一、烟酰胺对实验性心肌损伤的保护作用(英文)（论文文献综述）
崔云丽[1]（2021）在《基于线粒体动力学探讨猝死肉鸡心肌细胞损伤机制的研究》文中提出肉鸡猝死综合征（Sudden Death Syndrome,SDS）,以营养良好、看似健康的肉鸡突然而短暂地拍打翅膀后快速死亡为特征,该病的发生无明显季节性。SDS是肉鸡常见的与心脏功能紊乱相关的疾病,也是导致肉鸡死亡的主要非传染性原因之一,其发病率为0.5-5%,给家禽养殖业造成重大经济损失。由于SDS发病急且没有明显的临床症状,导致新鲜临床病例获取困难,基于文献报道和课题组前期蛋白质组学测序结果发现,快大型肉鸡在较大的代谢压力下,较易发生酸碱平衡紊乱。与健康肉鸡相比,死于肉鸡猝死综合征的肉鸡血液中乳酸含量显着升高。乳酸作为糖酵解的主要产物,在代谢压力及应激的情况下会加重乳酸堆积进而改变机体p H,导致心肌细胞发生酸中毒和细胞损伤。因此,本研究利用酸中毒心肌细胞损伤模型探讨SDS发生时心肌损伤机制。课题组前期发现SDS肉鸡心肌纤维排列紊乱、断裂,线粒体出现动力学紊乱及结构性损伤。为深入探究SDS发生原因和机制,拟从以下几个方面进行研究。1.乳酸对鸡胚原代心肌细胞损伤作用的研究培养鸡胚原代心肌细胞,优化细胞分离培养条件并建立乳酸酸中毒细胞模型。以10 mM、20 mM及40 mM乳酸处理心肌细胞,收集细胞,进行后续试验。利用（1）光学显微镜观察乳酸处理24 h后心肌细胞形态及心肌细胞收缩频率的变化;（2）流式细胞术及Western blot（WB）检测乳酸处理后心肌细胞的凋亡情况;（3）透射电镜观察细胞内线粒体数量的变化;（4）流式检测乳酸处理后心肌细胞线粒体膜电位水平变化;（5）WB检测心肌细胞线粒体动力学相关蛋白Drp 1、Fis 1、Opa 1、Mfn 2蛋白的表达水平;（6）ROS检测试剂盒检测乳酸对心肌细胞内ROS水平的影响;（7）透射电镜及WB检测乳酸对心肌细胞线粒体自噬的影响。结果发现:不同浓度乳酸处理肉鸡原代心肌细胞后,（1）与对照组相比,随着乳酸浓度的增加,乳酸处理组肉鸡原代心肌细胞立体感逐渐消失,折光性逐渐降低,心肌细胞收缩频率显着降低（P<0.01）;（2）乳酸处理心肌细胞24 h后,心肌细胞中DNA损伤修复酶PARP-1显着下调,细胞凋亡关键蛋白cleaved Caspase-3的表达量明显下调（P<0.01）,流式结果显示,心肌细胞凋亡率随乳酸浓度的增加而显着增加（P<0.01）;（3）超微结构结果表明,乳酸可改变鸡胚原代心肌细胞线粒体形态并显着减少线粒体数量（P<0.01）;（4）乳酸可导致线粒体膜电位显着下降（P<0.01）;（5）WB结果显示,乳酸处理心肌细胞后均可上调线粒体分裂蛋白Drp1和Fis1的表达水平（P<0.01）,且呈时间依赖性;而融合蛋白Mfn2和Opa1的表达水平则随着时间的延长明显下调（P<0.01）;（6）乳酸处理细胞24 h后,ROS水平升高,在40 mM时显着高于对照组（P<0.01）;（7）与对照组相比乳酸处理组细胞内自噬体数量显着增多,且p62表达量显着下调、LC3表达量显着上调（P<0.01）。2.抑制线粒体分裂对乳酸导致的心肌细胞损伤的保护作用为进一步研究线粒体分裂融合对心肌细胞的影响,选用5μM Mdivi-1（mitochondrial division inhibitor 1,线粒体分裂相关蛋白Drp1的抑制剂）与不同乳酸浓度共同处理心肌细胞研究Drp1对心肌细胞损伤的影响。利用（1）CCK-8测定抑制线粒体分裂对心肌细胞存活率的影响;（2）免疫荧光观察抑制线粒体分裂后线粒体网络化状态;（3）WB检测cleaved Caspase-3表达量的变化;（4）抑制线粒体分裂后检测心肌细胞ROS水平的变化。结果发现:利用Mdivi-1抑制心肌细胞线粒体分裂后,（1）Mdivi-1可降低乳酸导致的心肌细胞死亡率;（2）用20 mM乳酸和Mdivi-1共同处理心肌细胞后,可以有效恢复细胞内线粒体之间的网络状态;（3）cleaved Caspase-3在未处理组和Mdivi-1单独处理组细胞中表达水平相对较低且无明显变化;经乳酸单独处理后,cleaved Caspase-3的表达水平显着增加（P<0.01）,与乳酸单独处理组相比,Mdivi-1与乳酸共同处理组中cleaved Caspase-3的表达显着降低（P<0.05）;（4）与乳酸单独处理组相比,Mdivi-1可使乳酸处理组的心肌细胞中ROS明显降低。3.建立肉鸡猝死综合征模型根据酸中毒体外模型结果,利用氯化铵灌胃初步建立了肉鸡猝死体内模型。（1）检测肉鸡动脉血p H、血清碳酸氢盐浓度和二氧化碳动脉分压情况;（2）观察对照组和模型组肉鸡临床症状;（3）剖检肉鸡的心脏病变;（4）通过病理组织学检查肉鸡心脏的病理变化。结果显示:肉鸡猝死体内模型结果显示:（1）与对照组相比,肉鸡猝死模型血液p H、血清碳酸氢盐浓度和二氧化碳分压均显着下降（P<0.05）;（2）对照组肉鸡外观健康,精神状态良好,采食正常;而模型组肉鸡多表现为精神不振且有猝死发生,发生猝死的肉鸡表现为突然失去平衡,煽动翅膀,尖叫;（3）猝死肉鸡解剖可见心脏体积明显扩张,且有大量的心包积液;肺脏淤血肿胀,呈暗红色;（4）病理组织学检查结果显示,猝死肉鸡心肌细胞发生颗粒变性、肌纤维断裂,心肌细胞间出血。以上结果表明乳酸可使原代心肌细胞收缩频率减低、形态发生改变、凋亡增加,线粒体结构损伤、膜电位降低、动力学异常、氧化应激水平升高、线粒体自噬增加;添加线粒体分裂抑制剂后,乳酸处理后的原代心肌细胞存活率升高、ROS水平降低,细胞凋亡减少,可有效保护心肌细胞和线粒体的结构与功能;利用氯化铵可以成功建立肉鸡猝死体内模型,初步复制出了肉鸡SDS的临床病例特征。体内和体外肉鸡猝死模型的成功建立,为SDS的防控奠定基础,并从比较医学的角度,为人类猝死疾病的机制研究提供思路。
姜翠霞[2]（2021）在《西北主要中药材对泌乳牦牛和犊牛营养及生理代谢的影响》文中提出随着青藏高原畜牧业的发展,牦牛养殖数量不断增加,冬春补饲等半集约化养殖模式逐渐兴起,以应对青藏高原地区冬春季节牧草资源匮乏问题。青藏高原放牧泌乳牦牛长期存在繁殖率低、营养不足、体况低下的问题。早期断乳是犊牛管理中的一种有效措施,研究发现牦牛犊3～4月龄断乳不但能提高母牦牛发情率,而且可促进犊牛生长。但断乳犊牦牛存在免疫力低、断乳应激等问题,如管理不善会增加犊牦牛患病率和死亡率。中草药作为饲料添加剂,不仅能够起到保健治疗的功效,而且能够实现绿色健康养殖,是目前畜牧业着力研究开发的方向。中药黄芪、党参、当归和甘草是我国西北地区重要的道地中药材,具有提高机体免疫能力、抗氧化、促生长、抑制病原菌等功效。本论文采用黄芪粉和当归粉作为饲料添加剂饲喂泌乳牦牛以及利用四种中药浸提液（黄芪、党参、当归和甘草）作为饲料添加剂饲喂早期断乳牦牛犊,研究饲喂功效,为中药作为饲料添加剂饲喂幼畜提供理论依据。具体研究结果如下:第一部分黄芪当归粉对泌乳牦牛血液生理生化指标及乳品质的影响实验选取体重、年龄、产犊时间基本一致的泌乳期健康牦牛24头,随机分为2组（每组12头）,中药组归牧后补饲350 g黄芪当归粉（2.5:1）,对照组不添加中药,实验期为68天。实验结果表明:中药组牦牛血清中肌酐（CREA）、丙二醛（MDA）含量显着低于对照组（P<0.05）,而免疫球蛋白（Ig A,Ig G,Ig M）以及白介素-2（IL-2）,谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、生长激素（GH）水平显着高于对照组（P<0.05）。中药组牦牛乳中脂肪、蛋白、乳糖、尿素氮、乳铁蛋白含量均显着高于对照组（P<0.05）,而体细胞数显着低于对照组（P<0.05）。本实验结果表明,泌乳牦牛饲喂中药黄芪当归粉,能显着提高其免疫力和抗氧化能力,并起到改善乳品质的功效。第二部分中药浸提液饲喂早期断乳犊牛的研究实验选取同一群、遗传背景相似、3～4月龄断乳犊牦牛25头,随机分为5组（CK组、当归组、党参组、甘草组、黄芪组）,每组5头,在基础日粮的基础上添加中药浸提液,添加量均为80 m L·kg-1DMI,实验期共75天,包括预饲期15天,正饲期60天。实验获得如下结果:（1）对生长性能的影响:实验末期四种中药浸提液饲喂组之间以及与对照组之间犊牛体重没有显着差异（P>0.05）。实验期间补饲党参浸提液组犊牛平均日增重（ADG）最高;而补饲黄芪浸提液组犊牛ADG显着高于对照组（P<0.05）。（2）对瘤胃发酵和微生物组成的影响:四种中药浸提液饲喂组犊牛瘤胃丙酸、异丁酸和异戊酸浓度高于对照组（P<0.05）。实验末期当归、党参和黄芪浸提液饲喂组犊牛瘤胃氨态氮浓度显着低于对照组（P<0.05）。对犊牛瘤胃菌群影响结果表明当归浸提液饲喂组瘤胃细菌多样性显着提高（P<0.05）,当归和甘草浸提液饲喂组瘤胃拟杆菌门丰度显着高于对照组（P<0.05）,而厚壁菌门丰度显着低于对照组（P<0.05）。党参浸提液显着提高了犊牛瘤胃放线菌门（Actinobacteria）和变形菌门（Proteobacteria）丰度（P>0.05）;而黄芪浸提液显着提高了螺旋菌门（Spirochaetes）丰（P<0.05）。四种中药浸提液均降低了瘤胃琥珀酸菌属（Succiniclasticum）的丰度（P<0.05）。（3）对血液生理生化指标的影响:四种中药浸提液饲喂提高了犊牦牛血清葡萄糖（GLU）、血清总蛋白（TP）和白蛋白（ALB）水平,降低了血清总胆固醇（TC）和游离脂肪酸（FAA）水平（P<0.05）。甘草和黄芪浸提液饲喂降低了血清甘油三酯（TG）含量（P<0.05）。分析血清丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH）水平,饲喂四种中药浸提液均表现出显着的抗氧化功效。（4）血清代谢组学结果:四种中药浸提液对犊牦牛血清代谢物含量均有不同程度的影响,其中甘草组和黄芪组影响最为显着（P<0.05）。当归浸提液下调甘油磷脂代谢,四种浸提液均上调了氨基酸合成代谢。综上所述,泌乳牦牛饲喂中药黄芪当归粉能够显着提高牦牛营养代谢水平、免疫力和抗氧化能力,并改善乳品质。当归、党参、甘草和黄芪四种中药浸提液饲喂早期断乳犊牛,表现出调控瘤胃发酵和微生物组成的功效、提高抗氧化能力、调节犊牛机体蛋白质、脂肪代谢,黄芪和党参浸提液表现出促生长的功效。
郭江渊[3]（2021）在《烟酰胺腺嘌呤二核苷酸对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠视神经及视网膜保护作用的机制研究》文中研究说明多发性硬化（MS）是一种累及中枢神经系统的炎性脱髓鞘性疾病,体征和症状具有时间及空间多发性,镜下病理改变为血管周围炎性细胞浸润、髓鞘缺失崩解、轴索损伤、胶质细胞增生等。据统计,约40%的MS患者在疾病初期伴随视神经炎（ON）,疾病进展期则高达80%。急性视神经炎可造成视力急剧下降,超过半数患者会遗留不同程度的永久性视觉障碍,严重影响劳动能力,是导致中青年神经残疾的重要原因之一。ON是由自身免疫反应介导的急性视神经脱髓鞘和视网膜神经节细胞（RGCs）死亡的疾病,其病理特点表现为,炎症细胞浸润、脱髓鞘、轴突损缺、RGCs死亡。引起ON的原因十分复杂,如氧化应激、病原体感染、营养不良、环境等诸多因素。而炎症反应被认为在ON的发病机制中起关键作用。越来越多的证据表明,小胶质细胞激活、炎症因子分泌和炎症细胞浸润可能与ON的脱髓鞘和轴索损伤病变有关。目前对ON发病机制的认识得益于实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）的研究。EAE介导的小鼠视神经炎的表现与人类疾病相似,为神经病变提供了活体模型。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）,又称氧化辅酶I,在所有细胞的燃料底物分解代谢中起着重要作用。NAD+作为电子的受体,在还原态和氧化态之间往复循环,其氧化还原循环是多种代谢途径中的一个关键过程。已有大量的研究证实NAD+对线粒体能量代谢、钙稳态、自噬、细胞分化、凋亡、衰老、基因表达等有重要影响。有学者发现,NAD+可以减轻EAE小鼠的临床症状和脑及脊髓中炎性细胞浸润程度,并可对抗细胞凋亡从而起保护作用。NAD+通过激活AMPK/SIRT1信号通路,缓解促炎T细胞反应,减轻EAE病变程度。然而据我们所知,NAD+是否在EAE介导的视神经和视网膜损伤有预防和治疗作用尚未见报道。Sirtuin 1（SIRT1）是一种依赖NAD+的去乙酰化酶,多存在于细胞核内,广泛参与氧化应激、炎症、生长发育、营养代谢、细胞分化、自噬和凋亡等过程。