一、番茄离体再生体系优化研究（论文文献综述）
赵耀东[1]（2021）在《短串联靶标模拟技术介导的miR156e在紫花苜蓿中的遗传转化》文中提出紫花苜蓿（Medicago sativa L.）具有极高的营养价值,常被用作牲畜的主要口粮,并且在自然环境的治理、预防水土流失等方面也起到十分重要的作用。干旱是限制苜蓿产量和品质的主要影响因素之一。如何进一步提高其抗旱特性,扩大其栽培面积,仍是当前苜蓿生产中亟待解决的问题。而基因工程的发展和应用为苜蓿的品种改良提供了一种新思路。micro RNA（miRNA）是一种小分子非编码RNA,研究表明miRNA广泛参与了植物对非生物胁迫的应答过程。短串联靶标模拟（Short tandem target mimic,STTM）技术可以人为沉默目标miRNA的内源表达,是目前通过抑制表达的方式研究miRNA功能的最有效手段。在前期的测序研究中我们发现mtr-miR156e通过下调表达的方式积极参与了紫花苜蓿应对干旱胁迫的过程,因此本文首先以miR156e为靶标构建了STTM沉默表达载体p BWA（V）HS-STTM-miR156e,其次以‘三得利’紫花苜蓿为研究材料建立组培再生体系,最后将STTM156e表达载体转化苜蓿建立遗传转化体系并成功得到转基因苜蓿植株,为更好地解析miR156e的抗旱功能培育紫花苜蓿的抗旱新品种奠定一些研究基础。取得如下结果:（1）构建了沉默miR156e的表达载体p BWA（V）HS-STTM-miR156e。根据mtr-miR156e的成熟序列设计出具有miR156e结合位点的STTM结构并随之设计出特异性引物,采用引物扩增法得到126 bp的STTM156e目的片段并与表达载体p BWA（V）HS成功连接,测序和酶切验证了重组载体的可用性。提取重组载体质粒转化农杆菌GV3101最终获得9个阳性单菌落,用于转化试验。（2）建立了‘三得利’紫花苜蓿的高效离体再生体系。苜蓿种子经0.1%HgCl2溶液消毒5 min后接种在1/2 MS培养基中萌发最佳,发芽率可达96.67%。下胚轴是诱导愈伤的最佳外植体,最佳愈伤诱导培养基为A8,诱导率可达97.92%。最佳分化培养基为B5,最终出芽率可达66.67%。最佳生根培养基为C4,生根率达88.33%。（3）优化了农杆菌介导STTM156e的遗传转化体系并获得转基因植株。脱菌培养添加Carb的最佳浓度为400 mg/L,且后续每继代一次浓度需减少100 mg/L。最佳选择培养方式为在分化阶段使用10 mg/L Hyg筛选阳性转化。将下胚轴浸泡在OD600=0.6-0.8的侵染菌中10 min,避光培养3 d是最佳的转化体系。最终经Hyg筛选初步获得12株再生苜蓿,PCR检测7株可扩增出215 bp的特异性条带,整体阳性转化率达58.33%。
张西英,刘江娜,张爱萍[2]（2021）在《加工番茄新番72号再生体系的建立》文中研究表明为建立一套优化的组织培养和遗传转化再生体系,以加工番茄新品种新番72号为试材,分别选取4～8 d苗龄无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,研究了不同苗龄、外植体、激素浓度配比对番茄愈伤组织诱导、不定芽分化的影响,以建立番茄再生体系,为下一步基于CRISPR-Cas9定点突变改良新疆加工番茄耐贮性奠定基础。结果表明,新番72号加工番茄再生体系建立中以苗龄6 d的子叶为最佳外植体,愈伤诱导、芽分化率及生长情况均优于下胚轴;愈伤诱导最佳培养基为MS+0.5 mg·L-1IAA+2.0 mg·L-16-BA+2.0 mg·L-1ZT,子叶的诱导率为90.5%,下胚轴的诱导率为80.8%;继代培养芽分化的最佳培养基为MS+0.2 mg·L-1IAA+1.0 mg·L-16-BA+1.0 mg·L-1ZT,子叶的芽分化率较高,可以达到85.3%。
朱雪妹,魏小红,金宝霞,张小芳,刘放[3]（2020）在《番茄材料‘851’高效离体再生体系的建立》文中研究指明以自育番茄‘851’为试材,采用植物组织培养的方法,研究了不同浸泡时间和光暗培养处理对番茄种子萌发和幼苗生长状态的影响;以MS+2.0 mg·L-1 6-BA为基础培养基研究不同IAA浓度、苗龄和外植体对愈伤和不定芽形成的影响;用不同处理的生根培养基研究不定芽对生根的影响,以期建立番茄材料‘851’高效离体再生体系。结果表明:番茄种子浸泡3 h,先暗培养3 d后光培养能够获得最佳生长状态的无菌苗且其发芽势、发芽率和发芽指数均为最高,分别为89%、93%和5.20。子叶节、下胚轴和子叶为外植体在IAA浓度为0.2、0.3、0.5 mg·L-1时最有利于愈伤组织和不定芽的形成,同时在10、14、8 d的苗龄下,不定芽诱导率分别为160%、91%和79%。最佳处理生根培养基为MS+0.5 mg·L-1 IAA,生根率为89%。
杨志晶[4]（2020）在《茄子组织培养高效再生体系初探与WRKY基因的表达分析》文中研究指明茄子（Solanum melongena L.）,属于茄科茄属,是一种重要的蔬菜作物。茄子抵御病虫害的能力较弱,黄萎病的危害尤其突出。利用转基因技术培育新品种是最有效的解决方法之一,目前转基因技术运用在茄子的研究较少。其中最难以解决的问题就是没有一个高效的遗传再生体系。同时,WRKY基因是一类植物特异的转录因子,对植物病害的响应有重要作用。因此,寻求一套完整高效的茄子再生体系以及开展与黄萎病抗性相关WRKY基因的研究工作至关重要。本研究以‘云茄6号’为材料,采用不同抗生素处理促进种子萌发,以下胚轴、子叶和带芽茎段为试材,研究在组织培养过程中不同阶段、不同激素处理的分化差异,探求建立茄子适用的遗传再生体系。同时,以20份野茄资源为材料,利用实时荧光定量PCR对WRKY1、WRKY22、WRKY33基因的相对表达量进行检测,与试供材料病情指数进行相关性分析,探讨WRKY基因的表达与黄萎病抗性之间的关系。主要研究结果如下:1.温水处理赤霉素浸种有利于提高‘云茄6号’种子萌发能力,种子发芽率为73.33%。在MS培养基中添加750μl/L硫酸链霉素、1000μl/L头孢霉素种子萌发效果较好,发芽率均为66.67%。另外,经过温水处理赤霉素浸种以及10%NaClO消毒24 min在MS培养基下有利于茄子种子的萌发。‘云茄6号’的最佳愈伤诱导培养基是MS+TDZ 3 mg/L+NAA 0.1 mg/L,愈伤诱导率为85.92%。最佳诱导芽分化的培养基是MS+IAA 0.1 mg/L+ZT 4.0 mg/L+6-BA 2.0 mg/L,出芽率为86.11%。在MS培养基中加入0.04 g/L活性炭有利于生根,活性炭对茄子生根有促进作用,产生的根系较多且粗壮。2.WRKY1和WRKY22均包含1个WRKY保守结构域,WRKY33则包含2个WRKY保守域结构、1个PPR2保守结构域和1个P-loop NTPase保守结构域。根据标准曲线和溶解曲线的结果,确定WRKY1、WRKY22和WRKY33的qRT-PCR引物各一对。试供材料均检测到WRKY1、WRKY22、WRKY33基因,不同材料的WRKY1、WRKY22、WRKY33基因的相对表达量不同且差异较大;WRKY1的基因表达量在245-4-2最高,WRKY22的基因表达量在246-3-1最高,WRKY33的基因表达量在245-1-3最高。试供材料的WRKY22基因的相对表达量与其病情指数呈显着负相关,相关系数为-0.445;而WRKY1、WRKY33基因的相对表达量则与病情指数无显着相关性,WRKY1、WRKY33的相对表达量的相关系数分别为-0.110、0.237。
