一、碱性成纤维细胞生长因子研究进展（论文文献综述）
黄彩虹,刘祖国,张明昌,孙旭光,徐建江,梁凌毅,林祥,王家松,田磊,吴苏潜,刘艳,钟桃玲[1]（2021）在《重组牛bFGF凝胶治疗中度干眼的多中心随机双盲平行对照临床试验》文中研究指明目的比较重组牛碱性成纤维细胞生长因子（rb-bFGF）凝胶和凝胶基质治疗中度干眼的临床疗效。方法随机、双盲、平行对照的临床试验研究。纳入2015年8月至2019年4月在厦门大学眼科研究所及厦门大学附属厦门眼科中心、华中科技大学同济医学院附属协和医院、首都医科大学附属北京同仁医院、复旦大学附属眼耳鼻喉科医院和中山大学中山眼科中心5个单位符合条件的中度干眼患者, 采用动态随机化将患者分为试验组和对照组。试验组和对照组分别给予rb-bFGF凝胶和凝胶基质治疗4周。分别于治疗前和治疗后2、4周对患者的干眼症状进行评分, 并进行泪膜破裂时间（BUT）、基础泪液分泌试验（SⅠt）和角膜荧光素钠染色等检查, 在治疗前和治疗后第4周行结膜印迹细胞学检查, 并观察用药后的药物刺激性。定量资料的比较采用t检验、威尔科克森符号秩检验或曼-惠特尼U检验;计数资料的比较采用χ2检验。结果共100例患者纳入研究, 84例患者完成随访, 其中男性25例, 女性59例;年龄（43±14）岁;试验组和对照组各42例。治疗后2、4周, 试验组干眼症状总评分分别为（7.17±3.60）、（5.95±3.25）分, 对照组分别为（7.01±3.25）、（6.32±3.85）分, 均明显低于治疗前试验组的（9.48±3.88）分（t=6.226, 6.563）和对照组的（9.15±3.58）分（t=4.693, 4.726）, 差异有统计学意义（P<0.05）。治疗后2、4周, 试验组BUT分别为4.00（2.40, 5.00）、4.64（3.00, 5.00）s, 较治疗前的3.72（2.00, 4.39）s均明显延长（Z=-2.485, -3.152;P<0.05）;治疗后2周, 对照组BUT为4.41（2.79, 5.12）s, 较治疗前的3.89（2.09, 4.25）s差异无统计学意义（Z=-1.953, P>0.05）;治疗后4周, 对照组BUT为 5.21（3.00, 5.02）s, 较治疗前明显延长（Z=-2.485, P<0.05）。治疗后2、4周, 试验组SⅠt结果分别为 7.31（3.75, 10.00）、8.50（4.00, 11.00）mm, 较治疗前的6.69（2.00, 8.13）mm均明显增多, 差异有统计学意义（Z=-2.031, -2.236;P<0.05）;治疗后2、4周, 对照组SIt结果分别为6.82（2.00, 8.25）、6.86（3.00, 9.25）mm, 较治疗前的6.50（2.00, 7.75）mm均无明显增加（Z=-0.179, -1.161;P>0.05）。治疗后2、4周, 试验组和对照组角膜荧光素钠染色点数均较治疗前明显增多（均P<0.05）。治疗后各时间点2个组的干眼症状总评分、BUT、SⅠt结果及角膜荧光素钠染色点数差异均无统计学意义（均P>0.05）。治疗后4周, 试验组结膜印迹细胞染色分级和杯状细胞数量均较治疗前差异有统计学意义（Z=-2.803, -3.308;P<0.05）;对照组则差异均无统计学意义（Z=1.195, -0.095;P>0.05）。治疗后4周, 2个组结膜印迹细胞染色分级差异有统计学意义（Z=-2.383, P<0.05）, 而结膜杯状细胞数量差异无统计学意义（Z=-1.162, P>0.05）。治疗期间2个组大部分患者均认为药物无刺激性, 仅有少部分患者出现眼部刺激症状, 组间差异无统计学意义（Z=-0.290, P>0.05）。结论 rb-bFGF凝胶和凝胶基质均能有效改善中度干眼的症状和体征, 但rb-bFGF凝胶在促进结膜上皮细胞修复和增加杯状细胞数量方面较凝胶基质有明显优势。（中华眼科杂志, 2021, 57:930-938）
刘沛,张冠英,余泉峰,李泽宇,韩广业,吴春磊[2]（2022）在《复合碱性成纤维细胞生长因子聚乳酸/胶原支架修复兔尿道缺损》文中指出背景:碱性成纤维细胞生长因子作为有效的血管形成因子之一,不但可增加缺血组织的血液灌注量、加快组织微血管再生,还可提高肌肉组织的血管形成,增加肌肉的血流灌注量。目的:将碱性成纤维细胞生长因子复合于聚乳酸/胶原支架中,修复兔尿道缺损,提升组织工程支架诱导尿道再生的能力。方法:制备电纺聚乳酸/胶原尿道支架与负载碱性成纤维细胞生长因子的电纺聚乳酸/胶原支架,分别命名为对照支架与实验支架,检测实验支架的体外缓释性能。将第3代兔脂肪间充质干细胞接种于两种支架表面7 d,分别进行CCK-8实验、细胞黏附实验与细胞活死染色。