越来越多证据表明,通过转基因过表达或药物诱导上调SIRT1表达水平可能对多种神经退行性改变有治疗价值。有研究团队发现SIRT1过表达,对EAE小鼠腰膨大部位的神经轴突和髓鞘有保持完整性的作用,然而该研究的设计仅限于局限于脊髓病变,并没有探究SIRT1过表达对改善眼病的作用。在另一项对实验性视神经炎的研究中提示,使用SIRT1激活物白藜芦醇,在EAE和病原体介导的脱髓鞘疾病中可有效地减轻视神经炎症、轴索损伤,并保持RGCs的生存。NAD+作为参与SIRT1去乙酰化底物时必不可少的关键环节,理论上可以激活SIRT1,上调它在细胞内的表达水平。研究发现,应用NAD+干预治疗EAE小鼠,通过蛋白质印迹法检测到NAD+可以上调EAE小鼠腰膨大中SIRT1的表达水平,并降低了脾中各类促炎细胞因子m RNA的转录水平,结果符合理论推测。故本实验推测NAD+可能通过影响SIRT1的表达水平从而对EAE介导的小鼠视神炎的炎症反应和RGCS凋亡发挥保护作用。AKT,又称蛋白激酶B,是一种丝氨酸-苏氨酸激酶,是介导各种细胞过程的调控信号,如细胞生长、增殖、凋亡、代谢和血管生成。AKT信号通路的异常参与MS疾病发生发展。有研究发现,可逆性乙酰化是一种潜在的控制AKT活性的调节机制。AKT的PH域赖氨酸乙酰化抑制了其与磷脂酰肌醇3,4,5-三磷酸（PIP3）的结合,从而使AKT失活。SIRT1使PH结构域去乙酰化,这是AKT与PIP3结合的必要过程,也是AKT膜定位和激活的必要过程。所以,SIRT1的去乙酰化促进了与PIP3结合和3-磷酸肌醇依赖激酶-1（PDK1）的膜定位。因此,我们提出了SIRT1通过去乙酰化依赖性激活AKT从而减缓EAE介导的视神经炎进展的可能性。综上,目前在MS/EAE中,NAD+/SIRT1与炎症和凋亡在视网膜/视神经中的关系国内外尚无报道。在我们的实验研究中,使用MOG35-55免疫诱导EAE小鼠模型,观察NAD+对EAE介导的视神经炎是否存在有效的保护作用,并对NAD+是否通过上调SIRT1表达水平以及影响SIRT1/AKT通路来调节EAE的免疫反应予以研究。第一部分烟酰胺腺嘌呤二核苷酸对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠视经炎保护作用的效果分析和病理学研究目的:建立成功的实验性自身免疫性脑脊髓炎动物模型后,给予NAD+药物干预,记录各组小鼠的发病时间及症状表现。在疾病高峰期取小鼠视神经组织进行HE染色、LFB染色和Bielschowsky银染色,从病理学角度鉴定NAD+对实验性自身免疫性脑脊髓炎介导的视神经炎发生的相关病理改变的作用效果,研究NAD+是否可以缓解视神经炎小鼠的炎症反应、髓鞘缺失和轴索损伤。方法:1.选取实验对象。采用无特定病原体级（SPF级）近交系雌性C57BL/6小鼠,周龄8-10周,体重18-20g。将小鼠饲养于相对湿度50%-60%,室内温度24±2℃的环境中,保证人工明-暗12小时交替循环照明,给予洁净的水源和充足的饲料,小鼠可自由饮水摄食。2.建立经典的EAE动物模型。用生理盐水将MOG35-55多肽稀释,配制为10mg/ml的溶液。加入等体积的完全弗氏佐剂（CFA）和一定量的结核菌素,使结核杆菌H37Ra浓度达到4mg/ml。混合液充分乳化后形成油包水乳剂,在小鼠背部脊柱两侧任意四点进行皮下注射,每只0.1ml。随后分别在免疫第0天（0h）及第2天（48h）给予小鼠0.5ml百日咳毒素（PTX）腹腔注射。3.动物分组及药物干预。将C57BL/6小鼠随机分成空白对照组、EAE模型组、EAE+NAD+预防组和EAE+NAD+治疗组。用磷酸盐缓冲生理盐水（PBS）将NAD+溶解稀释,现配现用。诱导当天为第0天,EAE+NAD+预防组小鼠自免疫第1天开始,每日每只腹腔注射250mg/kg NAD+。EAE+NAD+治疗组自小鼠出现症状开始（Weaver评分≥1）,每日每只腹腔注射250mg/kg NAD+。空白对照组和EAE模型组自免疫第1天开始,给与等量的PBS,持续至发病高峰。4.神经功能评分使用Weaver 15分法。HE染色显示各组小鼠视神经组织的病理变化,LFB染色法评估视神经的脱髓鞘程度,Bielschowsky银染色观察视神经轴突的缺损情况。HE染色炎症评分标准:0分=无炎性细胞浸润;1分=视神经或视神经鞘轻度细胞浸润;2分=中等入渗;3分=重度浸润;4分=大量渗透。任何可检测到炎症的神经得分（得分1-4分）被认为是视神经炎。LFB染色髓鞘脱失评分标准:0分=无髓鞘脱失;1分=轻度髓鞘脱失;2分=中度髓鞘脱失;3分=重度髓鞘脱失。5.所有数据均使用Graph Pad Prism 7（美国）进行分析。所有结果均以均数±标准差（SD）表示。组间比较采用单因素方差分析（ANOVA）进行统计学差异分析。临床神经功能评分用Mann-Whitney U检验。P<0.05被认为有统计学意义差异。结果:1.EAE模型组小鼠发病时间最早,Weaver评分最高。给予NAD+干预后发病时间延后,Weaver评分下降,临床症状减轻。2.HE染色结果显示,EAE模型组视神经结构发生明显改变,神经纤维空泡变性明显,排列紊乱,断裂不连续,炎症细胞大量浸润。3.LFB染色结果显示,EAE模型组视神经出现白色空泡髓鞘缺失区域,髓鞘脱失范围大。4.Bielschowsky银染色结果显示EAE模型组轴突呈浅棕色至深棕色,并出现轴索断裂、空洞改变。给予NAD+干预后,视神经中炎性细胞浸润、髓鞘缺失、轴突损害程度减轻。结论:1.NAD+干预能够推迟EAE小鼠发病时间,改善症状并降低神经功能评分。2.NAD+干预能够减轻EAE小鼠视神经的炎性反应、脱髓鞘、轴突损伤,对视神经具有预防和治疗的保护作用。第二部分烟酰胺腺嘌呤二核苷酸能够通过减轻免疫炎症反应及细胞凋亡对实验性自身免疫性脑脊髓炎介导的视神经炎起保护作用目的:在EAE介导的视神经炎的发病机制中,各类炎性因子及促炎细胞起到了重要作用,可导致脱髓鞘、轴突缺损和RGCs丢失。我们利用MOG35-55诱导C57BL/6小鼠生成EAE介导的视神经炎疾病的动物模型,给予NAD+药物进行干预,观察各组小鼠的免疫细胞（小胶质细胞、星形胶质细胞）、促炎性细胞因子TNF-α和IL-6的表达,以及细胞凋亡情况。为NAD+对视神经炎的保护作用提供进一步的实验证据。方法:1.选取实验对象。采用无特定病原体级（SPF级）近交系雌性C57BL/6小鼠,周龄8-10周,体重18-20g。将小鼠饲养于相对湿度50%-60%,室内温度24±2℃的环境中,保证人工明-暗12小时交替循环照明,给予洁净的水源和充足的饲料,小鼠可自由饮水摄食。2.建立经典的EAE动物模型。用生理盐水将MOG35-55多肽稀释,配制为10mg/ml的溶液。加入等体积的完全弗氏佐剂（CFA）和一定量的结核菌素,使结核杆菌H37Ra浓度达到4mg/ml。混合液充分乳化后形成油包水乳剂,在小鼠背部脊柱两侧任意四点进行皮下注射,每只0.1ml。随后分别在免疫第0天（0h）及第2天（48h）给予小鼠0.5ml百日咳毒素（PTX）腹腔注射。3.动物分组及药物干预。将C57BL/6小鼠随机分成空白对照组、EAE模型组、EAE+NAD+预防组和EAE+NAD+治疗组。用磷酸盐缓冲生理盐水（PBS）将NAD+溶解稀释,现配现用。诱导当天为第0天,EAE+NAD+预防组小鼠自免疫第1天开始,每日每只腹腔注射250mg/kg NAD+。EAE+NAD+治疗组自小鼠出现症状开始（Weaver评分≥1）,每日每只腹腔注射250mg/kg NAD+。空白对照组和EAE模型组自免疫第1天开始,给与等量的PBS,持续至发病高峰。4.免疫荧光检测视神经组织中Iba1（小胶质细胞）、GFAP（星形胶质细胞）的表达情况。取小鼠新鲜视神经、视网膜组织,使用时荧光定量PCR方法检测促炎细胞因子TNF-α和IL-6 m RNA的转录水平。5.使用TUNEL及Brn3a免疫荧光双染法检测视网膜中RGCs细胞的数量和凋亡情况。6.所有数据均使用Graph Pad Prism 7（美国）进行分析。所有结果均以均数±标准差（SD）表示。组间比较采用单因素方差分析（ANOVA）进行统计学差异分析。P<0.05被认为有统计学意义差异。结果:1.免疫荧光染色显示,EAE模型组视神经组织中的Iba1和GFAP荧光强度较空白对照组明显增加,NAD+预防组和治疗组显着降低了两种生物标志物的荧光强度。2.实时荧光定量PCR提示EAE模型组视神经及视网膜组织中的TNF-α和IL-6较空白对照组分泌明显增加,NAD+干预后减少。3.免疫荧光双染色显示,Brn3a标记的EAE模型组的RGCs数量最少,TUNEL标记的EAE模型组的RGCs凋亡比例最高。NAD+干预后较RGCs凋亡细胞减少。结论:1.NAD+可以减少EAE小鼠视神经中小胶质细胞和星形胶质细胞的富集,减缓炎症反应的发生。2.NAD+可以抑制EAE小鼠视神经、视网膜中促炎细胞因子TNF-α和IL-6的表达。3.NAD+可以对抗EAE小鼠视网膜的RGCs凋亡,保护RGCs。第三部分烟酰胺腺嘌呤二核苷酸可能通过激活SIRT1/AKT通路发挥对实验性自身免疫性脑脊髓炎介导的视神经炎的保护作用目的:上部分结论提示NAD+有对抗EAE小鼠的视网膜神经节细胞凋亡作用,为进一步验证,在本部分实验中会从蛋白表达层面观察小鼠视神经、视网膜组织中凋亡相关蛋白cleaved-Caspase 3、cleaved-PARP的表达情况。研究表示SIRT1具有抗炎和抗凋亡的作用,而AKT是SIRT1的主要下游因子之一。在EAE介导的视神经炎中,NAD+的抗炎及抗凋亡的神经保护作用是否是通过影响SIRT1表达及调节SIRT1/AKT通路来实现呢。因此,我们通过免疫荧光和蛋白质印迹法观察SIRT1及AKT的变化,为NAD+调节免疫机制提供更多的证据。方法:1.选取实验对象。采用无特定病原体级（SPF级）近交系雌性C57BL/6小鼠,周龄8-10周,体重18-20g。将小鼠饲养于相对湿度50%-60%,室内温度24±2℃的环境中,保证人工明-暗12小时交替循环照明,给予洁净的水源和充足的饲料,小鼠可自由饮水摄食。2.建立经典的EAE动物模型。用生理盐水将MOG35-55多肽稀释,配制为10mg/ml的溶液。加入等体积的完全弗氏佐剂（CFA）和一定量的结核菌素,使结核杆菌H37Ra浓度达到4mg/ml。混合液充分乳化后形成油包水乳剂,在小鼠背部脊柱两侧任意四点进行皮下注射,每只0.1ml。随后分别在免疫第0天（0h）及第2天（48h）给予小鼠0.5ml百日咳毒素（PTX）腹腔注射。3.动物分组及药物干预。将C57BL/6小鼠随机分成空白对照组、EAE模型组、EAE+NAD+预防组和EAE+NAD+治疗组。用磷酸盐缓冲生理盐水（PBS）将NAD+溶解稀释,现配现用。诱导当天为第0天,EAE+NAD+预防组小鼠自免疫第1天开始,每日每只腹腔注射250mg/kg NAD+。EAE+NAD+治疗组自小鼠出现症状开始（Weaver评分≥1）,每日每只腹腔注射250mg/kg NAD+。空白对照组和EAE模型组自免疫第1天开始,给与等量的PBS,持续至发病高峰。4.Brn3a-SIRT1免疫荧光双染色法检测视网膜表达SIRT1的RGCs数量。5.蛋白质印迹法检测cleaved-Caspase 3、cleaved-PARP、SIRT1、AKT、p-AKT的变化。6.所有数据均使用Graph Pad Prism 7（美国）进行分析。所有结果均以均数±标准差（SD）表示。组间比较采用单因素方差分析（ANOVA）进行统计学差异分析。P<0.05被认为有统计学意义差异。结果:1.免疫荧光双染色结果显示,Brn3a-SIRT1标记的EAE模型组小鼠RGCs数量最少。给予NAD+干预后,小鼠视网膜中表达SIRT1的RGCs数量与EAE模型组相比均有增长。2.免疫印迹法结果提示EAE模型组视神经、视网膜组织中的cleaved-Caspase 3、cleaved-PARP表达水平最高,给予NAD+干预后,两者的表达水平降低。3.免疫印迹法提示EAE模型组视神经、视网膜组织中的SIRT1、p-AKT表达水平最低。给予NAD+干预后,两者的表达水平较EAE模型组明显升高。结论:1.NAD+干预可通过抑制视神经及视网膜中cleaved-Caspase 3和cleaved-PARP的表达,从而对抗EAE介导视神经炎的细胞凋亡。2.NAD+干预能够增多EAE小鼠视网膜中表达SIRT1的RGCs细胞数量,对EAE介导的视网膜神经节细胞（RGCs）损伤有保护作用。3.NAD+干预能够上调EAE小鼠视神经、视网膜组织中SIRT1、p-AKT的表达水平。NAD+可能是通过SIRT1/AKT通路发挥对EAE介导的视神经炎的免疫调节作用。