单淑玲[5]（2019）在《加工番茄花药培养愈伤组织诱导和分化研究》文中研究说明为了进一步完善加工番茄花药离体培养再生体系,本试验以3个杂交组合（P1×20040805、20040805×钻石和P3×20040805）加工番茄的花药为试验材料,研究小孢子发育时期、基因型、激素种类及激素配比等因素对加工番茄花药培养再生植株的影响。初步从2种诱导培养基和13种增殖培养基中筛选出适宜花药愈伤组织诱导和增殖的培养基配方,并对加工番茄杂交组合P3×20040805花药愈伤组织及由愈伤分化产生的根,采用流式细胞仪鉴定法和根尖染色体计数法进行倍性鉴定。初步建立了加工番茄花药愈伤组织诱导到愈伤组织倍性鉴定的技术体系,并获得了较高的愈伤组织增殖率,为下一步利用花药离体培养技术进行加工番茄种质资源创新夯实基础。1.加工番茄小孢子发育时期与花器官形态密切相关。加工番茄小孢子发育时期处于单核靠边期时,杂交组合20040805×钻石和P3×20040805花蕾长度范围5.00-5.99 mm,P1×20040805花蕾长度为6.00-6.99 mm;不同杂交组合的花器官形态在相同的小孢子发育时期基本相同。单核靠边期小孢子细胞学特征,小孢子细胞呈圆形,细胞核贴近细胞壁以及细胞核出现萌发孔。花器形态为花蕾微微膨大、花萼微微张开、萼片颜色为黄绿色,花药颜色为黄绿色,花药易剥离。2.不同基因型加工番茄花药愈伤组织的诱导培养基存在差异。MS+0.5 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L KT是加工番茄杂交组合P1×20040805花药愈伤组织诱导较适培养基,其中P1×20040805的诱导率最高为13.33%;MS+1.0 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA是加工番茄杂交组合20040805×钻石和P3×20040805花药愈伤组织诱导较适培养基;MS+1.0mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA是3个基因型加工番茄花药愈伤组织增殖较适培养基,其中P3×20040805的愈伤组织增殖率达到93.33%。增殖培养基中添加低浓度的TDZ,不能促进愈伤组织细胞的增殖,但能诱导致密型瘤状愈伤组织的形成;NAA浓度为0.05mg/L时,诱导加工番茄杂交组合P3×20040805愈伤组织分化出根,生根率6.67%。在添加不同浓度IAA的MS培养基中,并未发现根的分化。3.通过根尖染色体计数鉴定法对加工番茄杂交组合P3×20040805愈伤组织分化获得的根尖进行倍性鉴定,加工番茄根尖染色体数量为24条。此外,对田间自然产生的根尖进行染色体数目镜检,同样发现染色体数目为24条。用流式细胞仪对加工番茄杂交组合P3×20040805诱导获得的愈伤组织进行倍性测定,花药愈伤组织大多数为二倍体,少数愈伤组织的部分细胞发生变异产生嵌合体。采用流式细胞仪检测到了三种类型的嵌合体推测可能为单倍体、二倍体和四倍体的嵌合体,单倍体和二倍体的嵌合体以及二倍体和四倍体的嵌合体。通过流式细胞仪和根尖染色体鉴定加工番茄杂交组合P3×20040805的花药愈伤及分化产生的根均未发现单倍体愈伤组织。
赵佳怡[6]（2019）在《苹果MdMIF2基因的克隆与功能分析》文中认为苹果（Malus domestica）是蔷薇科苹果属的多年生木本植物,因其品种多、颜色丽、香气浓、味酸甜而受到很多人的青睐。近年来,以苹果为试材的分子生物学研究也越来越广泛,其中苹果叶片离体再生和遗传转化的研究取得了较大进展。MIF2蛋白（mini zinc finger protein）是一种只含有ZF（zinc finger）结构域的小型蛋白质,前人对其在拟南芥和番茄中进行了研究。本研究首次在‘GL-3’苹果中克隆MdMIF2基因全长,分别构建MdMIF2基因的过表达及沉默载体,并利用农杆菌介导法转化苹果‘GL-3’,分别获得了MdMIF2基因过表达与沉默转基因植株,通过测定抗性芽再生率、叶片再生率及平均再生芽数,探究MdMIF2基因的功能,为苹果的高效遗传转化体系研究提供理论基础。本试验主要研究结果如下:1.从‘GL-3’苹果中克隆出MdMIF2基因编码区序列,全长273bp,编码90个氨基酸,含有一个ZF结构域。对MdMIF2基因进行了时空表达模式分析与启动子在线分析,分析了MdMIF2基因的表达特性。2.构建了苹果MdMIF2基因的过表达载体及沉默载体。利用农杆菌介导的遗传转化体系对‘GL-3’苹果进行转化。获得3个MdMIF2基因过表达株系和3个MdMIF2基因沉默株系。3.通过叶片再生试验,发现与非转基因植株相比,MdMIF2基因的过表达植株叶片再生能力明显增强,而MdMIF2基因的沉默植株叶片再生能力则明显减弱。本研究表明苹果MdMIF2基因高水平表达具有促进叶片再生的功能。
李利利[7]（2019）在《番茄高效再生体系的优化》文中研究表明番茄高效再生体系的建立是番茄基因工程育种、杂种优势固定和优异种质保存的前提和基础。本试验以中蔬四号、白果强丰、毛粉802、美国红将军、红帅909以及MicroTom六个不同番茄的子叶和下胚轴为外植体,观测了其在不同浓度的激素配比下的愈伤、不定芽和不定根的生长情况,试验结果如下:1.番茄种子的无菌处理发现,在不同的消毒时间下,使用浓度为7%的次氯酸钠消毒10 min种子发芽率最高。其中红帅909的发芽率最高为93.33%。在经过温汤浸种后各不同基因型番茄种子普遍发芽早,出苗整齐,其中红帅909种子的发芽率最高为96.00%。2.在6-BA+IAA的不同浓度处理下,不同基因型下胚轴的不定芽诱导率均高于子叶,而单独添加6-BA外植体不能有效的分化出不定芽。美国红将军和红帅909的不定芽诱导率高于中蔬四号、白果强丰、毛粉802,以及MicroTom,表明红果的不定芽诱导效果强于粉红果。3.通过观测不同基因型子叶和下胚轴在6-BA+IAA不同浓度下的不定芽诱导情况发现,红帅909在6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L激素浓度下子叶不定芽诱导率最高为88.50%,在6-BA 1.0 mg/L+IAA 1.0 mg/L激素浓度下下胚轴的不定芽诱导率最高为93.83%,高于其他番茄材料。4.红帅909在TDZ+IAA不同浓度配比下,下胚轴的不定芽诱导率最高的激素配比为TDZ 1.0 mg/L+IAA 0.2 mg/L,不定芽诱导率为75.33%,同时试验发现,子叶和下胚轴在诱导愈伤和不定芽的过程中根毛发生率接近100.00%。5.不同基因型番茄的不定芽生根的最佳激素浓度配比均为1/2MS+IAA 0.3 mg/L,根毛粗壮、生根数量多、生根效果好。综上所述,红帅909的再生效率显着高于其他5个番茄品种,初步建立起红帅909的高效再生体系,其他番茄品种的再生体系仍需进一步优化。