取成年雄性新西兰大白兔24只,建立长约5 cm的尿道缺损模型,随机分2组治疗,每组12只,分别植入对照支架+脂肪间充质干细胞复合体与实验支架+脂肪间充质干细胞复合体,术后12,24周分别进行逆行尿道造影与尿道组织学观察。结果与结论:（1）体外缓释实验:在前6 d时,实验支架中的碱性成纤维细胞生长因子以平均2.5 ng/d的速率释放,在第7-14天时以平均1.52 ng/d的速率释放,此后以平均1.12 ng/d的速率释放,至第21天后释放速率逐步下降。（2）体外细胞实验显示,实验支架上的细胞增殖速率快于对照支架（P <0.05）;脂肪间充质干细胞可黏附于两种支架表面,生长状态良好并伸出伪足,其中实验支架上的细胞增殖迅速;实验支架上的细胞存活率高于对照支架（P <0.05）。（3）体内实验结果:术后24周尿道造影下可见,实验支架组未见尿道狭窄,对照支架组可见轻度的尿道狭窄。术后24周组织学观察显示,实验支架组尿道组织可见较厚且较完整的上皮层,可见大量肌纤维束与血管形成;对照支架组尿道组织上皮层形成较薄,也可见少量的肌纤维束与血管形成。（4）结果表明,采用负载碱性成纤维细胞生长因子的电纺聚乳酸/胶原支架修复兔尿道缺损可促进移植物局部血管形成,改善局部尿道微环境,促进尿道再生。
袁健[3]（2021）在《Ilizarov胫骨横向骨搬移术对人和兔创伤性足部慢性创面的临床与实验研究》文中研究指明足部慢性创面,又称足部慢性溃疡,指发生在足踝、足背、足底及足跟的正常皮肤组织,在内部或外部因素影响下形成创面,经过正规治疗4周以上,无法通过正常的修复进程达到解剖及功能上的完整创面,也无明显愈合倾向的创面疾病。足部慢性创面形成的病因有内因和外因之分,内部因素主要包括糖尿病、血管功能障碍等,外部因素常见于创伤、细菌感染。有研究表明,创伤感染是导致足部溃疡形成的最主要因素之一,由于供给足部营养血供的血管主要是胫前和胫后动脉,交通及吻合支小而少,一旦受损或功能障碍,导致足部缺血感染坏死,迁延不愈演变成足部慢性创面。此外,足部慢性溃疡常为中老年性患者,合并营养障碍、各种基础疾病及机体免疫功能低下等情况,伴随创面感染一种或多种病原体。创面组织处于严重感染状态,持续激活炎症反应,足部慢性创面的治疗是当今一大难题。在治疗原发病、改善营养状态等基础上,联合外科彻底清创治疗是当前足部慢性创面治疗中较为丰富且有效的措施,然而对于一些濒临截肢的足部溃疡,其作用和疗效并不十分明显。目前大量研究证实,胫骨横向骨搬移术对濒临截肢的糖尿病足患者的治疗具有极大优势,有效地改善溃疡创面愈合达到保肢。本研究以人和兔创伤后足部慢性创面作为研究对象,分别进行临床及动物试验研究,进一步探讨Ilizarov胫骨横向骨搬移术对创伤性足部慢性创面的疗效及机制,观察该技术能否更显着地改善创面愈合疗效,促进创面组织毛细血管和成纤维细胞增生、胶原沉积,减轻感染及炎症反应。第一部分Ilizarov胫骨横向骨搬移术对人创伤性足部慢性创面的影响目的:观察Ilizarov胫骨横向骨搬移术和重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶（贝复新）分别治疗创伤性足部慢性创面的临床效果。方法:（1）2018年12月至2020年3月,按纳入标准选择笔者单位的20例创伤性足部慢性创面的患者,用随机数字表法分为Ilizarov胫骨横向骨搬移术组（骨搬移组）10例和重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶组（贝复新组）10例。（2）入组后分别给予大体观察和创面清创,术前取创面脓性渗出物予细菌培养,术中彻底清除坏死组织,术后骨搬移组在患肢胫骨中上段安装胫骨横向骨搬移系统进行骨窗搬移,足部创面日常外用生理盐水换药;贝复新组每日用重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶清洁换药。（3）两组患者分别给予敏感抗生素,术后第1d,横搬后2周、结束横搬后第1天及4周、8周、12周的胫骨横向搬移效果评定。清创前及治疗4周后大体观察。分别测定清创前与治疗后第2周、4周、8周的溃疡面积的大小。切取完全愈合的足部创面组织,病理切片后行染色观察愈合效果。采用10g尼龙丝检查创面愈合组织的感觉。结果:（1）骨搬移组10例患者中,骨窗搬移效果良好,术后出现胫骨骨折患者1例,9例患者骨窗术后12周愈合。（2）手术清创前,肉眼观察两组创面脓性分泌物多,局部坏死组织存在,肉芽组织水肿且稀少老化。治疗4周后,两组创面基底部肉芽新鲜生长,局部组织水肿消退明显,其中骨搬移组肉芽组织丰富,基底部红润,有较少的坏死组织残留物;贝复新组创面肉芽生长缓慢且稀疏,残留较多坏死组织。（3）清创前,骨搬移组创面大小平均为（62.34±34.49）cm2,贝复新组创面大小平均为（64.06±32.44）cm2。