董娜[4]（2021）在《下调SOD1表达对心肌细胞功能的调控机制研究》文中研究表明背景及目的:氧化应激与多种临床疾病密切相关,阻塞性睡眠呼吸暂停（OSA）多合并心血管疾病,也是一种常见的氧化应激性疾病。有较多研究发现,间歇低氧（IH）环境下氧化应激水平升高,抗氧化物铜锌超氧化物歧化酶（SOD1）等水平减低。SOD1是生物体内关键的抗氧化酶之一,还可作为信号传播的控制器,其表达异常进一步影响脏器功能,但具体机制尚未完全明确。文献报道及我们的前期实验发现IH可致SOD1表达下调,但SOD1下调后对于脏器功能的影响及机制研究缺乏报道。基于以上理论和研究基础,我们选择心肌细胞为研究对象,模拟IH暴露后SOD1表达下调,利用高通量RNA测序（RNA-seq）寻找大鼠永生心肌细胞H9C2细胞系SOD1下调后相关差异表达基因（DEGs）,通过分析这些功能基因改变了解SOD1下调对心肌细胞功能的调控作用,推断SOD1在OSA相关心肌损伤过程中的作用及可能调控机制。从而为今后OSA并发心血管疾病的研究打开新的思路。方法:下调大鼠永生心肌细胞H9C2细胞系的SOD1基因,并收集细胞进行RNA-seq测序,寻找心肌细胞SOD1基因敲低细胞和基因野生型细胞基因转录水平发生显着差异的基因,采用GO和KEGG分析其参与的生物学过程、功能和可能的信号通路,以了解SOD1下调对心肌细胞功能的调控作用及机制。结果:（1）shRNA沉默后SOD1检测:与SOD1-阴性对照组（sh Ctrl）相比,SOD1-干扰组（sh SOD1）SOD1mRNA表达量明显下降,表明我们成功敲低了大鼠永生心肌细胞H9C2细胞中SOD1基因的表达。（2）转录组测序统计分析及序列比对:通过对样本测序文库进行RNA-seq,平均每个文库获得的高质量数据是73456593.0条,碱基总数为62.92Gb。由fastqc软件检测并评估出符合分析要求且用于后续分析的质量可靠的下机数据。特异性对应（Uniquely mapped）至参考基因组中唯一位点的比率为54.43%-69.94%。并进一步统计其在基因组的位置分布,发现位于CDS的测序数据较多,分布于基因间区和内含子区的较少。（3）SOD1差异表达分析结果:在H9C2细胞中敲低SOD1后,发现213个显着差异表达基因,其中,显着上调表达的基因总数为135个,显着下调表达的基因总数为78个。（4）SOD1相关差异基因的GO分析:对表达量上调的135个基因进行GO分析,发现大部分富集在转录调控和代谢过程等生物学过程,进一步查看这些基因的表达水平,发现EGR1和NR1D1在样本中表达量超过1,有研究报道EGR1与氧化应激和心肌肥厚有关;NR1D1在调节炎症反应和减少ROS产生中发挥重要作用。表达量下调的78个DEGs参加的生物学过程主要和代谢、氧化还原过程有关,包括与胆固物醇生物合成过程（cholesterol biosynthetic process）等有关,其中,SCD1、CCL2基因在SOD1参与的氧化还原过程中涉及的基因中表达量较高。SCD1是调节心脏代谢过程中的重要参与者;CCL2下调表达减少动脉粥样硬化的形成。（5）SOD1相关差异基因的KEGG分析:表达量下调的78个基因在KEGG分析中富集到的一些高表达信号通路与炎症相关,其中,CXCL1和CCL7基因均与炎症相关。（6）qRT-PCR验证差异表达基因:通过qRT-PCR分析EGR1、NR1D1、CCL2、CCL7、CXCL1、SCD1等6个基因的表达趋势,发现上调表达的基因是EGR1和NR1D1,下调表达的基因是CCL2、CCL7、CXCL1和SCD1。验证结果与RNA-seq结果相同,表明我们的测序结果可信。结论:本项目中发现了受到SOD1调控且富集性的参与氧化应激、炎症反应过程的基因和信号通路,其可能主要通过影响心肌收缩、炎症反应、脂质代谢等途径影响心脏的功能。推断其可能也在OSA相关的心肌损伤过程中发挥作用,值得关注和进一步研究。
杨占婷[5]（2021）在《藏药三味檀香散对高原低氧性肺动脉高压大鼠右心功能的影响及其机制研究》文中指出背景及目的目前,随着高原旅游业和探险运动等的发展,急、慢性高原病再次成为了诸多学者的研究重点。其中,高原低氧性肺动脉高压（High altitude pulmonary hypertension,HAPH）就是常见的高原病之一。在肺动脉高压（PAH）发生过程中,右心功能是PAH患者的重要预后因素之一,随着肺动脉压力的不断升高,右心室（RV）后负荷持续升高,引起右心室病理性肥厚。低氧刺激下能够引起永久性肺血管重建,导致肺血管阻力增加;长期慢性低氧也可直接导致右心室心肌细胞丢失和间质纤维化,导致右心功能损伤,最终引起患者右心衰竭及死亡。研究表明,通过降低肺动脉压而减轻RV后负荷或者直接保护右心功能已成为治疗PAH的新方向。超声心动检测是心功能判定的主要无创性检查手段之一,也对右心收缩和舒张功能的量化至关重要。右心室内径（RVID-DIA）、肺动脉加速时间（PA-AT）和三尖瓣环平面收缩偏移（TAPSE）已经是临床上评价RV收缩功能的重要指标。由于后负荷的变化对RV功能影响较大,因此对RV功能的评估同时包括右心室-肺动脉耦合（RV-PA耦合）检测。最新研究发现,面积变化分数（FAC（%））、FAC/平均肺动脉压（mPAP）和TAPSE/PA-AT比值,被认为是评估RV-PA耦合的重要指标。此外,Nt-proBNP也是PAH患者生存率的独立预测因子。Rho/Rho激酶途径在细胞的收缩、运动、增殖和凋亡中发挥着重要作用,该途径的激活能够诱导氧化应激并促进心血管疾病的发展。ROCK 1和ROCK 2是Rho激酶的两种亚型基因,研究表明,ROCK 1和ROCK 2与低氧性肺动脉高压和右心肥厚的发生密切相关。在肺动脉高压的治疗中,ROCK1和ROCK2亦是重要的治疗靶点。NFATc3和STAT3作为ROCK信号通路的下游因子,也是引起右心肥厚的重要调控因子。除此之外,RV的纤维化、氧化应激和心肌细胞的凋亡也是引起RV代偿失调和适应不良的重要因素。藏药三味檀香散（Tsantan Sumtang）在传统藏医中常用于治疗心热病,由广枣、檀香、肉豆蔻（1:1:1）三味药组成。三味檀香散具有改善大鼠心肌缺血和提高左心室收缩和舒张功能的作用。我们的前期研究结果发现,三味檀香散能够降低低氧诱导的肺动脉高压（hypoxia-induced pulmonary hypertension,HPH）大鼠的平均肺动脉压、改善右心室重构。为了更深入探讨三味檀香散对HPH大鼠右心室功能的影响,本研究的主要目标包括:1)研究三味檀香散对HPH大鼠右心功能的影响;2)研究三味檀香散对HPH大鼠RV-PA耦合的影响;3)探讨三味檀香散保护HPH大鼠右心功能的作用机制;4)利用分子对接的方法,初探三味檀香散保护HPH右心功能的物质基础。方法1.利用高效液相色谱（HPLC）和气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）鉴定藏药三味檀香散中挥发油的主要成分。2.大鼠分组:将SD大鼠分为对照组、低氧模型组和低氧+三味檀香散组(1.0g·kg-1·d-1,1.25 g·kg-1·d-1,or 1.5 g·kg-1·d-1),每组12只大鼠;除对照组外,将模型组和低氧+三味檀香散组置于低压氧舱（模拟海拔4500 m高度的高原低氧环境）中处理4周。3.4周后,用小动物超声心动图检测右心功能的相关指标:RVID-DIA、PA-AT和TAPSE。计算RV-PA耦合相关指标:FAC（%）、TAPSE/PA-AT、TAPSE/PASP和FAC/mPAP。并测量大鼠右心室收缩压（RVSP）、平均肺动脉压（mPAP）、血液学相关指标及血液中Nt-proBNP的含量。4.称量大鼠体重并计算各脏器指数、右心室肥厚指数（RV/（LV+S）、RV/BW）。用HE染色和透射电镜（TEM）观察三味檀香散对HPH大鼠右心室形态和超微结构的影响;用Masson三色染色和免疫组化染色观察三味檀香散对HPH大鼠右心室组织纤维化的影响,用TUNEL染色研究三味檀香散对HPH大鼠心肌细胞凋亡的影响。5.检测HPH大鼠右心室组织中SOD、MDA、GSH、GSH-PX含量,研究三味檀香散对HPH大鼠右心室组织氧化损伤的影响;利用Western blotting、q RT-PCR分析三味檀香散对HPH大鼠右心室组织中Bcl-2,Bax,caspase-3,ROCK1,ROCK2,NFATC3,P-STAT3蛋白和基因表达水平的影响。6.利用Auto Dock Tools-1.5.6软件,初探三味檀香散保护HPH大鼠右心功能的物质基础。结果1.在三味檀香散挥发油中共鉴定出35种化学成分;其中23号、28号和31号化合物分别是甲基丁香酚（Methyleugenol）、肉豆蔻醚（1,3-Benzodioxole,4-methoxy-6-（2-propenyl）-）和异榄香脂素（Isoelemicin）,它们是肉豆蔻挥发油中的主要成分;其中25号、32号和33号分别是α-佛手柑油烯（α-Bergamotene）、α-没药醇（α-Bisabolol）以及β-檀香醇（β-Santalol）为檀香挥发油中的主要成分。2.三味檀香散对HPH大鼠右心功能的影响:低氧模型组HPH大鼠血液中NT-proBNP含量升高,三味檀香散干预后其含量降低。低氧模型组RVID-DIA较对照组升高、PA-AT和TAPSE降低（P<0.05）,三味檀香散干预后RVID-DIA较模型组降低、PA-AT和TAPSE较模型组升高（P<0.05）。RV-PA耦合相关指标（TAPSE/PASP、FAC（%）、FAC/mPAP和TAPSE/PA-AT）在低氧条件下,均降低（P<0.05）,而三味檀香散干预后升高（P<0.05）。3.三味檀香散对HPH大鼠生理学指标的影响:低氧模型组中HPH大鼠的主要生理学指标包括mPAP、RVSP、RV/BW以及RVHI较对照组升高（P<0.05）;HPH大鼠血清中Hct、HGB、RBC水平较对照组升高,WBC、PLT水平降低（P<0.05）;三味檀香散干预后,HPH大鼠的主要生理学指标（mPAP、RVSP、RV/BW以及RVHI）较低氧模型组降低,血液学指标Hct、HGB、RBC水平较低氧模型组降低,WBC和PLT水平较低氧模型组升高（P<0.05）。4.三味檀香散对HPH大鼠右心结构的影响:HE染色结果表明,HPH大鼠RV组织中的心肌纤维肥大,分布较为稀疏,三味檀香散干预后,减轻了由低氧引起的心肌组织的损伤。TEM结果显示,对照组的心肌细胞染色质均匀分布,细胞质中线粒体丰富,结构清晰。在低氧模型组中,观察到HPH大鼠RV组织中线粒体肿胀,且结构不完整。三味檀香散干预后,线粒体结构损伤较模型组减轻。Masson三色染色和免疫组化染色结果显示,模型组中HPH大鼠的RV纤维化水平升高,三味檀香散干预后HPH大鼠的RV的纤维化水平较低氧模型组降低（P<0.05）。TUNEL染色结果显示,低氧下HPH大鼠心肌细胞凋亡水平增加,而三味檀香散干预后凋亡水平较低氧模型组降低（P<0.05）。5.三味檀香散对HPH大鼠RV组织氧化损伤的影响:与对照组相比,低氧模型组HPH大鼠RV组织中MDA含量增加,GSH含量、GSH-PX和SOD活性降低（P<0.05）。三味檀香散干预组中HPH大鼠RV组织中GSH含量和GSH-PX活性较低氧模型组增加,MDA含量较低氧模型组降低,SOD活性升高（P<0.05）。在低氧模型组中,HPH大鼠RV组织中Bax和cleaved-caspase-3的mRNA和蛋白质水平较对照组升高,Bcl-2水平降低（P<0.05）,Bax/Bcl-2比值较对照组升高;用三味檀香散干预后,HPH大鼠RV组织中Bax和cleaved-caspase-3的基因和蛋白质水平以及Bax/Bcl-2比值较低氧模型组降低,而Bcl-2水平升高（P<0.05）。低氧模型组中,HPH大鼠RV组织中ROCK1和ROCK2的mRNA和蛋白表达水平较对照组升高,三味檀香散干预后,ROCK1和ROCK2的mRNA和蛋白表达水平较低氧模型组降低（P<0.05）。ROCK通路下游因子NFATc3和P-STAT3的mRNA和蛋白表达水平较低氧模型组降低（P<0.05）。6.分子对接结果显示,异槲皮苷、熊果酸、利卡灵B、去氢二异丁香酚和2-（2-hydroxypropan-2-yl）-9-（3-methylbut-2-enyl）-2,3-dihydrofuro[3,2-g]chromen-7-o ne五种单体化合物与4wot靶蛋白的结合能力更优,可能是抑制ROCK蛋白的潜在化合物。结论1.本研究表明,三味檀香散能恢复HPH大鼠的RV功能和RV-PA耦合,改善血流动力学和血液学指标,保护RV免受HPH大鼠结构适应不良重塑的影响。2.三味檀香散对HPH大鼠RV功能的保护机制可能是通过抑制ROCK信号通路及其下游信号分子介导的。3.抑制ROCK信号通路可能与三味檀香散的抗氧化和抗凋亡作用相关。4.分子对接结果显示,异槲皮苷、熊果酸、利卡灵B、去氢二异丁香酚和2-（2-hydroxypropan-2-yl）-9-（3-methylbut-2-enyl）-2,3-dihydrofuro[3,2-g]chromen-7-o ne五种单体化合物是抑制ROCK蛋白的潜在化合物。