张根莲[8]（2019）在《辣椒抗CMV候选基因筛选与克隆及再生体系建立》文中认为黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）为雀麦花叶病毒科（Bromoviridae）黄瓜花叶病毒属（Cucumovirus）的成员,是我国辣椒生产中检出率最高、危害最严重的病毒之一。辣椒遭受CMV侵染后,常表现为叶片黄化、扭曲变形、严重花叶、皱缩矮小、系统性坏死等,严重影响辣椒产量及果实的商品性。目前,在辣椒上定位到多个抗CMV的基因和QTL,但还未见抗CMV基因克隆的报道。基于实验室前期研究基础,以C.frutescens cv.PBC688和C.annuum cv.G29为试验材料,通过qRT-PCR对定位到2号染色体上的主效QTL（qCmr2.1）区间内的25个候选基因进行了表达模式分析;进一步通过病毒诱导的基因沉默（VIGS）技术对候选基因进行功能验证,筛选出CA02g19570作为辣椒抗CMV的候选基因;利用同源克隆技术克隆出CA02g19570在抗感材料中的CDS全长序列,通过生物信息学方法分析其序列结构;此外,研究了 PBC688和G29及测序材料CM334的再生体系,为进一步通过转基因技术验证候选基因功能奠定基础。本研究的主要结果如下:1.抗病材料PBC688和易感病材料G29进行CMV人工接种后,0d、7d、14d、21d、28d取样,通过qRT-PCR技术分析主效QTL（qCmr2.1）区间内的25个候选基因的表达模式。结果表明,易感CMV材料G29在接种CMV后,未发现有表达量持续上调的基因,但是接种后与接种前相比,发现CA02g19510、CA02g19570、CA02g19580 3个基因表达量显着上调;抗病材料PBC688在接种CMV后,C402g19570的表达量持续上调,其中有17个候选基因在某一个或者某几个时间点的表达量显着上调。2.通过病毒诱导的基因沉默（VIGS）技术验证抗CMV候选基因功能。构建了25个候选基因VIGS表达载体,对抗病材料PBC688的25个候选基因进行沉默,人工接种CMV。表型鉴定结果显示分别将CA02g19570,CA02g19600和CA02g19630沉默后,接种CMV,抗病材料PBC688的部分植株出现系统花叶症状,其中CA02g19570沉默后,植株感病的数量最多,并且症状最为明显。qRT-PCR分析显示,接种过pTRV2:570载体的植株,再次接种CMV后,PBC688抗病植株的基因表达量为6.74,而感病单株的CA02g19570的表达量为0.18;接种过pTRV2:600载体的植株,再次接种CMV后,抗病植株的基因表达量为1.03,而感病植株的表达量几乎为0;接种过pTRV2:630载体的植株,接种CMV后,抗病植株的基因表达量为25.82,而感病植株的表达量为4.47。确认CA02g19570是辣椒抗CMV的qCmr2.1的候选基因。3.通过3’RACE和5’RACE技术扩增出CA02g195705’端和3’端的片段大小分别为1816bp和847bp。通过同源克隆技术,克隆出CA02g19570CDS序列为3735 bp,预测编码1244个氨基酸。该基因在抗感材料间存在8个碱基差异,蛋白序列在383、461、3473位点存在3个氨基酸差异。该基因编码的氨基酸与多种植物氨基酸序列相似性在50%～99%。其中,与一年生辣椒（Capsicum annuum）、渐狭叶烟草（Nicotiana attenuata）亲缘关系较近,同源性分别为98.55%、85.97%,与木犀榄（Olea europaea）、小粒咖啡（Coffea arabica）近缘关系较远,同源性分别为55.11%、50.06%。4.建立了辣椒全基因组测序材料CM334的再生体系。结果显示最佳诱导培养基激素配比为5.0mg/L 6-BA+1.0 mg/LIAA,最佳芽伸长培养基激素配比为0.5mg/L 6-BA+1.0 mg/L IAA+2.0mg/L GA3。
郝园园[9]（2019）在《空心菜离体再生体系的构建及不同光周期转录组分析》文中提出空心菜（Ipomoea aquatica Forsk）是旋花科番薯属一年或多年蔓生草本植物,既能水生也能陆生,极易长出不定根且具有耐高温高湿的特性。本研究以空心菜为试验材料,构建空心菜高频离体再生体系,同时对两个品种的空心菜分别进行长日照和短日照处理,随后进行转录组分析。主要研究成果如下:1.空心菜无菌苗的消毒空心菜无菌苗消毒的最佳方式为:空心菜种子经过20%的次氯酸钠溶液消毒15 min后,接种于含有0.05%PPM的MS基本培养基上,发芽率为85.58%,平均发芽时间为3.57 d。2.空心菜不定芽的诱导以15种不同基因型的空心菜为供试材料,空心菜的子叶、带柄子叶、第一节间和下胚轴为外植体,进行离体再生研究,结果表明,仅有带柄子叶和第一节间可诱导出不定芽。其中12种基因型的第一节间诱导形成不定芽,而仅有4种基因型的带柄子叶诱导产生不定芽,可见,带柄子叶无法诱导形成不定芽的基因型,其第一节间可能诱导出不定芽,第一节间的适用性较为广泛。不同基因型之间诱导率差异很大,同一种基因型的不同外植体诱导率存在很大差异。以空心菜第一节间为外植体时,最佳培养基配方为MS+1 mg/L6-BA+0.1 mg/L IAA+7g/L琼脂,诱导率为20.62%;以空心菜带柄子叶为外植体时,最佳培养基配方为:1/2MS+2mg/L TD2+30 g/L蔗糖+2.5 g/L结冷胶,诱导率为27.69%,形成不定芽的每个外植体不定芽个数为2.67个。空心菜离体再生体系中,最佳苗龄为5～7d,苗态呈现子叶刚展开,无真叶长出时,最佳的放置方式为斜插。3.空心菜生根培养和移栽在附加0.1 mg/LNAA的1/2 MS培养基上,不定根诱导效果最好,诱导率为100%,平均生根时间为3.19d,平均不定根数量为4.13条。再生苗移栽成活率为100%。4.光周期对空心菜开花时间的影响在自然条件下,日照长度低于12h31m时,’HN-WS06’空心菜陆续开花,日照长度低于12h03m时,’青骨柳叶’空心菜陆续开花;在人工调控环境下,10 h的短日照处理30 d后两种空心菜逐渐开花,16 h长日照处理,空心菜不开花。5.转录组测序在青骨柳叶短日照（GS）vs青骨柳叶长日照（GL）对比组中,共发现1467个DEGs,其中上调表达的DEGs有676个,791个基因表达下调:在’HN-WS06’短日照（WS）vs ’HN-WS06’长日照（WL）的对比组中,共发现了 984个差异表达基因,其中,476个基因表达上调,408个基因表达下调。其中两个对比组中均存在的差异有1 19个。6.差异基因富集分析在GS vs GL 比较组合中,所有的差异基因共注释到693条GO Term,主要注释到生物过程和分子功能的子类。其中只有生物过程中的3条GO Term表现出显着性。KEGG通路富集了 92条代谢通路,其中只有核糖体发生（Ribosome biogenesis in eukaryotes）和基因复制（DNA replication）两个代谢通路中有显着性。在WS vs WL 比较组合中注释了 543条GO Term,主要富集到了分子功能的子类,少量的富集到了生物过程,其中只有分子功能中的5条GO Term表现出显着性。KEGG通路共注释了 70条代谢途径,主要富集在倍半萜和三萜类化合物的合成（sly00909）、内质网中的蛋白质加工（sly04141）以及氰基氨基酸代谢（sly00460）等通路中。7.转录因子分析在GS vs GL和WS vs WL两个比较组合中,均存在的主要差异表达的转录因子有 4 个,分别为 PkinaseTyr、Pkinase、p450 以及 2OG-FEIIOxy。8.FT、HY5基因进化树ML树结果显示,与拟南芥FT/TSF基因聚在的有3个基因,分别为evm.model.scaf323.203、evm.model.scaf323.202 以及 evm.model.scaf129.59;有 2 个基因与拟南芥HY5基因家族的基因聚在一起,分别为evm.model.scaf112.6和evm.model.scaf 32.179。