骨搬移组患足术后第2周创面肉芽开始生长,4周后创面开始缩小,6-8周创面明显缩小或愈合,最终9例患足创面达到愈合,且愈合创面组织与正常皮肤组织相似,瘢痕组织少,愈合时间平均（9.0±1.9）周,较贝复新组（12.7±3.7）周明显缩短,差异有统计学意义（P<0.05）;贝复新组3例治疗前无足趾缺血表现,治疗2月后出现足趾坏死,最终行前足截肢术。两组治疗后创面愈合速度比较,术后第2周时比较差异无统计学意义（P>0.05）,第4周、第8周创面愈合速度骨搬移组较贝复新组快,差异具有统计学意义（P<0.01）。（4）治疗12周后,骨搬移组愈合9例,贝复新组愈合7例,切取完全愈合足部创面组织,HE染色显示骨搬移组新生毛细血管和成纤维细胞多于贝复新组;Masson染色显示骨搬移组胶原纤维较贝复新组多,且排列紧密;免疫荧光染色显示骨搬移组肉芽组织丰富、新鲜,排列整齐,明显多于贝复新组;在骨搬移组中的三种染色中,可发现有明显的分层,并有皮肤附属器（汗腺）。（5）治疗2周、4周、8周后,采用10g尼龙丝检查法发现,骨搬移组和贝复新组在创面愈合组织的感觉差异,并没有统计学意义（P>0.05）。结论:创伤性足部慢性创面给予敏感抗生素使用后,两组都可促进创面肉芽组织生长,缩小创面大小,但在治疗4周后骨搬移组促进创面愈合效果明显优于贝复新组。治疗12周分析骨搬移组创面愈合接近正常皮肤组织,可在三种染色方法中发现皮肤附属器（汗腺）,而贝复新组愈合创面较多为瘢痕愈合。治疗2周、4周、8周后发现,两组患者在创面愈合组织的感觉差异并没有统计学意义。第二部分Ilizarov胫骨横向骨搬移术对兔创伤性足部慢性创面的影响目的:了解Ilizarov胫骨横向骨搬移术对兔创伤性足部慢性创面肉芽组织生长及愈合情况的影响,进一步探讨该技术促进创面愈合机制。方法:（1）选择10只6月龄健康新西兰大白兔,耳缘静脉麻醉后在每只兔子右侧足背做一直径为1.5cm的全层足背皮肤缺损创面,建立成急性足部创面,参照付小兵等全层皮肤缺损法、沈氏改良塑料环肉芽肿定量法两种方法融合改进制成兔慢性难愈合创面模型。（2）按照随机数字表法分为Ilizarov胫骨横向骨搬移术组（骨搬移组）5例和重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶组（贝复新组）5例,骨搬移组在右侧的胫骨上段安装胫骨横搬支架,每日骨窗搬移的同时足部创面外用盐水换药;贝复新组每日用重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶清洁换药。（3）观察骨搬移组术后第1d,横搬后2周、4周胫骨块横向搬移效果、骨窗愈合情况。肉眼观察造模后1周、2周、4周两组创面愈合情况,以及创面肉芽组织生长分布情况。治疗1周、2周、4周,分别提取创面组织行HE染色、Masson染色及免疫荧光染色,光镜下观察两组创面肉芽组织生长和上皮化程度的差异。结果:（1）动物实验中,手术时间:（17.8±3.5）min。兔胫骨骨窗中骨块向外搬移了（3.2±0.1）mm,并能按原位往回搬移。骨搬移组中,4例兔子骨窗搬移效果良好,1例出现胫骨骨折。（2）干预治疗1周后,两组创面均较治疗前有明显愈合趋势,创面均有肉芽组织生长,骨搬移组创面肉芽组织丰富且新鲜,肉芽组织间有上皮化。干预治疗4周后,贝复新组创面虽较前愈合,但更多在于瘢痕化,骨搬移组创面愈合效果较好,创面完全愈合至原位再生。（3）造模成功后分别拍摄第1周、2周、4周照片,对相应时间点计算创面愈合率。骨搬移组与贝复新组比较,在创面愈合早期两组愈合进度相似,2周左右创面开始愈合结痂,贝复新组甚至快于骨搬移组,而到中晚期骨搬移组明显快于贝复新组,创面完全愈合。两组之间创面愈合率比较,第1周和第2周愈合率比较,差异无统计学意义（P>0.05）;第4周愈合率比较,差异有统计学意义（P<0.05）。（4）治疗1周、2周、4周,HE染色显示骨搬移组较贝复新组创面肉芽组织内毛细血管多,成纤维细胞排列有序;Masson染色显示骨搬移创面胶原纤维丰富,分布均匀,排列致密,呈规律有序分布;免疫荧光染色显示骨搬移组肉芽组织较贝复新组明显、丰富。结论:Ilizarov胫骨横向骨搬移术和重组牛对治疗创伤性兔足背慢性创面肉芽生长,创面愈合有效。治疗4周后,骨搬移组比贝复新组在促进创面愈合优势更大,愈合率更高。治疗1周、2周、4周,两组HE染色、Masson染色及免疫荧光染色显示,骨搬移组更能促进创面肉芽丰富生长,加快创面愈合。