陈晨[6]（2020）在《健脾益气法复方对高糖诱导的H9c2细胞炎症的干预作用及其机制的实验研究》文中研究指明目 的:本研究应用高糖诱导大鼠心肌细胞（H9c2）来模拟糖尿病心肌病炎症模型,以健脾益气中药复方作为干预因素,通过体外实验检测对TLR4/MyD88/NF-κ B信号通路相关因子的影响,以及验证健脾益气方含药血清对炎症介质的调控作用,探讨健脾益气法对2型糖尿病心肌病心肌炎症损伤的保护机制及其作用靶点,为糖尿病心肌病的预防与治疗提供新的中医临床药物选择。材料与方法:1.含药血清的制备选取SPF级SD雄性大鼠60只,8周龄,随机分为正常组、健脾益气组和二甲双胍组,每组各20只。正常组用生理盐水进行灌胃,健脾益气组和二甲双胍组分别用健脾益气方、二甲双胍灌胃,每日1次,连续灌胃4周。于末次灌胃1h后,采集大鼠腹主动脉血液并分离制备含药血清。2.健脾益气方对体外高糖诱导的H9c2心肌细胞炎症改变的抑制作用将体外培养传代的大鼠心肌细胞（H9c2）,随机分为4组:正常组、模型组、健脾益气组和二甲双胍组。除正常组外,其余各组均采用30mmol/L高糖培养基刺激H9c2心肌细胞56h,正常组与模型组加入正常血清,健脾益气组和二甲双胍组分别加入健脾益气方血清和二甲双胍血清对细胞进行干预,并分为12h、24h、48h（即在造模44h、32h、8h后加入药物）三个时间梯度进行,于56h后收集细胞上清,使用ELISA法检测各组细胞上清中促炎因子IL-6,TNF-α的表达含量,并探讨不同干预时间对疗效的影响。3.健脾益气方抑制高糖诱导的H9c2心肌细胞炎性改变作用的机制研究将体外培养传代的大鼠心肌细胞（H9c2）,随机分为6组:正常组、模型组、阻断剂组、健脾益气组、健脾益气方+阻断剂组及二甲双胍组。除正常组外,其余各组均采用30mmol/L高糖培养基刺激H9c2心肌细胞56h,正常组与模型组加入正常血清,阻断剂组、健脾益气组、健脾益气方+阻断剂组和二甲双胍组,分别加入正常血清+TAK阻断剂、健脾益气方血清、健脾益气方血清+TAK阻断剂和二甲双胍血清对细胞进行干预24h（即在造模32h后加药）,于56h后收集细胞。使用Real-timePCR和Western-blot方法分别检测TLR4、MyD88、NF-κ B mRNA及蛋白的表达。结 果1.Ⅱ9c2心肌细胞中白介素6（IL-6）表达的结果与正常组比较,模型组IL-6表达明显升高,差异具有统计学意义（p<0.05）;与模型组比较,各治疗组IL-6的表达均下降,差异具有统计学意义（p<0.05或p<0.01）,本实验将健脾益气组分为三个时间梯队（12h、24h、48h）对模型细胞进行干预,结果表明,与模型组相比,健脾益气组干预24h 比干预12h、48h的统计学意义更为显着。2.H9c2心肌细胞中肿瘤坏死因子（TNF-α）表达的结果与正常组比较,模型组TNF-α表达明显升高,差异具有统计学意义（p<0.05）;与模型组比较,各治疗组TNF-α的表达均下降,差异具有统计学意义（p<0.05或p<0.01）,本实验将健脾益气组分为三个时间梯队（12h、24h、48h）对模型细胞进行干预,结果表明,与模型组相比,健脾益气组干预24h 比干预12h、48h的统计学意义更为显着。3.H9c2心肌细胞中TLR4 mRNA及TLR4蛋白的表达结果与正常组比较,模型组的TLR4 mRNA和TLR4蛋白表达均升高,差异具有统计学意义（p<0.01）;与模型组比较,阻断剂组的TLR4 mRNA和TLR4蛋白表达出现下降（p<0.05）;与阻断剂组比较,健脾益气组、健脾益气方+阻断剂组、二甲双胍组TLR4 mRNA和TLR4蛋白表达量均下降（p<0.01）。各治疗组相比疗效依次为:健脾益气方+阻断剂组>二甲双胍组>健脾益气组。4.H9c2心肌细胞中MyD88 mRNA及MyD88蛋白的表达结果与正常组比较,模型组的MyD88 mRNA和MyD88蛋白表达均升高,差异具有统计学意义（p<0.01）;与模型组比较,阻断剂组的MyD88 mRNA和MyD88蛋白表达出现下降（p<0.05）;与阻断剂组比较,健脾益气组、健脾益气方+阻断剂组、二甲双胍组MyD88 mRNA和MyD88蛋白表达量均下降（p<0.01）。各治疗组相比疗效依次为:健脾益气方+阻断剂组>二甲双胍组>健脾益气组。5.H9c2心肌细胞中NF-κ B mRNA及NF-κ B蛋白的表达结果与正常组比较,模型组的NF-K B mRNA和NF-κ B蛋白表达均升高,差异具有统计学意义（p<0.01）;与模型组比较,阻断剂组的NF-κ B mRNA和NF-κ B蛋白表达出现下降（p<0.05）;与阻断剂组比较,健脾益气组、健脾益气方+阻断剂组、二甲双胍组NF-κ B mRNA和NF-κ B蛋白表达量均下降（p<0.01）。各治疗组相比疗效依次为:健脾益气方+阻断剂组>二甲双胍组>健脾益气组。结 论1.通过高糖诱导的H9c2心肌细胞中出现炎症因子IL-6、TNF-α的过度表达,并且各组炎症模型细胞中均发现NF-κ B mRNA及蛋白的表达增加,表明NF-κ B信号通路的过度激活与心肌细胞炎症损伤可能是共同促进DCM发生发展的机制。2.本实验运用健脾益气方进行干预治疗,可以抑制NF-κ B通路中促炎因子TNF-α和IL-6的表达,表明健脾益气方对高糖诱导的H9c2心肌细胞具有抗炎作用。3.健脾益气方可以抑制TLR4/MyD88/NF-κ B信号通路的表达,减轻糖尿病心肌病心肌细胞的炎症损伤,改善心功能,从而对DCM模型大鼠的心肌细胞具有保护作用。
王庆全[7]（2020）在《心不藏神不寐的理论及实验研究》文中认为本研究是基于我们科研团队三项国家自然科学基金项目、二十余年临床实践及科研验证而总结提出的“依据单一症状的中医不寐五神分型病位诊断法”（简称“中医不寐五神分型”,包括心不藏神不寐、肝不藏魂不寐、肺不藏魄不寐、脾不藏意不寐、肾不藏志不寐5型）,选择其中之“心不藏神不寐”一型而进行的专项研究,涉及“心不藏神不寐”的理论研究、“心不藏神不寐”动物模型的构建及“心不藏神不寐”动物模型的药物干预研究三个部分。第一部分心藏神对寐寤具有重要的调节作用,心不藏神不寐的本质在于心神不安于舍,以入寐唯艰、迟寐、甚或彻夜不眠为主症,病位主要与心有关。心不藏神不寐的病因包括虚实两个方面,邪实多因心火、痰火、食滞和瘀血等,正虚多责之于心之气、血、阴、阳亏虚等;其病机主要是邪扰心神或心神失养。心不藏神不寐的治则有祛邪安心神（清心火安心神、祛痰热安心神、和胃气安心神、化瘀血安心神）、补益安心神（补心气安心神、养心血安心神、滋心阴安心神、温心阳安心神）和重镇安心神。临床多从心火亢盛、痰火扰心、心胃不和、瘀血阻心、心气亏虚、心血亏虚、心阴不足和心阳亏虚等方面进行辨治。治疗心不藏神不寐的安心神归经药物较多,然而每味药物又有其自身的特点,临床上可根据心不藏神不寐病机偏于心火盛、痰热、瘀血或心之气、血、津液不足等病理因素,在遣方用药时,有针对性的加入不同性能的安心神归经药物,从而有助于疗效的提高。文献报道心火亢盛是不寐病的常见病机,而黄连是清心火安心神诸药中最擅长治疗失眠的一味,古今文献报道较多;其发挥安心神作用的主要成分是小檗碱,而其它清心火安心神药则不含有这一成分;且火热之邪扰神为心不藏神不寐的常见致病因素,黄连清心火、安心神之功恰好针对火热之邪扰神这一致病因素。因此,本研究首选黄连进行心不藏神不寐的实验研究。第二部分目的:探索心不藏神不寐大鼠模型的造模方法和评价指标。方法:采用对氯苯丙氨酸联合咖啡因复制心不藏神不寐大鼠模型,并从一般情况、水迷宫实验、戊巴比妥钠致眠实验、心血管相关因子和脑电图等方面对模型进行评价。结果:与正常组比较,复合组大鼠体重明显减轻,心率、呼吸频率、收缩压明显升高。与正常组比较,复合组睡眠潜伏时间明显延长（P<0.01）,高于PCPA组、咖啡因组（P<0.01）;复合组睡眠持续时间明显缩短（P<0.01）,低于PCPA组、咖啡因组（P<0.01）。与正常组比较,复合组、PCPA组大鼠逃逸潜伏期明显延长（P<0.01）,复合组、PCPA组大鼠目标象限穿台次数均减少（P<0.01）。与正常组比较,复合组大鼠血浆、心肌及脑组织中ANP、BNP、ET-1、IL-6、TNF-α及LI-17A含量均有不同程度的升高,且高于PCPA组、咖啡因组。结论:PCPA联合咖啡因的造模方式可导致大鼠学习记忆能力下降,心血管功能异常,脑电特征出现TST明显减少,睡眠潜伏期明显延长,SWS明显减少,REMS减少,此与心不藏神不寐患者PSG特征类似,故以PCPA联合咖啡因可以构建心不藏神不寐大鼠模型。第三部分目的:基于转录组测序技术探索安心神归经药黄连的单体黄连素治疗心不藏神不寐的作用机制。方法:将60只SD大鼠随机分成正常组、模型组、地西泮组和黄连素低、中、高剂量组,每组10只。黄连素高、中、低剂量组分别灌胃给予黄连素200、100、50mg/kg;地西泮组给予0.92mg/kg地西泮水溶液灌胃;模型组和正常组灌胃给予同体积的生理盐水,连续灌胃给药7天,治疗结束后行戊巴比妥钠睡眠实验及水迷宫实验,并采用Elisa法检测血浆中ANP、BNP、ET-1、IL-6、TNF-α及IL-17A的含量。同时选取正常组、模型组、黄连素中剂量组和地西泮组大鼠海马组织进行转录组测序,按padj<0.05及|log2foldchange|≧2作为显着差异表达基因的筛选条件（其中log2foldchange≧2为显着上调基因,log2foldchange≦-2为显着下调基因）;以padj<0.05作为GO、KEGG显着富集的筛选标准。采用PCR、Western blot对关键基因进行验证。结果:与模型组比较,黄连素低、中、高剂量组及地西泮组大鼠睡眠潜伏时间均缩短、睡眠持续时间均延长（P<0.01）,大鼠逃逸潜伏期均明显缩短、穿台次数均增加（P<0.01）。与模型组比较,黄连素低、中、高剂量组及地西泮组均能降低血浆中ANP、BNP、ET-1、IL-6、TNF-α及IL-17A的含量,且黄连素中剂量组优于地西泮组（P<0.01）。与模型组比较,正常组筛选出显着差异表达基因164个,其中上调146个,下调18个;黄连素中剂量组筛选出显着差异表达基因164个,其中上调159个,下调5个;地西泮组筛选出显着差异表达基因123个,其中上调111个,下调12个。根据padj<0.05,并与模型组比较,正常组富集到显着上、下调GO条目分别为564个（BP 384个、CC 89个、MF 91个）和320个（BP 150个、CC 107个、MF 63个）;黄连素中剂量组,富集到显着上、下调GO条目分别为558个（BP 398个、CC 87个、MF 73个）和343个（BP 148个、CC 130个、MF 65个）;地西泮组富集到显着上、下调GO条目分别为830个（BP619个、CC 109个、MF 102个）和243个（BP 110个、CC 82个、MF 51个）。根据padj<0.05,并与模型组比较,正常组富集显着上、下调KEGG通路分别为84个和13个;黄连素中剂量组富集显着上、下调KEGG通路分别为88个和15个;地西泮组,富集显着上、下调KEGG通路分别为89个和14个。与正常组比较,模型组关键基因Ar、Erb B2、Erb B4和Grin2a表达量明显降低,经黄连素中剂量、地西泮治疗后Ar、Erb B2、Erb B4和Grin2a表达量明显升高,差异具有统计学意义（P<0.01）。结论:安心神归经药黄连的单体黄连素治疗心不藏神不寐主要是通过上调相关基因实现的,其发挥作用的通路比较多,且上调通路多于下调通路。安心神归经药黄连的单体黄连素可促进心不藏神不寐大鼠海马中Ar、Erb B4、Erb B2、Grin2a基因的表达,并激活Erb B信号通路,这可能是其安心神作用的潜在有效靶点及通路。