肖婷婷[10]（2019）在《黄瓜Tril基因转化及再生体系优化》文中指出黄瓜（Cucumis sativus L.）组织培养和遗传转化虽然经过几十年的发展,但仍存在再生体系不成熟、转化效率低等问题。因此,优化黄瓜离体再生体系,提高遗传转化效率是黄瓜品种选育和种质资源创新所迫切需要的。本研究选用黄瓜品种‘新泰密刺’为材料,采用实验室前期已有的方法,通过构建表皮毛（果刺）发育相关基因的载体、获取外植体、共培养、侵染和植株再生等过程获取转化株。同时针对黄瓜离体再生体系不成熟、遗传转化效率低等问题进行了优化,通过对分化培养基中6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）浓度及生根培养基中卡那霉素（Kan）浓度的优化,进一步提高了出芽率、生根率和转化率,为黄瓜遗传转化体系奠定基础。主要结果如下:1.通过构建含pBI121-9930TrilPro-TrilCDS-3xflag的植物表达载体和根瘤农杆菌介导法对黄瓜‘新泰密刺’品种进行转化,成功获得11棵苗,经PCR鉴定、qRT-PCR检测以及P1单株后代的鉴定确定有1株为阳性苗,转化率为0.33%。2.针对得到的阳性苗转化率低的现象,对芽诱导阶段6-BA浓度进行筛选。结果表明,6-BA浓度为0.5 mg/L时出芽率达到76%以上,出芽效果最好。对根诱导阶段Kan浓度进行筛选。发现Kan最适浓度为60 mg/L时,能够起到最低浓度的有效筛选,即在此浓度下阳性株能生根,非阳性株不能生根。3.在0.5 mg/L 6-BA和60 mg/L Kan浓度下,研究了三种不同Kan筛选方式对转化周期和阳性苗率的影响。结果表明,仅在生根培养基中添加60 mg/L的Kan时,转化周期最短（45 d）,出芽率（62.6%）、生根率（22.5%）和转化率（1.33%）相对较高。
二、番茄离体再生体系优化研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、番茄离体再生体系优化研究（论文提纲范文）
（1）短串联靶标模拟技术介导的miR156e在紫花苜蓿中的遗传转化（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Summary |
| 缩略词(Abbreviation) |
| 第一章 文献综述 |
| 1 紫花苜蓿概述 |
| 2 苜蓿组织培养研究进展 |
| 2.1 品种基因型的选择 |
| 2.2 基本培养基的选择 |
| 2.3 外植体的选择 |
| 2.4 植物生长调节剂的添加 |
| 2.5 其他添加物质 |
| 3 苜蓿遗传转化研究进展 |
| 3.1 农杆菌介导法 |
| 3.2 显微注射法 |
| 3.3 基因枪法 |
| 4 植物microRNA研究进展 |
| 4.1 miRNA的合成 |
| 4.2 miRNA的作用机制 |
| 4.3 植物miRNA参与非生物胁迫 |
| 4.4 miR156 在植物中的调控功能 |
| 4.5 STTM研究进展 |
| 5 研究目的及意义 |
| 6 研究内容与技术路线 |
| 6.1 研究内容 |
| 6.2 技术路线 |
| 第二章 双元表达载体pBWA(V)HS-STTM-miR156e的构建 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 质粒与菌株 |
| 1.2 试剂与工作酶 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 PCR引物设计 |
| 2.2 PCR扩增 |
| 2.3 扩增产物凝胶回收 |
| 2.4 STTM-miR156e表达载体的构建 |
| 2.5 重组质粒p BWA(V)HS-STTM-miR156e转化农杆菌 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 STTM156e的构建与鉴定 |
| 3.2 pBWA(V)HS-STTM-miR156e表达载体的构建与鉴定 |
| 3.3 重组质粒转化农杆菌 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 第三章 三得利紫花苜蓿再生体系的建立与优化 |
| 1 试验材料 |
| 1.1 植物材料 |
| 1.2 试剂与植物激素 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 主要培养基 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 HgCl_2消毒时长及培养基成分对种子萌发的影响 |
| 2.2 愈伤组织的诱导 |
| 2.3 愈伤组织的分化 |
| 2.4 生根培养 |
| 2.5 数据处理 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 不同HgCl_2消毒时长及培养基成分对苜蓿种子萌发的影响 |
| 3.2 紫花苜蓿愈伤组织的诱导 |
| 3.3 愈伤组织的分化 |
| 3.4 胚状体的生根 |
| 4 讨论 |
| 5.小结 |
| 第四章 农杆菌介导STTM156e在紫花苜蓿中的遗传转化 |
| 1 试验材料 |
| 1.1 材料试剂 |
| 1.2 菌株 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 选择培养基中Carb浓度的确定 |
| 2.2 选择培养基中Hyg选择压的确定 |
| 2.3 农杆菌介导的遗传转化流程 |
| 2.4 转化体系的建立 |
| 2.5 阳性植株的获得 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 选择培养基中Carb浓度的确定 |
| 3.2 选择培养基中Hyg选择压的确定 |
| 3.3 侵染时间对转化率的影响 |
| 3.4 侵染菌液浓度对转化率的影响 |
| 3.5 共培养天数对转化效率的影响 |
| 3.6 转基因苜蓿的获得 |
| 3.7 PCR分子检测 |
| 4 讨论 |
| 5.小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 在读期间发表论文和研究成果 |
| 导师简介 |
（2）加工番茄新番72号再生体系的建立（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 培养基 |
| 1.3 方法 |
| 1.3.1 无菌苗的培养 |
| 1.3.2 苗龄试验 |
| 1.3.3 愈伤诱导及芽分化 |
| 1.3.4 数据处理 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 苗龄对番茄愈伤组织及不定芽诱导的影响 |