李志红[4]（2021）在《消炎生肌膏对肛周脓肿术后bFGF、VEGF表达的相关性研究》文中研究指明目的:通过对比消炎生肌膏与雷弗努尔外用治疗肛周脓肿术后创面,观察两组治疗前与治疗后第14天的血清血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维生长因子（bFGF）的浓度表达变化,观察并比较两组在创面疼痛、创面渗液、创缘水肿、创面愈合率、创面愈合时间的治疗效果及差异。研究并探讨消炎生肌膏促进肛周脓肿术后创面愈合的机制。方法:选取2020年5月至2021年1月在福建中医药大学附属人民医院肛肠一科住院并符合纳入标准的湿热下注型肛周脓肿术后患者60例。按照随机数字表的方法分为治疗组和对照组各30例。治疗组予消炎生肌膏纱条外用换药治疗,对照组予雷弗努尔纱条外用换药治疗,观察并记录两组患者治疗前与治疗后第14天的血清VEGF与bFGF的浓度表达变化,术后第7天、14天、21天两组患者创面疼痛,创面渗出量,创缘水肿的情况,测量并记录创面面积,计算创面愈合率,对比总体疗效,追访并记录创面愈合的时间。结果:1、术前两组病例在性别、年龄、原始创面面积、治疗前的血清VEGF、bFGF的浓度表达水平比较,均无统计学差异（P>0.05）,两组均具有可比性。2、对比两组治疗前后的血清VEGF、bFGF的浓度表达水平,治疗组与对照组治疗后VEGF、bFGF的浓度表达水平均较治疗前明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）。治疗组与对照组比较,治疗组升高血清VEGF、bFGF的浓度表达水平较对照组显着,差异具有统计学意义（P<0.05）。3、对比两组术后创面疼痛情况,术后第7天,差异无明显统计学意义（P>0.05）,在术后第14天、21天,差异均具有统计学意义（P<0.05）。4、对比两组术后创面渗液情况,术后第7天,差异无明显统计学意义（P>0.05）,在术后第14天、21天,差异均具有统计学意义（P<0.05）。5、对比两组术后创缘水肿情况,在术后第7天、14天、21天,差异均具有统计学意义（P<0.05）。6、对比两组术后创面面积,在术后第7天、14天、21天,差异均具有统计学意义（P<0.05）。7、对比两组术后第21天的创面愈合率,差异具有统计学意义（P<0.05）。8、对比两组术后的总体疗效,治疗组总有效率100%,对照组总有效率92%,差异具有统计学意义（P<0.05）。9、对比两组术后创面愈合时间,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:应用消炎生肌膏治疗肛周脓肿,能够提高血清VEGF、bFGF的浓度表达水平,促进肛周脓肿术后创面修复,同时显着缓解肛周脓肿术后创面的疼痛,减少创面渗液量,减轻创缘水肿,加快创面修复速度,缩减愈合时间。
张红超[5]（2021）在《102例犬细菌性角膜溃疡的流行病学调查及手术对深层角膜溃疡的疗效观察》文中研究指明角膜溃疡（Cornea Ulceration）是兽医临床较常见的眼科疾病,其病原菌主要为伪中间葡萄球菌（Staphylococcus Pseudintermedius）。目前,治疗角膜溃疡的方法是药物治疗和药物治疗联合手术治疗,如联合带蒂板层角膜移植手术或带蒂结膜瓣遮盖术。但是,对这两种手术的临床疗效比较没有系统的研究。本研究首先对郑州地区102例角膜溃疡犬进行流行病学分析,然后依据流行病学调查情况,用主要致病菌构建犬角膜溃疡模型,进而观察带蒂板层角膜移植术和带蒂结膜瓣遮盖术对角膜溃疡的疗效。现将研究情况报告如下:试验一:102例犬角膜溃疡的流行病学调查及细菌的分离鉴定与耐药性分析收集2017年6月至2019年12月间郑州市三家宠物医院收治的102例犬角膜溃疡病例,统计其发病原因、年龄、性别、品种、治疗方法及预后等,并使用无菌生理盐水浸湿的细胞刷蘸取溃疡灶样品,对采集的样品进行细菌培养与纯化,然后使用MALDI Biotyper系统对分离的菌株进行鉴定。同时,将所分离的主要菌株做眼科常用药物的敏感性试验。试验结果如下:（1）发病率较高的品种为贵宾、比熊、京巴、柯基和混血犬;年龄从2月龄至19岁不等,平均年龄为5.8±0.54岁,发病原因主要以外伤（22例,21.57%）和干眼症（14例,13.73%）为主。（2）细菌培养阳性99例,以伪中间葡萄球菌感染的混合感染病例为主;体外抑菌有效的抗生素有头孢甲肟（96.94%）、利福平（98.98%）、妥布霉素（97.96%）、左氧氟沙星（93.88%）和环丙沙星（96.94%）;而对四环素（91.84%）、红霉素（96.94%）和氯霉素（51.02%）有耐药性。试验二:不同治疗方法对伪中间葡萄球菌性犬角膜溃疡的疗效观察选用15只健康成年比格犬,使用微量注射器吸取伪中间葡萄球菌菌液注入角膜基质层内构建犬角膜溃疡模型。造模后48 h,使用0.5%聚维酮碘生理盐水溶液对溃疡灶进行冲洗。同时滴加氧氟沙星滴眼液和玻璃酸钠滴眼液12次/d,两种药物用药间隔为1 min。造模成功后,随机选择3只犬用于抗生素治疗组,12只犬用于抗生素联合手术治疗组,手术治疗组在术眼消毒后进行手术治疗,其中左眼行带蒂板层角膜移植术,右眼行带蒂结膜瓣遮盖术。