁 |
| 小结 |
| 第四章 海南岛着名林木的变迁 |
| 第一节：海南岛着名林木变迁的历史轨迹 |
| 一、海南岛历史上着名林木及其特征 |
| 二、海南岛着名林木变迁的历史轨迹 |
| 三、人类活动与着名林木变迁 |
| 第二节：海南岛着名林木变迁个案史研究 |
| 一、海南沉香树 |
| 二、花梨木 |
| 三、龙脑香科树木 |
| 四、松树 |
| 五、鸡翅木 |
| 六、海南藤 |
| 七、海南粗榧 |
| 八、方志记载的其它名木 |
| 小结 |
| 第五章：海南岛外来作物(植物)引种史 |
| 第一节：概述 |
| 一、移民引种时期 |
| 二、南洋华侨引种时期 |
| 三、民国政府引种时期 |
| 四、日本人引种时期 |
| 五、多渠道引种时期 |
| 第二节：热带作物引进史 |
| 一、橡胶作物 |
| 二、油料作物 |
| 三、果树作物 |
| 四、饮料作物 |
| 五、香料作物 |
| 六、栽培绿肥和饲料植物 |
| 第三节：造林树种引进史 |
| 一、桉树 |
| 二、相思、木麻黄和加勒比松 |
| 第四节：海南岛园林观赏植物引进史 |
| 一、常见观赏乔木外来种 |
| 二、常见观赏灌木外来种 |
| 三、常见观赏攀缘植物外来种 |
| 四、常见观赏草本花卉外来种 |
| 五、常见观赏棕榈植物外来种 |
| 六、常见观赏竹外来种 |
| 七、常见观赏地被及草坪植物外来种 |
| 小结 |
| 第六章：海南岛野生动物资源的变迁 |
| 第一节：海南岛野生动物变迁的历史轨迹 |
| 一、海南岛野生动物资源的特点 |
| 二、野生动物区系的演变 |
| 三、野生动物种群的变迁 |
| 四、野生动物变迁的原因 |
| 第二节：海南岛野生动物变迁史个案研究 |
| 一、黑长臂猿 |
| 二、猕猴 |
| 三、麋鹿 |
| 四、坡鹿 |
| 五、黑熊 |
| 六、云豹 |
| 七、獭、狸 |
| 小结 |
| 第七章：海南岛环境变迁与生态安全 |
| 第一节：生物多样性变迁与生态安全 |
| 一、海南岛生物多样性 |
| 二、海南岛生物多样性的变迁与生态安全 |
| 第二节：外来物种入侵与生态安全 |
| 一、外来物种入侵 |
| 二、海南岛外来物种入侵及其风险 |
| 第三节 水土流失与生态安全 |
| 一、海南岛水土流失现况 |
| 二、水土流失与生态安全 |
| 三、森林与水土流失 |
| 第四节：自然灾害与生态安全 |
| 一、海南岛自然灾害的种类 |
| 二、海南岛灾害发生的时代特征及其趋势 |
| 三、森林与自然灾害 |
| 第五节：海南浆纸业发展与生态安全 |
| 小结 |
| 第八章：思考与建议 |
| 第一节：关于人与自然的思考 |
| 一、人与自然的关系统一性和一致性 |
| 二、自然的价值与人类的义务与责任 |
| 三、走出人类中心主义的误区 |
| 第二节：从经济特区到生态特区 |
| 一、海南的尴尬处境：经济特区与生态省 |
| 二、面向世界、面向未来,创建海南生态特区 |
| 三、举全国之力,齐心共建海南生态区 |
| 结论与讨论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
四、委内瑞拉成功的虾类养殖业（论文参考文献）
- [1]三种虾类病原现场快速高灵敏检测试剂盒的评价[D]. 李英瑕. 上海海洋大学, 2021(01)
- [2]虾类肝肠胞虫流行病学研究进展[J]. 胡吉卉,李正民,段健诚,高焕. 水产养殖, 2020(11)
- [3]基于TaqMan-MGB探针的虾肝肠胞虫荧光定量PCR检测方法[J]. 马来,童桂香,韦信贤,曾德乾,熊建华,王瑞,黄光华,江林源. 西南农业学报, 2020(06)
- [4]桃拉综合症病毒和草鱼呼肠孤病毒外壳蛋白抗体的制备与分析[D]. 杨倩. 上海海洋大学, 2012(03)
- [5]海南岛生态环境变迁史研究 ——以植物和动物变迁为研究视角[D]. 颜家安. 南京农业大学, 2006(02)
- [6]委内瑞拉成功的虾类养殖业[J]. 高俊岭. 中国渔业经济, 2003(S1)
- [7]国外养虾概况[J]. 王宇. 世界农业, 1986(09)
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