| 2.2 不同激素浓度配比对愈伤组织和芽分化诱导的影响 |
| 3 讨论与结论 |
（3）番茄材料‘851’高效离体再生体系的建立（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 番茄种子浸泡处理 |
| 1.2.2 番茄种子暗培养处理 |
| 1.2.3 外植体的切取 |
| 1.2.4 不同浓度IAA对不同外植体不定芽的诱导 |
| 1.2.5 不同苗龄外植体的选择 |
| 1.2.6 生根培养基的选择 |
| 1.3 项目测定 |
| 1.4 数据分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 不同浸泡时间处理对番茄种子萌发的影响 |
| 2.2 暗处理对番茄种子萌发影响 |
| 2.3 不同浓度IAA对下胚轴、子叶、子叶节不定芽诱导的影响 |
| 2.4 不同苗龄对外植体不定芽诱导的影响 |
| 2.5 生根培养基处理对不定芽生根的影响 |
| 3 讨论与结论 |
| 3.1 不同浸泡时间与暗培养处理对番茄种子萌发的影响 |
| 3.2 不同外植体类型和IAA浓度对不定芽诱导的影响 |
| 3.3 苗龄对不同类型外植体不定芽诱导的影响 |
| 3.4 生根培养基类型对不定芽生根的影响 |
（4）茄子组织培养高效再生体系初探与WRKY基因的表达分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 茄子的基本概况 |
| 1.2 茄子再生体系研究进展 |
| 1.3 影响植物再生的因素 |
| 1.3.1 外植体基因型 |
| 1.3.2 外植体部位 |
| 1.3.3 植物激素 |
| 1.3.4 防褐变剂 |
| 1.3.5 外植体放置方式 |
| 1.4 WRKY基因在植物抗病中的研究进展 |
| 1.5 研究目的与意义 |
| 第二章 茄子再生体系的研究 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 茄子种子萌发研究 |
| 2.2.2 茄子愈伤组织诱导分化研究 |
| 2.2.3 茄子不定芽诱导分化研究 |
| 2.2.4 茄子不定根诱导分化研究 |
| 2.2.5 指标测定及数据处理 |
| 2.3 结果分析 |
| 2.3.1 不同处理对种子萌发效果影响 |
| 2.3.2 不同抗生素对种子萌发效果影响 |
| 2.3.3 不同消毒时间对种子萌发影响 |
| 2.3.4 无菌苗不同外植体对愈伤组织的诱导影响 |
| 2.3.5 盆栽苗愈伤组织诱导分化研究 |
| 2.3.6 不定芽分化研究 |
| 2.3.7 不定根诱导研究 |
| 2.4 小结与讨论 |
| 2.4.1 抗生素对茄子生长的影响 |
| 2.4.2 不同激素在茄子组织培养中的影响 |
| 2.4.3 不同类型外植体对茄子组织培养的影响 |
| 第三章 茄子抗黄萎病相关WRKY基因的表达分析 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 WRKY基因的保守序列分析 |
| 3.2.2 RNA的提取 |
| 3.2.3 WRKY基因的表达分析 |
| 3.2.4 野茄材料的病情指数与WRKY基因表达量的关联性分析 |
| 3.3 小结与讨论 |
| 第四章 结论与展望 |
| 4.1 茄子再生体系研究 |
| 4.2 WRKY基因的表达分析 |
| 4.3 展望 |
| 第五章 实践意义 |
| 附录 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（5）加工番茄花药培养愈伤组织诱导和分化研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文对照表 |
| 第一章 文献综述 |
| 0 前言 |
| 1 加工番茄花药培养研究现状 |
| 2 加工番茄花药培养影响因素 |
| 2.1 内因 |
| 2.1.1 供体植株基因型 |
| 2.1.2 供体植株生长状态 |
| 2.1.3 小孢子发育时期 |
| 2.1.4 药壁因子 |
| 2.2 外因 |
| 2.2.1 花药预处理 |
| 2.2.2 培养基及其附加成分 |
| 2.2.3 培养条件 |
| 3 倍性鉴定 |
| 3.1 再生植株形态学鉴定 |
| 3.2 气孔大小及气孔保卫细胞叶绿体数鉴定 |
| 3.3 同工酶鉴定 |
| 3.4 流式细胞仪鉴定 |
| 3.5 分子标记鉴定 |
| 3.6 染色体计数鉴定 |
| 4 花药培养存在的问题与展望 |
| 4.1 花药培养存在的问题 |
| 4.1.1 培养力较低 |
| 4.1.2 褐化 |
| 4.1.3 体细胞干扰及再生植株混倍现象 |
| 4.1.4 污染问题 |
| 4.2 展望 |
| 5 本研究的技术路线及目的意义 |
| 5.1 技术路线 |
| 5.2 目的意义 |
| 第二章 加工番茄小孢子细胞学发育时期与花器形态相关性 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 花蕾和花药的形态观察与测量 |
| 1.2.2 花蕾的细胞学观察 |
| 1.3 数据分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 小孢子发育时期花器形态学特征 |
| 2.2 小孢子发育时期的细胞学特征 |
| 2.3 花蕾长度与花粉小孢子单核靠边期的关系 |
| 3 讨论 |
| 3.1 小孢子发育时期与花器形态 |
| 3.2 小孢子发育时期的细胞学特征 |
| 3.3 花蕾长度与花粉小孢子单核靠边期 |
| 第三章 加工番茄花药愈伤组织诱导、增殖与分化 |
| 1.试验材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 外植体的选取与消毒 |
| 1.2.2 不同取材时间 |
| 1.2.3 愈伤组织诱导培养基的选择 |
| 1.2.4 愈伤组织增殖培养基的选择 |
| 1.2.5 愈伤组织生根培养基的选择 |
| 1.2.6 试验结果的统计方法 |
| 1.3 数据分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 不同采样时间对加工番茄花药愈伤组织污染率和诱导率的影响 |
| 2.2 加工番茄花药培养过程中的污染问题 |
| 2.3 不同诱导培养基对加工番茄花药愈伤组织诱导率的影响 |
| 2.4 激素对加工番茄花药愈伤组织的影响 |
| 2.4.1 不同浓度TDZ对加工番茄花药愈伤组织增殖的影响 |
| 2.4.2 不同浓度配比的6-BA和 NAA对愈伤组织增殖的影响 |
| 2.4.3 不同浓度IAA和 NAA对愈伤组织生根的影响 |
| 2.5 不同类型的愈伤组织 |
| 3 讨论 |
| 3.1 加工番茄花药培养的污染问题 |
| 3.2 供体植株年龄对加工番茄花药培养的影响 |
| 3.3 基因型对加工番茄花药愈伤组织诱导的影响 |
| 3.4 激素对加工番茄愈伤组织增殖的影响 |
| 3.5 NAA和 IAA对愈伤组织分化生根的影响 |
| 第四章 加工番茄花药愈伤组织倍性鉴定 |