并于术后7、14、21、28、35和42 d统计相关临床指标和信息。根据临床观察指标和症状进行评分。试验结果如下:（1）单纯抗生素治疗组实验犬在治疗后36-46h内均出现角膜穿孔,前房塌陷,虹膜脱出,羞明,流泪,眼分泌物增多;角膜大面积水肿、不透明,多象限内可见新生血管。单纯抗生素治疗组治疗无效。（2）手术治疗组角膜浑浊度评分:术前两组间无统计学差异（p>0.05）;术后7、14和21 d带蒂板层角膜移植组评分显着或极显着高于带蒂结膜瓣遮盖组（p<0.01或p<0.05）;术后28d,两组间无统计学差异;术后35和42d,带蒂板层角膜移植组评分显着或极显着低于带蒂结膜瓣遮盖组（p<0.01或p<0.05）。（3）手术治疗组角膜新生血管评分:术前及术后7d,两组间无统计学差异（p>0.05）;术后14、21、28和35d,带蒂板层角膜移植组评分显着或极显着高于带蒂结膜瓣遮盖组（p<0.01或p<0.05）;术后42d,两组间无统计学差异（p>0.05）。（4）手术治疗组角膜水肿面积评分:术前两组间无统计学差异（p>0.05）;术后7和14 d,带蒂板层角膜移植组评分显着或极显着高于带蒂结膜瓣遮盖组（p<0.01或p<0.05）;术后21、28、35和42d,两组间无统计学差异（p>0.05）。（5）手术治疗组泪液量检测结果:术前及术后2-6d,两组间无统计学差异（p>0.05）;术后8-18、32、38和42d,带蒂板层角膜移植组评分极显着低于带蒂结膜瓣遮盖组（p<0.01）;在其余时间点,两组间无统计学差异（p>0.05）。（6）手术治疗组眼内压检测结果:术前及术后2-6d,两组间无统计学差异（p>0.05）;术后8-18、32、38和42 d,带蒂板层角膜移植组评分极显着低于带蒂结膜瓣遮盖组（p<0.01）;在其余时间点,两组间无统计学差异（p>0.05）。试验三:不同治疗方法对伪中间葡萄球菌性角膜溃疡犬角膜组织病理学及相关细胞因子表达的影响将抗生素联合手术治疗组的12只实验犬随机分成四组,分别于术后14、28、35和42 d进行手术采取角膜。将采集的角膜沿手术位置一分为二,一半用于组织切片制作,一半用于荧光定量检测细胞因子。试验结果如下:（1）单纯抗生素治疗组的组织病理学变化:角膜上皮层缺失,结构不完整,内皮细胞层部分区域缺失,后弹力层缺失。溃疡灶内可见新生肉芽组织,但无法完全闭合溃疡灶。（2）手术治疗组的组织病理学变化:带蒂板层角膜移植组角膜结构完整,角膜上皮层重新上皮化,纤维蛋白排列整齐有序,后弹力层和内皮层结构完整。带蒂结膜瓣遮盖组溃疡灶处完全覆盖结膜上皮,细胞密度高,排列杂乱无章,基质层可见新生血管,纤维蛋白排列无序。后弹力层和内皮层结构完整。（3）炎性因子基因表达的变化:术后14和28 d,与带蒂结膜瓣遮盖组相比,带蒂板层角膜移植组中TLR2、IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA相对表达量极显着升高（p<0.01）;术后35d,与带蒂结膜瓣遮盖组相比,带蒂板层角膜移植组中TLR2和TNF-α的mRNA相对表达量极显着升高（p<0.01）,其余炎性因子基因表达量在两组间无统计学差异（p>0.05）;术后42d,两组各炎性因子基因表达量无统计学差异（p>0.05）。（4）生长因子基因表达的变化:术后14 d,与带蒂结膜瓣遮盖组相比,带蒂板层角膜移植组中VEGF、FGF和TGF的mRNA相对表达量均显着或极显着升高（p<0.05或p<0.01）。术后28d,两组各细胞因子的mRNA相对表达量无统计学差异（p>0.05）。术后35和42 d,与带蒂结膜瓣遮盖组相比,带蒂板层角膜移植组中TGF的mRNA相对表达量显着降低（p<0.05）,其余生长因子的mRNA相对表达量无统计学差异（p>0.05）。试验四:带蒂板层角膜移植术对犬深层角膜溃疡临床病例的疗效观察对犬深层角膜溃疡临床病例采取带蒂板层角膜移植术后,连续观察至60 d。术后泪液量均在正常值范围内波动,眼内压在术后5-11 d内低于正常值范围,其余时间点均在正常值范围内。没有病例出现重复感染,术后恢复效果良好,视力均得到恢复。综上所述,郑州市102例犬角膜溃疡病例中的犬品种多为泰迪和短头颅犬,感染的细菌主要为伪中间葡萄球菌且对红霉素、氯霉素和四环素类药物耐药;板层角膜移植手术的术后恢复效果优于结膜瓣遮盖术,角膜愈合与透明度良好,纤维蛋白排列整齐有序,上皮层结构完整。