段佳林[8]（2020）在《太白楤木总皂苷及其单体成分对脑卒中的作用及机制研究》文中进行了进一步梳理脑卒中是威胁人类健康的三大疾病之一,是我国成年人致死和致残的首要原因,且呈年轻化趋势,其中缺血性脑卒中占60-80%。目前,治疗缺血性脑卒中主要采用溶栓法进行血管再通,但严格的时间窗限制使中国患者受益率只有2.4%。超时间窗溶栓虽能取得一定的治疗效果,但有可能引起再灌注损伤,即脑缺血/再灌注损伤（Cerebral ischemia-reperfusion injury,CI/RI）。缺血中心区细胞已坏死无法逆转,但周边脑区即缺血半暗带细胞还可以挽回,因此,保护缺血半暗带组织和细胞,阻止脑损伤进一步发展,对于治疗脑卒中具有重要意义。太白楤木特产于我国“三大药山”之一的太白山区,其主要成分太白楤木总皂苷（Saponins from Aralia taibaiensis,sAT）,具有抗氧化、抗炎、抑制凋亡等生物学作用,但其对CI/RI的防治作用尚不明确,同时,其脑保护活性成分和作用机制也未见报道。目的:1.揭示sAT对抗CI/RI的药理学作用,尤其对CI/RI关键环节（氧化应激和线粒体障碍）的作用;2.阐明sAT对抗CI/RI的可能分子机制,以此为基础,筛选sAT对抗CI/RI的可能药效物质,为开发和利用sAT提供理论和实验基础。方法:体内采用大鼠局灶性脑缺血/再灌注（Middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R）模型,体外采用HT22小鼠海马神经元细胞氧糖剥夺/复氧（Oxygen and glucose deprivation/reoxygenafion,OGD/R）模型,验证sAT的脑保护作用。采用网络药理学技术预测可能作用的通路和靶点以寻找sAT的潜在作用机制。根据网络药理学预测结果,Western blotting检测腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activatedprotein kinase,AMPK）、蛋白激酶B（Protein kinase B,又称Akt）、过氧化物增殖子激活-受体因子γ辅激活因子（Peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α）和叉头框蛋白O 3a（Forkhead box protein O 3a,FOXO3a）蛋白的乙酰化水平和磷酸化水平,以及下游相关蛋白的表达情况。采用siRNA干扰技术、特异性激动剂或抑制剂证明相关蛋白的调控作用。通过采用siRNA干扰技术证明sAT通过Apelin 13调控AMPK/Akt。明确sAT对P38 MAPK、ATF4和HIF-1α的作用后,采用P38 MAPK的特异性激活剂（anisomycin）和抑制剂（SB203580）,或者siRNA干扰HIF-1α或ATF4表达,观察对sAT促Apelin13表达能力和脑保护作用的影响,以明确sAT是否通过HIF-1α和P38 MAPK/ATF4调控Apelin 13。为明确sAT的药效物质基础,对sAT中的单体成分进行活性筛选。采用RT-PCR、荧光报告基因细胞筛选模型,测定不同单体成分对缺氧反应元件（Hypoxia response elements,HREs）和CCAAT/增强子结合蛋白β（CCAAT/enhancer binding protein beta,C/EBPβ）转录活性的影响。最后采用siRNA干扰HIF-1α或P38 MAPK的特异性激活剂和抑制剂验证筛选出的皂苷单体的药效学作用及其是否分别通过影响HIF-1α和P38 MAPK/ATF4促进Apelin 13表达。结果:1.药效学研究。在体内,MCAO/R引起脑梗死面积显着增加（46.6±2.86%vs 0,P<0.01）、脑组织含水量增加（85.13±1.36%vs 77.6±4.03%,P<0.01）、神经功能学评分升高（4.33±0.82 vs 0,P<0.01）,而sAT能够剂量依赖性的抑制脑梗死面积（34.27±3.69%,26.97±2.15%,17.57±2.72%vs 46.6±2.86%,P<0.01）、减少脑组织含水量（81.97±1.36,79.9±2.29,77.97±2.46 vs 85.13±1.36,P<0.01）、改善脑神经功能障碍（3.5±1.05,2.67±1.03,1.0±0.89 vs 4.33±0.82,P<0.01）,同时,能够抑制脑组织中的氧化应激（P<0.01）和细胞凋亡水平（P<0.01）。在体外,OGD/R使细胞存活率显着下降（0.46±0.09 vs 1±0,P<0.01）、LDH释放增加（149.6±14.19 vs 39.63±8.89,P<0.01）、凋亡率增加、线粒体功能异常以及氧自由基水平增加,而sAT显着抑制细胞损伤,增加细胞内抗氧化酶表达、ATP水平,改善线粒体膜电位稳态和功能。证实sAT对缺血再灌注引起的脑损伤具有保护作用,且与降低氧化应激和改善线粒体功能关系密切。2.太白楤木中共收集31个皂苷单体,并根据结构预测到415个靶点,脑卒中筛选得到389个靶点,通过Venny分析二者交集筛选得到72个共同靶点。对72个共同靶点进行KEGG分析,获得248个生物过程,32个细胞组成,63个分子功能,对获得的104条KEGG通路分析发现,sAT调节的细胞通路包括TNF信号通路、PI3K/Akt信号通路、HIF-1信号通路、MAPK通路、FoxO通路、Toll样受体、AMPK通路和钙信号通路等。其中PI3K/Akt、AMPK、MAPK、HIF-1、Fox O等信号通路与上一章发现的抗氧化应激和线粒体稳态具有密切关系,是本研究下一章关注的重点。3.sAT通过AMPK/Akt调控SIRT1抑制氧化应激和线粒体功能障碍。sAT能够促进AMPK和Akt的磷酸化水平,同时促进SIRT1蛋白表达,以及FOXO3a和PGC-1α去乙酰化和磷酸化。通过si RNA干扰SIRT1表达,证实sAT通过SIRT1调控FOXO3a和PGC-1α乙酰化水平从而影响其活性;采用siRNA干扰Akt表达,证实sAT通过Akt促进FOXO3a和PGC-1α磷酸化水平影响其活性,同时可通过Akt调控SIRT1表达,继而影响下游蛋白的表达。siRNA干扰和抑制剂实验证实sAT对AMPK和Akt的交互调节关系。最终证明sAT通过活化AMPK/Akt促进SIRT1表达,从而调控FOXO3a和PGC-1α活性抑制线粒体损伤和氧化应激。4.sAT通过P38MAPK/ATF4和HIF-1α调控Apelin 13/AMPK/Akt。与模型组比较,sAT各剂量组使脑组织中Apln基因表达量分别增加约2.26倍、2.73倍和5.31倍,Aplnr基因表达量分别增加约1.5倍、2.75倍和3.27倍（P<0.01）,同时观察到sAT能够促进Apelin 13蛋白表达,表明sAT能够促进脑细胞内Apelin 13的基因和蛋白表达。采用基因干扰Apelin 13受体证实Apelin 13在sAT调控AMPK/Akt及其下游蛋白表达发挥脑保护作用中的关键作用。为研究Apelin 13的上游调节通路,本研究关注了P38MAPK/ATF4和HIF-1α的表达情况。sAT可梯度依赖性的抑制P38 MAPK磷酸化和ATF4表达。OGD/R通过促进P38MAPK磷酸化和ATF4表达,抑制Apelin 13表达,而sAT可以逆转这些作用。sAT能够促进HIF-1α表达,而siHIF-1α使sAT的促Apelin13表达能力降低,同时对细胞的保护作用明显降低（P<0.01）。上述结果表明sAT通过促进HIF-1α表达和抑制P38 MAPK/ATF4活化上调脑细胞中Apelin 13表达。5.sAT中活性单体成分筛选。通过RT-PCR实验共筛选出12个皂苷单体对Apln基因表达具有明显的促进作用,其中6个皂苷单体（10号、14号、15号、19号、20号和21号单体）对HRE转录活性具有明显影响。Western blotting和siRNA干扰实验进一步证实这6个单体对HIF-1α蛋白表达均具有促进作用,siHIF-1α使它们显着降低对细胞的保护作用。5个皂苷单体（10号、11号、14号、19号和21号）对C/EBP转录活性具有调控作用。采用抑制剂和激活剂验证发现,10、14和19号皂苷单体是通过P38 MAPK/ATF4调控Apelin 13表达发挥细胞保护作用的。10号单体为楤木皂苷A,14号单体为去葡萄糖竹节参皂苷IVa,19号单体为竹节参皂苷IVa,这三个单体可同时影响P38 MAPK/ATF4和HIF-1α信号通路,促进Apelin 13表达。15号单体为竹节参皂苷Ib,20号单体为刺嫩芽皂苷F,21号单体为拟人参皂苷RT1可通过影响HIF-1α信号通路,促进Apelin 13表达。11号单体为楤木皂苷D和21号单体为拟人参皂苷RT1虽然对P38 MAPK/ATF4没有影响,但对C/EBPβ转录活性和Apelin13表达均有显着影响,推测其可能通过其他途径或者直接影响C/EBPβ转录活性。结论:本研究首次系统研究了sAT对CI/RI的保护作用,并借助网络药理学技术和分子生物学技术阐明了sAT发挥脑保护作用可能的分子机制,以此为基础,筛选了sAT中的皂苷单体成分,发现不同皂苷单体分别通过影响P38 MAPK/ATF4和HIF-1α信号通路共同促进Apelin 13表达,调控AMPK/Akt/SIRT1信号通路,抑制氧化应激和线粒体功能障碍,发挥脑保护作用。本研究揭示了sAT脑保护作用的药效物质基础和分子作用机制,为太白楤木的开发和应用提供理论和实验依据。
刘岩松[9]（2020）在《基于SIRT1信号通路探讨舒心生脉丹对MI/RI模型大鼠的保护作用和机制》文中指出目的:院内制剂舒心生脉丹,是三十多年临床经验总结得出的经验方,在治疗冠心病为代表的心血管疾病方面疗效确切。为进一步探讨其作用机制,本课题通过病理学、分子生物学等分析方法,探索其对心肌细胞的保护机制,探讨其与细胞凋亡相关性,运用实验数据评价舒心生脉丹的疗效,为舒心生脉丹新药研发提供数据支持,为中医治疗心血管疾病的临床药物应用以及疾病治疗提供有价值的理论依据。方法:1.将70只健康SPF级SD雌性大鼠随机分成7组:空白组、假手术组、阳性对照组（复方丹参滴丸）、模型组、舒心生脉丹低剂量组、舒心生脉丹中剂量组、舒心生脉丹高剂量组。2.中药预处理:适应性饲养5天后,分组给药。给药剂量:根据动物与人之间药物等效剂量换算系数表计算,舒心生脉丹中剂量组为健康成年人1日用量,舒心生脉丹高剂量组与舒心生脉丹低剂量组分别为2倍剂量与0.5倍剂量,对照组复方丹参滴丸按照健康成年人1日用量给药。预给药7天,每日给药1次,空白组、假手术组、模型组给予蒸馏水。7天后禁食进行造模,空白组不做处理,假手术组只进行穿线,不予结扎。其余各组行左冠状动脉前降支结扎30min,再灌注120min,制备心肌缺血再灌注损伤大鼠模型。造模成功取心脏组织。3.监测并记录缺血/再灌注过程中心电图、血流动力学的改变,分析舒心生脉丹对MI/RI模型大鼠心功能的影响。4.通过HE染色和透射电镜观察MI/RI大鼠心肌组织及超微结构,分析舒心生脉丹对MI/RI模型大鼠心肌组织及超微结构的干预效果。5.分别采用qRT-PCR法、Western blot法、IHC法检测中药舒心生脉丹对SIRT1信号通路相关因子SIRT1、p53、ac-p53、Bax、Bcl-2、Capase-3、Capase-9的mRNA及蛋白的表达量影响。分析舒心生脉丹对MI/RI大鼠心肌组织SIRT1/p53信号通路上相关因子的调控。结果:1.心电图:各组大鼠在造模成功后心电图均有明显ST段改变,肢体导联出现ST段抬高,并有出现T波倒置改变;再灌注30min后各组大鼠心电图提示ST段不同程度回落改变,提示MI/RI大鼠造模成功。2.血流动力学:与模型组相比,舒心生脉丹各剂量治疗组及阳性对照组大鼠血流动力学指标均有不同程度的改善,舒心生脉丹组改善更为明显。3.HE染色:MI/RI模型组大鼠心肌组织结构欠完整,形态排列紊乱,细胞间质水肿明显,细胞核出现固缩。与模型组相比,中药舒心生脉丹各治疗组结构相对完整,形态排列较规则,层次较清晰,细胞间质水肿程度较模型组减轻,细胞核固缩减少。其中舒心生脉丹高剂量组改善最明显。4.电镜观察:模型组肌纤维排列不整齐,线粒体肿胀,排列呈不规则形态,部分线粒体嵴不完整,出现空泡。中药舒心生脉丹各剂量治疗组及阳性药组线粒体可见轻度肿胀变形,多数结构完整,肌纤维排列大致整齐,程度较模型组减轻。5.qRT-PCR法检测MI/RI大鼠心肌组织中SIRT1、Bcl-2、Bax、Caspase-9的基因表达量:与模型组相比,舒心生脉丹能上调SIRT1、Bcl-2的基因表达量,差异具有统计学意义（P<0.05）,降低Bax、Caspase-9基因表达量,差异具有统计学意义（P<0.05）。Western blot法检测MI/RI大鼠心肌组织中SIRT1、Caspase-9、p53、ac-p53的蛋白表达量:与模型组相比,舒心生脉丹能够上调MI/RI模型大鼠心肌细胞中SIRT1的蛋白表达量,差异具有统计学意义（P<0.05）,下调Caspase-9、p53、ac-p53的蛋白表达量,差异具有统计学意义（P<0.05）。IHC检测提示舒心生脉丹能够上调SIRT1的蛋白表达,降低p53、Caspase-3、Caspase-9的蛋白表达。结论:1.舒心生脉丹对能改善大鼠MI/RI后的心功能和心肌超微结构,对心肌细胞具有保护作用。2.舒心生脉丹能调控MI/RI模型大鼠心肌细胞中SIRT1、p53、ac-p53、Bax、Bcl-2、Capase-3、Capase-9的mRNA及蛋白的表达量,减少细胞凋亡的发生,其保护作用与细胞凋亡机制相关。