| 1.试验材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 流式细胞仪鉴定方法 |
| 1.2.2 根尖染色体鉴定方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 加工番茄流式细胞仪倍性鉴定结果 |
| 2.2 加工番茄根尖染色体倍性鉴定结果 |
| 3 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 5.1 加工番茄小孢子细胞发育时期与花器形态的相关性 |
| 5.2 加工番茄花药的愈伤组织诱导、增殖与分化 |
| 5.3 加工番茄花药愈伤组织倍性鉴定 |
| 5.4 进一步研究的内容 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 MS培养基配方 |
| 作者简介 |
| 石河子大学硕士研究生学位论文 导师评阅表 |
（6）苹果MdMIF2基因的克隆与功能分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 C2H2 型锌指蛋白的概述 |
| 1.1.1 锌指蛋白的概念及分类 |
| 1.1.2 C2H2 型锌指蛋白结构与功能 |
| 1.2 MIF2 蛋白的概述 |
| 1.3 果树离体再生途径与影响因素 |
| 1.3.1 果树离体再生的途径 |
| 1.3.2 影响果树叶片离体再生的因素 |
| 1.4 果树遗传转化概述与影响因素 |
| 1.4.1 果树遗传转化的概述 |
| 1.4.2 影响果树遗传转化效率的因素 |
| 1.5 本研究的目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 植物材料 |
| 2.1.2 试验试剂 |
| 2.1.3 培养基 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 苹果核酸的提取与检测 |
| 2.2.2 Md MIF2 基因的克隆与分析 |
| 2.2.3 苹果MIF2 蛋白氨基酸序列与MdMIF2 基因表达特性分析 |
| 2.2.4 苹果MdMIF2 基因过表达载体的构建 |
| 2.2.5 苹果MdMIF2 基因沉默载体的构建 |
| 2.2.6 苹果‘GL-3’的遗传转化 |
| 2.2.7 苹果MdMIF2 转基因植株的鉴定 |
| 2.2.8 苹果MdMIF2 转基因植株的表型调查 |
| 2.2.9 苹果MdMIF2 转基因植株的功能验证 |
| 2.2.10 数据调查和统计分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 苹果MdMIF2 基因的克隆与分析 |
| 3.1.1 苹果MdMIF2 基因的克隆 |
| 3.1.2 苹果MIF2 蛋白的进化树分析 |
| 3.1.3 苹果MIF2 蛋白的氨基酸结构域分析 |
| 3.2 苹果MdMIF2 基因的表达分析 |
| 3.2.1 苹果MdMIF2 基因的时空表达模式分析 |
| 3.2.2 苹果MdMIF2 基因启动子在线分析 |
| 3.3 苹果MdMIF2 基因转基因植株的获得与鉴定 |
| 3.3.1 苹果MdMIF2 基因过表达载体的构建及农杆菌转化 |
| 3.3.2 苹果MdMIF2 基因沉默载体构建及农杆菌转化 |
| 3.3.3 苹果MdMIF2 转基因植株的获得与鉴定 |
| 3.4 苹果MdMIF2 基因的功能分析 |
| 3.4.1 苹果MdMIF2 转基因植株表型的调查 |
| 3.4.2 苹果MdMIF2 基因对遗传转化效率的影响 |
| 3.4.3 苹果MdMIF2 转基因植株叶片再生速率的变化 |
| 3.4.4 苹果MdMIF2 转基因植株影响叶片再生能力的比较 |
| 4 讨论 |
| 4.1 苹果MdMIF2 基因的克隆与表达特性 |
| 4.2 苹果MdMIF2 基因与叶片再生能力的关系 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（7）番茄高效再生体系的优化（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 1 前言 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 研究进展 |
| 1.2.1 不同基因型番茄再生研究进展 |
| 1.2.2 接种前种子处理相关研究进展 |
| 1.2.3 外植体类型再生研究进展 |
| 1.2.4 不同激素浓度配比诱导愈伤组织研究进展 |
| 1.2.5 不同激素浓度配比诱导不定芽研究进展 |
| 1.2.6 不同激素浓度配比诱导不定根研究进展 |
| 1.3 研究目的及意义 |
| 1.4 技术路线 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 无菌苗的获得 |
| 2.2.2 愈伤组织的诱导 |
| 2.2.3 不定芽的诱导 |
| 2.2.4 生根培养 |
| 2.2.5 炼苗移栽 |
| 2.3 数据分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 培养条件对无菌苗生长的影响 |
| 3.1.1 温汤浸种对种子发芽率的影响 |
| 3.1.2 不同的消毒时间对种子发芽的影响 |
| 3.1.3 不同培养基类型对无菌苗生长的影响 |
| 3.2 激素6-BA、IAA不同浓度配比对外植体愈伤诱导的影响 |
| 3.3 不同激素及浓度的配比对不定芽诱导的影响 |
| 3.3.1 不同浓度6-BA与 IAA对外植体不定芽诱导的影响 |
| 3.3.2 不同浓度6-BA、IAA、GA3 对外植体不定芽诱导的影响 |
| 3.3.3 不同浓度TDZ与 IAA对红帅909 外植体不定芽诱导的影响 |
| 3.3.4 不同浓度TDZ、6-BA与 IAA对红帅909 外植体不定芽诱导的影响 |
| 3.3.5 不同基因型对不定芽诱导的影响 |
| 3.4 不同浓度IAA对不定芽诱导生根的影响 |
| 3.5 再生植株田间定植成活情况 |
| 4 讨论 |
| 4.1 不同基因型材料快繁效率差异 |
| 4.2 激素6-BA跟TDZ的芽诱导效率差异 |
| 4.3 外植体生根对不定芽诱导的影响 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| Abstract |
| 致谢 |
（8）辣椒抗CMV候选基因筛选与克隆及再生体系建立（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 黄瓜花叶病毒简介 |
| 1.1.1 黄瓜花叶病毒生物学特性 |
| 1.1.2 CMV株系与亚组划分 |
| 1.1.3 黄瓜花叶病毒的危害及防治措施 |
| 1.2 辣椒抗黄瓜花叶病毒的遗传研究 |
| 1.2.1 辣椒抗黄瓜花叶病毒的种质资源 |
| 1.2.2 辣椒抗黄瓜花叶病毒的抗病机制 |
| 1.2.3 辣椒抗黄瓜花叶病毒的遗传机制 |
| 1.3 辣椒抗黄瓜花叶病毒的基因研究 |
| 1.3.1 分子标记 |
| 1.3.2 辣椒抗黄瓜花叶病毒的基因定位 |