程敏君[6]（2021）在《海参酶解物促SD大鼠皮肤创面愈合的研究》文中研究指明海参是一种富含蛋白质的优质海产品,具有极高的营养和药用价值,已证实其在抗氧化、抗疲劳、抗凝血等方面起有效调节作用。但是针对海参富含营养且胶原含量高的这个特性,相关的应用于医疗、保健或功能食品中的功效研究较少。皮肤创伤是最常见的机体损伤之一,愈合过程中需要营养补给供能,同时胶原也是皮肤组成中必不可少的。因此,本课题在海参富含营养和胶原的基础上,验证海参酶解物（Sea cucumber hydrolysate,SCH）在促创面愈合方向的潜在功效,同时对其促创面愈合通路和吸收机理进行探究,以期为海参资源的高值化利用提供新的方向,为企业对海参资源的深度开发提供医学营养方向的理论基础和实验参考。本文首先对海参的营养组成进行测定,接着通过酶解技术获取SCH作为动物实验原料,然后进行三次动物实验考察SCH促创面愈合的功效。酶解结果显示:酶配比为水产蛋白酶﹕风味蛋白酶=6﹕4、酶添加总量10000 U/（g prot）时酶解效率较好,酶解1h的产物的分子质量<500 Da占70.73%。第一批次动物实验借助大鼠皮层切除创伤模型确认了SCH具备促创面愈合的效果,考察的动物实验组包括:模型Vehicle组、高剂量H-SCH组、中剂量M-SCH组、低剂量L-SCH组和阳性YNBY组。大鼠伤口愈合率的结果显示:SCH不影响大鼠的正常生长,且促进大鼠创面愈合;其中M-SCH组（灌胃蛋白浓度0.50 g/kg）在造模后第8天就显示愈合率显着高于Vehicle组（P<0.05）,愈合率为88.15%。苏木精伊红（Hematoxylin-eosin,H&E）和马森三色（Masson’s trichrome method,Masson）染色、炎症指标、Hyp及生长因子含量结果皆表明,SCH可以减少炎性细胞浸润现象,同时促进创面处血管新生、成纤维细胞增殖、胶原沉积和再上皮化,其调节过程可能与Hyp、血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（Basic fibroblast growth factor,b FGF）和表皮细胞生长因子（Epidermal growth factor,EGF）的显着上调有关（P<0.05）。此外,M-SCH组在愈合后期表现出最优的形态特征,新生胶原排列有序紧密,瘢痕表皮最薄。确定了SCH具备促创面愈合的功效后,进一步地对酶解时间进行调整,获取高、中、低3组分子量的SCH并分析其组成差异。第二批次动物实验借助大鼠皮层切除创伤模型探究SCH的分子量对其促创面愈合功效的影响,同时测定创伤大鼠机体炎症和氧化应激,结合相关通路因子表达结果共同阐明SCH促创面愈合的作用通路。考察的动物实验组包括:空白Blank组、模型Vehicle组、高分子量H-Mw组、中分子量M-Mw组、低分子量L-Mw组和阳性YNBY组。高、中、低分子量SCH的氨基酸和矿物质组成揭示它们的主要差异在于Pro、Hyp和分子质量<500 Da的肽的含量上。大鼠创面愈合率的结果再次证实了SCH能促进创面愈合。H&E和Masson染色及Hyp结果表明,L-Mw组的促愈合效果最好,与YNBY组不存在明显差异（P>0.05）。此外,L-Mw组能显着降低白细胞介素-6（Interleukin-6,IL-6）、白细胞介素-8（Interleukin-8,IL-8）、肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）和丙二醛（Malondialdehyde,MDA）含量（P<0.05）,提高白细胞介素-10（Interleukin-10,IL-10）、过氧化氢酶（Catalase,CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase,GSH-Px）和超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）含量（P<0.05）,同时促进VEGF、EGF、b FGF分泌（P<0.05）,刺激转化生长因子-β（Transforming growth factor-β,TGF-β）、转化生长因子-β受体Ⅱ（Transforming growth factor receptor typeⅡ,TβRⅡ）、Smad家族3号蛋白（SMAD family member 3,Smad3）的m RNA表达（P<0.05）,激活TGF-β/Smad通路,由此共同作用来改善机体的炎症和氧化应激水平、促进胶原合成,加快伤口愈合。第三批次动物实验旨在探究高、低分子量SCH在动物体内吸收的差异。实验设定了6个时间点采集大鼠血浆、胃、肠道和皮肤组织,观察胃肠内容物的变化情况,测定血液和皮肤里游离态/结合态的Pro、Hyp和5个Hyp结合小肽的含量,以及肠道内寡肽转运蛋白（Oligopeptide transporter 1,Pep T1）m RNA表达情况,综合分析SCH分子量对其体内吸收的影响,进而解释SCH促创面愈合的体内吸收机理。