王晓[10]（2020）在《黄连总生物碱与三七总皂苷组合物对糖尿病合并冠心病药效作用及作用机制研究》文中研究说明目的:明确黄连总生物碱与三七总皂苷组合应用治疗糖尿病合并冠心病的配伍比例及对糖尿病合并冠心病的治疗效果,初步探讨其作用机制。方法:（1）以黄连总生物碱、三七总皂苷为研究对象,根据均匀设计方案选用U6（62）表分组设计,以小鼠血糖、血浆凝血酶原时间（prothrombin time,PT）、活化部分凝血酶原时间（active partial thromboplastin time,APTT）为筛选指标,回归分析获得最佳剂量配比。（2）利用高糖高脂饲料结合链脲佐菌素注射建立糖尿病心肌损伤小鼠模型,以针对糖尿病心肌损伤的预防与治疗两种给药方案进行研究。将预防给药小鼠随机分为对照组、模型组、二甲双胍组、血塞通组与HS组合物组（黄连总生物碱与三七总皂苷组合物）。观察小鼠血糖、糖耐量、血脂、CK、IL-6、TNF-α水平;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡情况,HE染色观察胰腺与心肌组织病理变化,免疫组织化学染色检测心肌组织NF-κB、Bax、Bcl-2与Caspase-3蛋白表达情况;将治疗给药小鼠随机分为对照组、模型组、二甲双胍组、血塞通组与HS组合物组。观察小鼠血糖、糖耐量、血脂、IL-6、TNF-α水平;HE染色观察胰腺与心肌组织病理变化;（3）选用Wistar大鼠,以链脲佐菌素注射结合冠脉结扎制备糖尿病心肌缺血再灌注损伤模型。将大鼠随机分为对照组、模型组、二甲双胍组、HS组合物组,检测大鼠血清胰岛素、血糖、糖耐量、SOD、MDA水平;HE染色观察大鼠胰腺与心肌组织病理变化,Western Blot检测大鼠心肌组织蛋白表达水平。结果:（1）HS组合物的最佳配伍比例为黄连总生物碱625mg·kg-1+三七总皂苷60mg·kg-1,该配伍比例下的HS组合物降糖作用与抗凝血作用达到最佳;（2）HS组合物组预防给药能明显降低糖尿病小鼠血糖;给药后小鼠血脂、CK、IL-6及TNF-α水平均明显降低;心肌组织中NF-κB、Bax与Caspase-3表达降低（P<0.01,P<0.05,P<0.05）,Bcl-2表达升高（P<0.05）。HS组合物组小鼠心肌细胞凋亡指数降低（P<0.05）,胰腺与心肌组织损伤均轻于模型组;HS组合物治疗给药能明显降低糖尿病小鼠血糖;给药后小鼠血脂、IL-6及TNF-α水平均明显降低,小鼠胰腺与心肌组织损伤均轻于模型组;（3）HS组合物能降低糖尿病心肌缺血再灌注损伤大鼠血糖,提高胰岛素水平（P<0.001）,改善大鼠口服糖耐量与氧化应激,降低大鼠心肌NOX2、NOX4、NLRP3、Bax与Caspase-3蛋白的表达,上调Bcl-2蛋白的表达。减轻大鼠胰腺组织与心肌组织损伤。结论:黄连总生物碱与三七总皂苷组合物能通过降低血糖、提高胰岛素水平,下调NOX2、NOX4以及NLRP3蛋白的表达,抑制心肌氧化应激与炎症反应,从而改善心肌细胞凋亡,减轻糖尿病合并冠心病引起的心肌损伤。
二、烟酰胺对实验性心肌损伤的保护作用(英文)（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、烟酰胺对实验性心肌损伤的保护作用(英文)（论文提纲范文）
（1）基于线粒体动力学探讨猝死肉鸡心肌细胞损伤机制的研究（论文提纲范文）
| 英语缩略词表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1 肉鸡产业现状 |
| 2 肉鸡猝死综合征 |
| 3 线粒体的功能 |
| 3.1 线粒体的融合与分裂 |
| 3.2 线粒体损伤引起细胞凋亡与自噬 |
| 4 线粒体动力学平衡对心脏结构与功能具有重要作用 |
| 5 研究目的与意义 |
| 第二章 不同浓度乳酸对鸡胚原代心肌细胞损伤作用 |
| 1 试验材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 鸡胚原代心肌细胞分离培养及鉴定 |
| 2.2 不同浓度乳酸对鸡胚原代心肌细胞存活率的影响 |
| 2.3 不同浓度乳酸对心肌细胞收缩频率的影响 |
| 2.4 不同浓度乳酸对心肌细胞凋亡的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 不同浓度乳酸对心肌细胞线粒体结构与功能的影响 |
| 1 试验材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 不同浓度乳酸对心肌细胞内线粒体形态及数量的影响 |
| 2.2 不同浓度乳酸对心肌细胞线粒体膜电位的影响 |
| 2.3 不同浓度乳酸对心肌细胞线粒体分裂融合相关蛋白表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四章 Mdivi-1对乳酸处理后心肌细胞损伤的保护作用 |
| 1 试验材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 Mdivi-1对乳酸处理后心肌细胞形态及存活率的影响 |
| 2.2 Mdivi-1对乳酸处理后心肌细胞线粒体网络结构的影响 |
| 2.3 Mdivi-1 对乳酸处理后心肌细胞中cleaved Caspase-3 表达量的影响 |
| 2.4 Mdivi-1 对乳酸处理后心肌细胞ROS水平的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第五章 肉鸡猝死综合征体内模型的建立 |
| 1 试验材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 NH_4CL对肉鸡体内血液pH、血清HCO_3~-和PCO_2 的影响 |
| 2.2 猝死模型的临床症状 |
| 2.3 猝死模型剖检病变 |
| 2.4 猝死肉鸡心脏病理组织学观察 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
（2）西北主要中药材对泌乳牦牛和犊牛营养及生理代谢的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略表 |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 牦牛产业发展现状 |
| 1.2 中药饲料添加剂应用的需求背景 |
| 1.2.1 中药饲料添加剂发展现状 |
| 1.2.2 当归饲料添加剂研究进展 |
| 1.2.3 党参饲料添加剂研究进展 |
| 1.2.4 甘草饲料添加剂研究进展 |
| 1.2.5 黄芪饲料添加剂研究进展 |
| 1.3 母牦牛的管理 |
| 1.4 犊牦牛的管理 |
| 第二章 研究目的、意义和技术路线 |
| 2.1 研究目的 |
| 2.2 研究意义 |
| 2.3 技术路线 |
| 第三章 黄芪当归粉对泌乳牦牛血液生理生化指标和乳品质的影响 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验时间与地点 |
| 3.1.2 实验设计 |
| 3.1.3 实验饲粮及中药 |
| 3.1.4 样品采集 |
| 3.1.5 样品检测 |
| 3.1.6 数据统计分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 血清生化指标 |
| 3.2.2 血清免疫指标 |
| 3.2.3 血清生长激素和抗氧化指标 |
| 3.2.4 乳营养成分和免疫指标 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 黄芪当归粉对泌乳牦牛血清生化指标的影响 |
| 3.3.2 黄芪当归粉对泌乳牦牛血清免疫指标的影响 |
| 3.3.3 黄芪当归粉对泌乳牦牛血清生长激素和抗氧化指标的影响 |
| 3.3.4 黄芪当归粉对泌乳牦牛乳成分和乳免疫指标的影响 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 中药(当归、党参、甘草、黄芪)浸提液饲喂早期断奶牦牛犊研究 |
| 4.1 实验一对生长性能的影响 |
| 4.1.1 材料和方法 |
| 4.1.2 结果 |
| 4.1.3 讨论 |
| 4.1.4 小结(包括成本核算) |
| 4.2 实验二对犊牛瘤胃发酵和微生物组成的影响 |
| 4.2.1 材料和方法 |
| 4.2.2 结果 |
| 4.2.3 讨论 |
| 4.2.4 小结 |
| 4.3 实验三对犊牛血液生理生化指标的影响 |
| 4.3.1 材料与方法 |
| 4.3.2 结果 |
| 4.3.3 讨论 |
| 4.3.4 小结 |
| 4.4 实验四犊牛血清代谢组学研究 |
| 4.4.1 材料和方法 |
| 4.4.2 结果 |
| 4.4.3 讨论 |
| 4.4.4 小结 |
| 第五章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 在读期间研究成果 |
| 致谢 |
| 附录 瘤胃液及肠道内容物 VFA 测定方法 |
（3）烟酰胺腺嘌呤二核苷酸对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠视神经及视网膜保护作用的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 第一部分 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸对实验性自身免疫性脑脊髓炎介导的视神经炎保护作用的效果分析和病理学研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸能够通过减轻免疫炎症反应及细胞凋亡对实验性自身免疫性脑脊髓炎介导的视神经炎起保护作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸可能通过 SIRT1/AKT 通路发挥对实验性自身免疫性脑脊髓炎介导的视神经炎的保护作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 SIRT1 对神经疾病作用的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）下调SOD1表达对心肌细胞功能的调控机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 炎症、氧化应激与OSA |
| 1.2 OSA相关心血管疾病及机制 |
| 1.2.1 OSA与高血压 |
| 1.2.2 OSA与心律失常 |
| 1.2.3 OSA与动脉粥样硬化和冠心病 |
| 1.2.4 OSA与心力衰竭 |
| 1.3 SOD1在OSA相关研究 |
| 1.4 SOD1 的功能 |
| 1.5 本研究的意义 |
| 第二章 实验材料和方法 |
| 2.1 细胞系 |
| 2.2 主要仪器和设备 |
| 2.2.1 shRNA载体构建使用仪器 |
| 2.2.2 shRNA载体构建主要试剂 |
| 2.2.3 样品制备使用仪器和试剂耗材 |
| 2.2.4RNA提取使用仪器和试剂耗材 |
| 2.2.5 RT-qPCR使用仪器和试剂耗材 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 shRNA载体的构建 |
| 2.3.2 细菌培养和转染 |
| 2.3.3 总RNA提取 |
| 2.3.4 测序数据分析 |
| 2.3.5 cDNA文库的构建和高通量测序分析 |
| 2.3.6 差异表达基因的筛选及功能注释 |