| 1.3.3 植物抗黄瓜花叶病毒基因功能与克隆研究 |
| 1.4 辣椒再生体系研究进展 |
| 1.4.1 激素配比对辣椒再生的影响 |
| 1.4.2 基因型及外植体类型对辣椒再生的影响 |
| 1.4.3 其他因素对辣椒再生的影响 |
| 1.5 本研究的目的和意义 |
| 第二章 qCmr2.1候选基因表达模式分析及功能验证 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 植物材料 |
| 2.1.2 菌株和质粒 |
| 2.1.3 生化试剂 |
| 2.1.4 培养基及溶液配制 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 试验材料播种 |
| 2.2.2 辣椒总RNA的提取 |
| 2.2.3 cDNA的合成 |
| 2.2.4 候选基因目的片段的克隆 |
| 2.2.5 接种液的制备及VIGS沉默植株 |
| 2.2.6 活化CMV病毒及植株接种CMV |
| 2.2.7 实时定量PCR检测 |
| 2.2.8 候选基因的来源 |
| 2.2.9 候选基因表达模式分析和VIGS载体构建所需引物 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 G29和PBC688接种CMV前后候选基因表达模式分析 |
| 2.3.2 候选基因VIGS载体构建 |
| 2.3.3 VIGS技术验证抗CMV候选基因功能 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 辣椒抗CMV候选基因CA02g19570的克隆 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 植物材料 |
| 3.1.2 菌株和质粒 |
| 3.1.3 酶及生化试剂 |
| 3.1.4 主要仪器设备 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 试验材料的准备 |
| 3.2.2 总RNA的提取 |
| 3.2.3 生成3'RACE需要的cDNA及3'RACE的合成 |
| 3.2.4 生成5'RACE需要的cDNA和5'RACE的合成 |
| 3.2.5 目的基因cDNA全长的获得 |
| 3.2.6 目的片段与载体连接 |
| 3.2.7 转化至大肠杆菌感受态细胞 |
| 3.2.8 候选基因CA02g19570克隆结果检测及生物信息学分析 |
| 3.2.9 候选基因C402g79570克隆所需引物序列 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 辣椒总RNA的提取 |
| 3.3.2 候选基因CA02g19570全长的克隆 |
| 3.3.3 候选基因CA02g19570遗传进化树分析 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 辣椒全基因组测序材料CM334再生体系的建立 |
| 4.1 试验材料 |
| 4.2 试验试剂 |
| 4.2.1 培养基 |
| 4.2.2 植物激素的配制 |
| 4.3 试验方法 |
| 4.3.1 无菌苗的培养 |
| 4.3.2 不定芽的诱导和分化 |
| 4.3.3 不定芽的伸长 |
| 4.3.4 生根与移栽 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 不同激素配比对再生芽诱导分化的影响 |
| 4.4.2 不同激素配比对再生芽伸长的影响 |
| 4.4.3 基因型与外植体对组织培养再生的影响 |
| 4.4.4 CM334组织培养植株再生 |
| 4.5 讨论 |
| 全文结论 |
| 创新之处 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士期间发表学术论文 |
| 致谢 |
（9）空心菜离体再生体系的构建及不同光周期转录组分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 引言 |
| 1 空心菜概况 |
| 1.1 空心菜的形态学特征 |
| 1.2 空心菜的生长环境 |
| 1.3 空心菜的应用价值 |
| 2 旋花科植物离体再生研究进展 |
| 2.1 空心菜离体再生研究进展 |
| 2.2 甘薯离体再生研究进展 |
| 2.3 旋花科其他植物离体再生研究进展 |
| 3 影响植株再生的因素 |
| 3.1 外植体 |
| 3.2 植物激素 |
| 3.3 培养基 |
| 3.4 苗龄和苗态 |
| 3.5 基因型 |
| 4 转录组测序技术 |
| 4.1 RNA-seq简介及应用 |
| 4.2 光周期转录组的研究 |
| 5 植物开花分子调控的途径 |
| 5.1 光周期途径 |
| 5.2 春化途径 |
| 5.3 赤霉素途径 |
| 5.4 温度途径 |
| 5.5 自主途径 |
| 5.6 年龄途径 |
| 6 研究的目的与意义 |
| 7 技术路线 |
| 第二章 空心菜离体再生体系的构建 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 植物材料 |
| 1.1.2 植物激素与试剂 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 不同消毒方式对空心菜种子的影响 |
| 1.2.2 PPM对空心菜种子污染率的影响 |
| 1.2.3 不同培养基类型对空心菜无菌苗的影响 |
| 1.2.4 空心菜不同外植体的制备 |
| 1.2.5 不同基因型和外植体类型对空心菜不定芽诱导的影响 |
| 1.2.6 不同激素配比对空心菜不定芽诱导的影响 |
| 1.2.7 不同培养基类型对空心菜不定芽诱导的影响 |
| 1.2.8 不同凝胶剂对空心菜不定芽诱导的影响 |
| 1.2.9 外植体不同苗态对空心菜不定芽诱导的影响 |
| 1.2.10 外植体不同放置方式对空心菜不定芽诱导的影响 |
| 1.2.11 空心菜不定根的诱导 |
| 1.2.12 炼苗和移栽 |
| 1.3 空心菜离体再生数据分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 空心菜无菌苗的培育 |
| 2.1.1 不同消毒方式对空心菜种子的影响 |
| 2.1.2 不同浓度PPM对空心菜种子污染率的影响 |
| 2.1.3 不同培养基类型对空心菜种子的影响 |
| 2.2 空心菜不定芽的诱导 |
| 2.2.1 不同基因型和外植体对空心菜不定芽诱导的影响 |
| 2.2.2 不同激素配比对空心菜不定芽诱导的影响 |
| 2.2.4 不同培养基类型对空心菜不定芽诱导的影响 |
| 2.2.5 不同凝胶剂对空心菜不定芽诱导的影响 |
| 2.2.6 外植体不同苗态对空心菜不定芽诱导的影响 |
| 2.2.7 外植体的不同放置方式对空心菜不定芽诱导的影响 |
| 2.3 空心菜不定根的诱导 |
| 2.3.1 不同浓度NAA以及培养基类型对不定根的影响 |
| 2.5 再生苗的炼苗与移栽 |
| 3 讨论 |
| 3.1 空心菜无菌苗的培育 |