结果显示:低分子量SCH的胃排空速率和肠吸收速率较快;低分子量SCH中含有较多的结合态Hyp和Pro;低分子量SCH中Ala-Hyp-Gly、Pro-Hyp、Gly-Pro-Hyp、Hyp-Gly和Ile-Hyp的吸收速率较快,且含量均高于高分子量SCH;低分子量SCH能更快诱导十二指肠内Pep T1表达,同时刺激空肠中Pep T1在2 h内持续表达。综上,对比高、中、低分子量SCH促多雷（Sprague Dawley,SD）大鼠创面愈合效果,得出L-Mw-S的作用效果最优。其中L-Mw-S的制备条件为:底物浓度20%,酶添加量10000 U/（g prot）,酶配比为水产蛋白酶﹕风味蛋白酶=6﹕4,酶解温度55℃,p H为7.0,酶解时间5 h。结合动物实验结果,可知SCH促大鼠创面愈合的吸收机理与SCH中的活性Hyp结合小肽被肠道完全吸收有关。这些小肽经小肠上皮的Pep T1途径被完整吸收,进而抑制机体炎症反应和氧化应激、促进生长因子分泌,同时激活TGF-β/Smad通路,诱导前胶原合成,从而加速伤口愈合。
刘皎皎[7]（2021）在《“补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的临床疗效观察及机制研究》文中研究说明目的:采用随机对照临床试验（RCT）方法观察“补肾生髓成肝”法治疗晚期肝癌的临床疗效,并探究其改善肝癌肝再生微环境的疗效机制,为临床推广应用提供较高级别的循证医学证据。方法:1.采用随机分组法将2017年1月至2020年6月就诊于陕西省中医医院肝病科的入选晚期肝癌患者共126例,基于随机数字表法简单随机分成3组,即西医对照组42例（以下简称西医组）,采用西医综合治疗方案;补肾生髓成肝单独治疗组42例（以下简称中医组）,采用地五养肝方、抗毒软坚方、左归丸合方化裁,辨证加减治疗方案;补肾生髓成肝综合治疗组42例（以下简称中西医组）,采用西医治疗组方案基础上加上地五养肝方、抗毒软坚方、左归丸合方化裁,辨证加减。入选后有10例患者脱落（中医组6例,3例因失访脱落,3例因不能坚持治疗脱落;西医组4例,2例因异地就医不便退出,2例因不能坚持治疗脱落）,最终纳入统计分析病例资料的共116例,西医对照组（西医组）38例、补肾生髓成肝综合治疗组（中西医组）42组、补肾生髓成肝单独治疗组（中医组）36例。该研究通过湖北省中医院伦理审查,在中国临床试验注册中心（世界卫生组织国际临床试验平台一级注册机构）完成临床试验注册,注册号:Chi CTR-IOR-17011439。参与研究的患者均自愿签署了知情同意书。对比三组治疗3个月及治疗6个月的生存率及生存期,对比治疗前、治疗后3个月血常规、粪常规加潜血、肝功、血糖、血脂、肾功等指标,对比三组治疗前后的中医证候评分、生存质量评分,并对患者生存期的独立影响因素进行分析。2.依据治疗方案治疗3个月后分别收集中医组、西医组、中西组每组20名患者血清,共60份,正常人群血清18份。收集的血清-80℃冻存于陕西省中医医院肝病实验室。通过悬液芯片系统检测患者血清肝再生相关细胞因子粒细胞集落刺激因子（Granulocyte Colony Factor,G-CSF）、肝细胞生长因子（Hepatocyte Growth Factor,HGF）、干扰素-γ（Interferon-γ,IFN-γ）、白介素-6/8/18（Interleukin-6,IL-6,Interleukin-8,IL-8,Interleukin-18,IL-18）、血小板源性生长因子（Platelet Derived Growth Factor,PDGF-BB）、干细胞因子（Stem Cell Factor,SCF）、肿瘤坏死因子-α（Tumor Nnecrosis Factor-α,TNF-α）的含量,观察体现“补肾生髓成肝”的中药对这些细胞因子的影响。结果:（1）三组患者治疗前后生存率及生存期比较:治疗3个月及6个月后,中西医组、中医组和西医组生存率比较,有统计学差异（88.10%VS72.22%VS52.63%）、（71.43%VS58.33%VS34.21%）（P<0.05）。治疗后中西医组、中西组和西医组患者生存期比较,具有统计学差异（23.86±17.55VS20.08±19.86VS15.95±16.44）（P<0.05）。（2）三组患者治疗前后肿瘤大小比较:中西医组、中医组和西医组组间比较及前后测量时间比较,差异不具有统计学意义（P>0.05）。（3）三组患者治疗前后肝功指标比较:中西医组患者治疗后直接胆红素水平、间接胆红素水平、谷丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶水平较治疗前显着降低（P<0.05）,组间比较无统计学差异（P>0.05）。中医组治疗后胆碱酯酶水平较治疗前显着升高,组间比较不具有统计学意义（P>0.05）。