| 2.3.7 荧光定量PCR(RT-qPCR)验证 |
| 第三章 实验结果及分析 |
| 3.1 shRNA沉默SOD1 检测 |
| 3.2 转录组测序统计分析及序列比对 |
| 3.3 分析SOD1 相关差异表达基因 |
| 3.4 SOD1 相关DEG的 GO和 KEGG分析 |
| 3.4.1 GO功能显着性富集分析 |
| 3.4.2 KEGG功能显着性富集分析 |
| 3.5 差异表达基因的qRT-PCR验证结果分析 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论与展望 |
| 5.1 主要结论 |
| 5.2 不足与展望 |
| 英文缩略词表 |
| 参考文献 |
| 在学期间研究成果 |
| 致谢 |
| 综述 SOD1在缺血缺氧相关疾病中的应用进展 |
| 参考文献 |
（5）藏药三味檀香散对高原低氧性肺动脉高压大鼠右心功能的影响及其机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 主要符号对照表 |
| 第1章 引言 |
| 1.1 肺动脉高压的研究 |
| 1.2 高原性肺动脉高压(HAPH)的简介 |
| 1.3 肺动脉高压对右心室（RV）功能及右心-肺动脉耦合（RV-PA耦合）的影响 |
| 1.4 RhoA/Rho激酶在心血管系统中的作用 |
| 1.4.1 Rho激酶在心血管系统中的生理和病理作用 |
| 1.4.2 Rho激酶与心肌肥厚和右心衰竭 |
| 1.4.3 以Rho激酶为靶点的治疗 |
| 1.5 三味檀香散的研究概况 |
| (1)广枣的成分及药理研究 |
| (2)肉豆蔻的成分及药理研究 |
| (3)檀香的成分及药理研究 |
| 1.6 分子对接在传统中藏药成分分析中的应用 |
| 1.7 科学问题及研究内容 |
| 第2章 三味檀香散对HPH大鼠右心功能的影响 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 实验药材及鉴定 |
| 2.2.3 主要试剂 |
| 2.2.4 主要仪器 |
| 2.2.5 主要试剂配制 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 实验分组 |
| 2.3.2 大鼠超声心动图检测 |
| 2.3.3 组织取材及固定 |
| 2.3.4 石蜡包埋与切片 |
| 2.3.5 切片脱蜡 |
| 2.3.6 苏木素-伊红(HE)染色病理形态学观察 |
| 2.3.7 HPH大鼠右心室透射电镜观察 |
| 2.3.8 HPH大鼠右心室Masson三色染色操作步骤 |
| 2.3.9 HPH大鼠右心室TUNEL染色操作步骤 |
| 2.3.10 HPH大鼠右心室免疫组化染色步骤 |
| 2.4 统计学处理 |
| 2.5 实验结果 |
| 2.5.1 三味檀香散挥发油成分鉴定 |
| 2.5.2 三味檀香散对HPH大鼠右心功能的影响 |
| 2.5.3 三味檀香散对HPH大鼠肺动脉-右心耦合的影响 |
| 2.5.4 三味檀香散对HPH大鼠RV形态学影响 |
| 2.5.5 三味檀香散对HPH大鼠右心室组织纤维化的影响 |
| 2.5.6 三味檀香散对HPH大鼠右心室组织中1 型胶原的影响 |
| 2.5.7 三味檀香散对HPH大鼠右心室组织中心肌细胞凋亡的影响 |
| 2.6 讨论 |
| 第3章 三味檀香散对HPH大鼠生理学指标的影响 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 实验药材及鉴定 |
| 3.2.3 主要仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 实验分组 |
| 3.3.2 血流动力学及平均肺动脉压测定 |
| 3.3.3 大鼠血液样本的采集和血常规检测 |
| 3.3.4 组织取材与固定 |
| 3.4 统计学处理 |
| 3.5 实验结果 |
| 3.5.1 三味檀香散对HPH大鼠各脏器指标的影响 |
| 3.5.2 三味檀香散对HPH大鼠生理学指标的影响 |
| 3.5.3 三味檀香散对HPH大鼠血液学指标的影响 |
| 3.6 讨论 |
| 第4章 三味檀香散保护HPH大鼠右心功能的机制研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.3 材料与方法 |
| 4.3.1 实验动物 |
| 4.3.2 实验药材及鉴定 |
| 4.3.3 主要试剂 |
| 4.3.4 主要仪器 |
| 4.4 实验方法 |
| 4.4.1 HPH大鼠RV组织中SOD、MDA、GSH、GSH-PX因子测定 |
| 4.4.2 HPH大鼠右心组织中总RNA提取 |
| 4.4.3 cDNA链合成 |
| 4.4.4 荧光定量PCR反应 |
| 4.4.5 SD大鼠右心组织总蛋白提取 |
| 4.4.6 BCA蛋白定量 |
| 4.4.7 Western Blotting实验 |
| 4.5 统计学处理 |
| 4.6 实验结果 |
| 4.6.1 三味檀香散对HPH大鼠右心室氧化应激的影响 |
| 4.6.2 三味檀香散对HPH大鼠右心室凋亡相关因子的影响 |
| 4.6.3 三味檀香散对HPH大鼠右心室ROCK通路的影响 |
| 4.7 讨论 |
| 第5章 三味檀香散保护HPH大鼠右心功能的物质基础研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.3 材料与方法 |
| 5.3.1 结构准备 |
| 5.3.2 分子对接操作步骤 |
| 5.4 统计学处理 |
| 5.5 实验结果 |
| 5.6 讨论 |
| 参考文献 |
| 第6章 全文总结 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
| 综述 超声心动图对肺动脉高压右心功能的评价指标 |
| 参考文献 |
（6）健脾益气法复方对高糖诱导的H9c2细胞炎症的干预作用及其机制的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 健脾益气方对体外高糖诱导的H9c2心肌细胞炎症改变的抑制作用 |
| 技术路线 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 小结 |
| 第二部分 健脾益气方抑制高糖诱导的H9c2心肌细胞炎性改变作用的机制研究 |
| 技术路线 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 糖尿病心肌病的中医药研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（7）心不藏神不寐的理论及实验研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 心不藏神不寐理论研究 |
| 1 心、神及其之间的关系 |
| 1.1 心的含义 |
| 1.2 神的含义 |
| 1.3 心与神的关系 |
| 2 心藏神对寐寤的调节 |
| 2.1 寐寤属于中医神志活动 |
| 2.2 心神对寐寤的调节作用 |
| 3 依据单一症状病位诊断的心不藏神型不寐研究 |
| 3.1 心不藏神不寐的病因病机 |
| 3.2 心不藏神不寐的治则 |
| 3.3 心不藏神不寐的辨治 |
| 3.4 治疗心不藏神不寐的安心神归经药物 |
| 4 小结 |
| 第二部分 心不藏神不寐大鼠模型建立与评价 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品 |
| 1.3 仪器与试剂 |
| 1.4 不寐大鼠模型的建立 |
| 1.5 观察指标 |
| 1.6 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分安心神归经药黄连单体治疗心不藏神不寐的转录组学研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品 |
| 1.3 仪器与试剂 |
| 1.4 模型复制及治疗 |
| 1.5 观察指标 |
| 1.6 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 研究创新 |
| 研究不足 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 黄连类方治疗心不藏神不寐研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间获得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 导师评阅表 |
（8）太白楤木总皂苷及其单体成分对脑卒中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 太白楤木简介 |
| 1.1.1 太白楤木分布情况 |
| 1.1.2 太白楤木的主要化学成分 |
| 1.1.3 太白楤木皂苷的药理学作用 |
| 1.2 脑卒中的发病机制和治疗现状 |
| 1.2.1 脑卒中的发病机制 |
| 1.2.2 氧化应激、线粒体功能障碍和CI/RI |
| 1.2.3 缺血性脑卒中的治疗手段 |
| 1.3 中药皂苷对缺血性脑卒中的治疗作用 |
| 1.3.1 抑制炎症反应 |
| 1.3.2 抑制氧化应激 |
| 1.3.3 改善能量代谢 |
| 1.3.4 抑制细胞凋亡 |
| 1.3.5 改善脑血管循环 |
| 1.3.6 抑制兴奋性氨基酸损伤 |
| 1.4 Apelin13 在缺血性脑卒中治疗中的重要作用 |
| 1.4.1 Apln基因简介 |
| 1.4.2 Apelin13 具有明确的脑保护作用 |
| 1.4.3 Apelin和缺血再灌注损伤 |
| 1.5 展望 |
| 第二章 sAT的脑保护作用研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 实验试剂 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 sAT的提取和纯化 |
| 2.3.2 总皂苷含量测定 |
| 2.3.3 动物实验 |
| 2.3.4 细胞实验 |
| 2.3.5 蛋白免疫印迹(Western blotting) |
| 2.3.6 统计分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 sAT减轻MCAO/R引起的脑损伤 |
| 2.4.2 sAT减轻MCAO/R引起的脑组织凋亡 |
| 2.4.3 sAT抑制脑组织内氧化应激水平 |
| 2.4.4 sAT减轻OGD/R引起的细胞损伤 |
| 2.4.5 sAT抑制OGD/R引起的细胞凋亡 |
| 2.4.6 sAT抑制OGD/R引起的氧化应激水平 |
| 2.4.7 sAT保护线粒体的功能 |
| 2.5 讨论和小结 |
| 第三章 网络药理学技术筛选sAT的潜在作用靶点 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 太白楤木皂苷单体成分及靶点信息收集 |
| 3.3.2 脑卒中靶点 |
| 3.3.3 交集靶点 |
| 3.3.4 共同靶点网络构建 |
| 3.3.5 靶点通路注释分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 太白楤木皂苷靶点预测结果 |
| 3.4.2 脑卒中相关靶点收集 |
| 3.4.3 共同靶点 |
| 3.4.4 共同靶点PPI网络构建 |
| 3.4.5 基因功能富集分析 |
| 3.4.6 通路富集分析结果 |
| 3.5 讨论和小结 |
| 第四章 sAT通过调控AMPK/Akt信号通路发挥脑保护作用 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 实验试剂 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 细胞培养 |
| 4.3.2 细胞转染 |
| 4.3.3 抑制剂的使用 |
| 4.3.4 免疫沉淀技术 |
| 4.3.5 Western blotting检测蛋白表达 |