| 3.1.1 消毒剂和消毒时间对空心菜无菌苗的影响 |
| 3.2 空心菜不定芽的诱导 |
| 3.2.1 外植体类型对空心菜离体再生的影响 |
| 3.2.2 植物激素浓度及其配比对空心菜离体再生的影响 |
| 3.2.3 基因型对空心菜离体再生的影响 |
| 3.2.4 培养基对空心菜离体再生的影响 |
| 3.2.5 苗龄和苗态对空心菜离体再生的影响 |
| 3.2.6 接种方式对空心菜离体再生的影响 |
| 3.3 空心菜的生根培养 |
| 第三章 不同光周期转录组分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 供试材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 光周期对空心菜开花时间的影响 |
| 1.2.2 材料处理与取样 |
| 1.2.3 空心菜叶片总RNA的提取 |
| 1.2.4 RNA-seq文库构建与质检 |
| 1.2.5 测序数据过滤及序列比对分析 |
| 1.2.6 差异基因表达分析 |
| 1.2.7 差异基因富集分析 |
| 1.2.8 差异基因GO功能注释 |
| 1.2.9 KEGG pathway注释 |
| 1.2.10 变异位点分析 |
| 1.2.11 FT和HY5基因家族鉴定 |
| 1.2.12 FT和HY5同源基因序列比对 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 光周期对空心菜开花时间的影响 |
| 2.2 RNA质量分析 |
| 2.3 转录组数据质控 |
| 2.3.1 数据质量 |
| 2.3.2 比对统计分析 |
| 2.3.3 比对区域分布 |
| 2.4 差异分析 |
| 2.4.1 差异基因统计 |
| 2.4.2 差异基因分布情况 |
| 2.4.3 差异基因韦恩图 |
| 2.4.4 差异基因聚类 |
| 2.5 富集分析 |
| 2.5.1 差异基因的GO功能富集分析 |
| 2.5.2 KEGG通路富集分析 |
| 2.6 变异位点统计分析 |
| 2.7 转录因子分析 |
| 2.8 空心菜FT、HY5基因家族系统发育树 |
| 2.9 空心菜FT、HY5基因家族序列比对 |
| 3 讨论 |
| 3.1 差异基因分析 |
| 3.2 富集分析及转录因子分析 |
| 3.3 FT同源基因 |
| 第四章 全文结论 |
| 1 空心菜离体再生体系的构建 |
| 1.1 空心菜无菌苗的建立 |
| 1.1.1 适合空心菜种子消毒的方式 |
| 1.1.2 PPM最佳浓度 |
| 1.1.3 培育无菌苗的最佳培养基 |
| 1.2 空心菜不定芽的诱导 |
| 1.2.1 空心菜离体再生的最佳外植体及基因型 |
| 1.2.2 空心菜诱导不定芽的最佳培养基配方 |
| 1.2.3 空心菜再生的最佳苗态及苗龄和最佳放置方式 |
| 1.3 空心菜不定芽的生根和移栽 |
| 2 空心菜不同光周期转录组分析 |
| 2.1 光周期对空心菜开花时间的影响 |
| 2.2 测序结果统计 |
| 2.3 差异基因统计 |
| 2.4 差异基因富集分析 |
| 2.5 变异位点统计 |
| 2.6 转录因子分析 |
| 2.7 FT、HY5基因发育树及序列比对 |
| 参考文献 |
| 缩略语表 |
| 附录 |
| 致谢 |
（10）黄瓜Tril基因转化及再生体系优化（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 植物遗传转化研究进展 |
| 1.1.1 植物遗传转化研究进展 |
| 1.1.2 植物遗传转化方法 |
| 1.2 单子叶植物转化研究进展 |
| 1.2.1 水稻 |
| 1.2.2 玉米 |
| 1.3 双子叶植物转化研究进展 |
| 1.3.1 烟草 |
| 1.3.2 拟南芥 |
| 1.3.3 番茄 |
| 1.4 黄瓜离体再生研究进展 |
| 1.4.1 黄瓜离体再生研究进展 |
| 1.4.2 黄瓜离体再生影响因素 |
| 1.5 黄瓜遗传转化研究进展 |
| 1.5.1 黄瓜遗传转化研究进展 |
| 1.5.2 黄瓜遗传转化影响因素 |
| 1.5.3 转基因结果的鉴定 |
| 1.6 本研究的目的与意义 |
| 第二章 黄瓜表皮毛Tril基因的遗传转化 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 植物材料 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要实验器具 |
| 2.1.4 Tril表达载体的构建 |
| 2.1.5 组培培养基配方 |
| 2.1.6 无菌苗以及外植体的获得 |
| 2.1.7 农杆菌介导遗传转化 |
| 2.1.8 转基因植株的移栽驯化和分子检测 |
| 2.1.9 出芽率、生根率和转化率的计算 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 35S-TrilCDS载体遗传转化结果检测 |
| 2.2.2 Pro-TrilCDS载体遗传转化结果检测 |
| 2.3 本章小结 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 黄瓜离体再生体系的优化 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 分化培养基6-BA最适浓度 |
| 3.2.2 生根培养基Kan最适浓度 |
| 3.2.3 三种不同Kan筛选方式的比较 |
| 3.3 本章小结 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 结束语 |
| 4.1 主要工作与创新点 |
| 4.2 后续研究工作 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间已发表或录用的论文 |
四、番茄离体再生体系优化研究（论文参考文献）
- [1]短串联靶标模拟技术介导的miR156e在紫花苜蓿中的遗传转化[D]. 赵耀东. 甘肃农业大学, 2021(09)
- [2]加工番茄新番72号再生体系的建立[J]. 张西英,刘江娜,张爱萍. 中国瓜菜, 2021(03)
- [3]番茄材料‘851’高效离体再生体系的建立[J]. 朱雪妹,魏小红,金宝霞,张小芳,刘放. 北方园艺, 2020(13)
- [4]茄子组织培养高效再生体系初探与WRKY基因的表达分析[D]. 杨志晶. 云南大学, 2020(08)
- [5]加工番茄花药培养愈伤组织诱导和分化研究[D]. 单淑玲. 石河子大学, 2019(01)
- [6]苹果MdMIF2基因的克隆与功能分析[D]. 赵佳怡. 沈阳农业大学, 2019(02)
- [7]番茄高效再生体系的优化[D]. 李利利. 山西农业大学, 2019(07)
- [8]辣椒抗CMV候选基因筛选与克隆及再生体系建立[D]. 张根莲. 南京农业大学, 2019(08)
- [9]空心菜离体再生体系的构建及不同光周期转录组分析[D]. 郝园园. 海南大学, 2019(06)
- [10]黄瓜Tril基因转化及再生体系优化[D]. 肖婷婷. 上海交通大学, 2019(06)