| 4.3.6 线粒体膜电位测定 |
| 4.3.7 ATP含量测定 |
| 4.3.8 细胞存活率测定 |
| 4.3.9 细胞凋亡率测定 |
| 4.3.10 统计分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 sAT对 AMPK和 Akt的激活作用 |
| 4.4.2 sAT对 SIRT1/FOXO3/PGC-1 信号通路的激活作用 |
| 4.4.3 sAT通过Akt调控SIRT1 信号通路 |
| 4.4.4 sAT对 AMPK和 Akt的交互调节作用 |
| 4.5 讨论和小结 |
| 第五章 sAT通过P38 MAPK/ATF4和HIF-1α调控Apelin 13/AMPK/Akt信号通路 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.2.1 实验试剂 |
| 5.2.2 实验仪器 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 侧脑室注射给药 |
| 5.3.2 sAT处理 |
| 5.3.3 MCAO/R模型 |
| 5.3.4 TTC染色 |
| 5.3.5 神经功能学评分 |
| 5.3.6 脑组织含水量 |
| 5.3.7 S-100β和NSE含量测定 |
| 5.3.8 Western blotting测定蛋白表达 |
| 5.3.9 RT-PCR测定Apln和 Aplnr mRNA表达 |
| 5.3.10 抑制剂和激活剂使用方法 |
| 5.3.11 细胞转染 |
| 5.3.12 细胞凋亡率测定 |
| 5.3.13 ROS含量 |
| 5.3.14 细胞存活率 |
| 5.3.15 线粒体膜电位 |
| 5.3.16 统计分析 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.4.1 sAT促进Aplein13 蛋白和基因的表达 |
| 5.4.2 Apelin13对MCAO/R引起的脑损伤具有保护作用 |
| 5.4.3 sAT通过Apelin13调控AMPK/Akt信号通路 |
| 5.4.4 sAT对 P38 MAPK和 ATF4 表达的影响 |
| 5.4.5 sAT通过抑制P38 MAPK/ATF4 促进Apelin13 表达 |
| 5.4.6 sAT对 HIF-1α表达的影响 |
| 5.4.7 sAT通过上调HIF-1α促进Apelin13 表达 |
| 5.5 讨论和小结 |
| 第六章 筛选太白楤木皂苷的主要活性成分并进行验证 |
| 6.1 前言 |
| 6.2 实验材料 |
| 6.2.1 化合物 |
| 6.2.2 实验试剂 |
| 6.2.3 实验仪器 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 细胞OGD/R模型 |
| 6.3.2 RT-PCR测定单体对Apln表达的影响 |
| 6.3.3 细胞转染 |
| 6.3.4 荧光素酶报告基因检测 |
| 6.3.5 Western blotting |
| 6.3.6 统计分析 |
| 6.4 实验结果 |
| 6.4.1 不同皂苷单体对Apln基因表达的影响 |
| 6.4.2 不同皂苷单体对HRE的调控作用 |
| 6.4.3 不同皂苷单体对C/EBPβ的调控作用 |
| 6.4.4 皂苷单体分别对HIF-1α的调控作用验证 |
| 6.4.5 皂苷单体分别对P38 MAPK/ATF4 的调控作用验证 |
| 6.5 讨论和小结 |
| 总结与展望 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 攻读博士/硕士学位期间取得的科研成果 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（9）基于SIRT1信号通路探讨舒心生脉丹对MI/RI模型大鼠的保护作用和机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 综述一中西医对心肌缺血再灌注损伤的认识及研究进展 |
| 1 西医对心肌缺血再灌注损伤的研究进展 |
| 1.1 心肌缺血再灌注损伤的概念及常见损伤 |
| 1.2 心肌缺血再灌注损伤的发病机制 |
| 1.3 西医对心肌缺血再灌注损伤的治疗 |
| 2 中医对心肌缺血再灌注损伤的研究进展 |
| 2.1 病名源流 |
| 2.2 病因病机 |
| 2.3 辨证分型 |
| 2.4 中医药治疗研究进展 |
| 综述二SIRT1 信号通路在心血管疾病中的研究进展 |
| 实验研究 |
| 第一章 MI/RI大鼠模型的建立及心功能指标测定 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验用药 |
| 1.3 实验主要试剂、器械、仪器与耗材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组与给药 |
| 2.2 MI/RI大鼠模型建立 |
| 2.3 指标检测 |
| 2.4 统计学处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 MI/RI大鼠心电图改变 |
| 3.2 MI/RI大鼠血流动力学改变 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 舒心生脉丹对MI/RI模型大鼠心肌组织形态学的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 主要实验试剂 |
| 1.2 主要实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 石蜡病理切片的制备 |
| 2.2 HE染色法 |
| 2.3 透射电镜检测 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 HE染色实验结果 |
| 3.2 透射电镜实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 舒心生脉丹对MI/RI模型大鼠心肌组织SIRT1 信号通路的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验用药 |
| 1.3 实验试剂 |
| 1.4 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 q RT-PCR检测法 |
| 2.2 Western blot检测法 |
| 2.3 IHC检测法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 q RT-PCR实验结果 |
| 3.2 Western blot实验结果 |
| 3.3 IHC 化结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 讨论 |
| 1 舒心生脉丹的创立和意义 |
| 2 MI/RI模型建立的关键问题 |
| 3 实验指标分析 |
| 3.1 舒心生脉丹对心电图影响 |
| 3.2 舒心生脉丹对血流动力学的影响 |
| 3.3 舒心生脉丹对心肌组织形态学影响 |
| 3.4 对SIRT1 信号通路的影响 |
| 4.实验总结 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
（10）黄连总生物碱与三七总皂苷组合物对糖尿病合并冠心病药效作用及作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 1 现代药理学对糖尿病合并冠心病机制的研究 |
| 1.1 胰岛素抵抗 |
| 1.2 脂代谢异常 |
| 1.3 炎症反应 |
| 1.4 氧化应激 |
| 1.5 肠道菌群 |
| 2 传统医学对糖尿病合并冠心病病机的认识 |
| 2.1 古代中医理论对糖尿病合并冠心病的认识 |
| 2.2 现代中医理论对糖尿病合并冠心病病机的认识 |
| 3 糖尿病合并冠心病的治疗 |
| 3.1 改善生活方式 |
| 3.2 药物治疗 |
| 3.3 血运重建 |
| 3.4 中医药治疗 |
| 4 展望 |
| 实验研究 |
| 第一章 基于均匀设计的黄连总生物碱与三七总皂苷组合物配伍比例筛选 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 动物与饲养 |
| 1.2 药品与试剂 |
| 1.3 仪器设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 均匀设计方案 |
| 2.2 均匀设计法筛选降糖作用最佳剂量 |
| 2.3 均匀设计法筛选抗凝血作用最佳剂量 |
| 2.4 统计学方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 HS组合物各配比对血糖的影响 |
| 3.2 HS组合物各配比对凝血时间的影响 |
| 3.3 配伍比例筛选分析结果 |
| 4 小结 |
| 第二章 黄连总生物碱与三七总皂苷组合物对小鼠糖尿病心肌损伤的影响 |
| 1 黄连总生物碱与三七总皂苷组合物预防给药对小鼠糖尿病心肌损伤的影响 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 实验结果 |
| 2 黄连总生物碱与三七总皂苷组合物治疗给药对小鼠糖尿病心肌损伤的影响 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 3 小结 |
| 第三章 黄连总生物碱与三七总皂苷组合物对大鼠糖尿病心肌缺血再灌注损伤的影响 |
| 1 试验材料 |
| 1.1 动物与饲养 |
| 1.2 药品与试剂 |
| 1.3 仪器设备 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 造模与给药 |
| 2.2 血糖检测 |
| 2.3 口服糖耐量试验 |
| 2.4 血清胰岛素含量检测 |
| 2.5 血清氧化应激指标检测 |
| 2.6 胰腺、心肌组织病理变化的观察 |
| 2.7 蛋白表达检测 |
| 3 试验结果 |
| 3.1 心肌缺血再灌注过程大鼠心电图变化 |
| 3.2 HS组合物对大鼠血糖值的影响 |
| 3.3 HS组合物对大鼠口服糖耐量的影响 |
| 3.4 HS组合物对大鼠血清胰岛素水平的影响 |
| 3.5 HS组合物对大鼠氧化应激的影响 |
| 3.6 HS组合物对大鼠组织形态学的影响 |
| 3.7 HS组合物对大鼠蛋白表达的影响 |
| 4 小结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
四、烟酰胺对实验性心肌损伤的保护作用(英文)（论文参考文献）
- [1]基于线粒体动力学探讨猝死肉鸡心肌细胞损伤机制的研究[D]. 崔云丽. 河南科技学院, 2021
- [2]西北主要中药材对泌乳牦牛和犊牛营养及生理代谢的影响[D]. 姜翠霞. 兰州大学, 2021(09)
- [3]烟酰胺腺嘌呤二核苷酸对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠视神经及视网膜保护作用的机制研究[D]. 郭江渊. 河北医科大学, 2021(02)
- [4]下调SOD1表达对心肌细胞功能的调控机制研究[D]. 董娜. 兰州大学, 2021(12)
- [5]藏药三味檀香散对高原低氧性肺动脉高压大鼠右心功能的影响及其机制研究[D]. 杨占婷. 青海大学, 2021(01)
- [6]健脾益气法复方对高糖诱导的H9c2细胞炎症的干预作用及其机制的实验研究[D]. 陈晨. 辽宁中医药大学, 2020(02)
- [7]心不藏神不寐的理论及实验研究[D]. 王庆全. 新疆医科大学, 2020(02)
- [8]太白楤木总皂苷及其单体成分对脑卒中的作用及机制研究[D]. 段佳林. 西北大学, 2020(01)
- [9]基于SIRT1信号通路探讨舒心生脉丹对MI/RI模型大鼠的保护作用和机制[D]. 刘岩松. 长春中医药大学, 2020(08)
- [10]黄连总生物碱与三七总皂苷组合物对糖尿病合并冠心病药效作用及作用机制研究[D]. 王晓. 长春中医药大学, 2020(09)