三组患者治疗前后白蛋白水平比较,具有统计学意义（P<0.05）;两两比较,中西医组及中医组与西医组比较,具有统计学意义（P<0.05）。（4）三组患者治疗前后其他生化指标比较:三组患者治疗后血常规指标中白细胞水平、中性粒细胞/淋巴细胞比值、血小板水平,中西医组、中医组与西医组比较,差异均具有统计学意义（P<0.05）。三组患者治疗后肌酐水平比较,中西医组、中医组与西医组比较,具有统计学意义（P<0.05）。（5）三组患者治疗前后中医证候评分比较:三组患者治疗前后中医证候评分以时间因素为源的主体内差异及以组别为源的主体间效应,具有统计学意义（P<0.05）。三组患者治疗后的中医证候评分均显着低于治疗前,差异具有统计学意义（P<0.05）。治疗后中西医组、中医组显着低于西医组的中医证候评分,差异具有统计学意义（P<0.05）。（6）三组患者治疗前后生存量表积分比较:三组患者生理机能积分方面治疗后积分均显着高于治疗前,具有统计学意义（P<0.05）。治疗后中西医组、中医组与西医组的社会功能评分比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。三组患者在生理职能、躯体疼痛、一般健康状况三个维度的积分组间比较,有统计学意义（P<0.05）,且两两组间比较后中西医组与中医组、西医组的生理职能、躯体疼痛、一般健康状况三个维度的积分组间比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。（7）HGF表达水平比较:西医组明显高于中西医组、中医组及正常人群组,差异具有统计学意（2255.17VS1097.76VS1072.39VS882.67）（P<0.05）。提示单用“补肾生髓成肝”或配合西医综合治疗可在一定程度上抑制HGF的过度表达。（8）IL-6表达水平比较:中医组、中西医组及西医组均低于正常人群组,且组间差异具有统计学意义（5638.03VS5166.45VS12842.5VS24559.34）（P<0.05）。中西医组、中医组IL-6表达水平明显低于正常人群组,差异具有统计学意义（P<0.05）。提示单用“补肾生髓成肝”或配合西医综合治疗可在一定程度上抑制IL-6的过度表达。（9）IL-18表达水平比较:西医组、中西医组及中医组,比较差异不具有统计学意义（120.345VS82.61VS78.58）（P>0.05）,但均较正常人群组升高（75.165）。提示单用“补肾生髓成肝”或配合西医综合治疗同样可以促进IL-18的表达。（10）PDGF-BB表达水平比较:中医组相对中西医组、西医组降低,差异不具有统计学意义（4677.18VS6140.6VS5534.885）（P>0.05）。但中医组低于西医组及中西医组,且更接近正常人群组（4401.67）。提示单用“补肾生髓成肝”可以抑制PDGF-BB的过度表达。（11）TNF-α表达水平比较:西医组、中西医组、中医组及正常人群组比较差异具有统计学意义（735.955VS244.93VS573.46VS1037.25）（P>0.05）。中西医组TNF-α表达水平明显低于正常人群组,差异具有统计学意义（P<0.05）。提示单用“补肾生髓成肝”可以更好的抑制TNF-α的过度表达。结论:“补肾生髓成肝”治疗晚期肝癌能够显着提高晚期肝癌患者3个月及6个月的生存率及生存期,改善晚期肝癌患者临床症状同时,改善患者各种生化指标。明显降低晚期肝癌患者的中医证候评分,提高患者的生存质量,为临床推广应用提供了较高级别的循证医学证据。“补肾生髓成肝”治疗晚期肝癌患者的疗效机制之一可能是通过抑制晚期肝癌患者HGF、PDGF-BB、TNF-α、IL-6的过度表达,同时升高晚期肝癌患者IL-18的表达,改善肝癌的肝再生微环境及其相关的炎症微环境、免疫微环境、血管新生微环境等。
朱业淘[8]（2021）在《联用神经因子对重型颅脑创伤大鼠神经细胞和神经功能的影响研究》文中指出背景:重型颅脑创伤是目前世界上导致青年人死亡和残疾的主要原因之一,重型颅脑创伤后常导致神经功能废损,而传统治疗方法的效果往往难以令人满意;因此如何改善重型颅脑创伤的预后一直是医疗界的难题。早些年已有相关研究证实在重型颅脑创伤后,损伤脑组织中有部分新生神经细胞生成,但数量极为有限,并不能使受损的神经功能得到充分的改善。神经因子作为一类对神经细胞营养作用且能够调节神经细胞存活的蛋白质,已经被多项研究证实可以在体外促进神经细胞的增殖和抗神经细胞凋亡以改善受损的神经功能,并且在神经缺血性和退行性疾病的邻域已经得到了较为宽泛的研究,在治疗颅脑创伤的研究方面,则少见有研究神经因子对重型颅脑创伤后大鼠神经细胞的影响,而将神经生长因子和碱性成纤维细胞生长因子联用应用观察对重型颅脑创伤大鼠神经细胞和神经功能影响的研究更是罕见。目的:探索联合应用不同的神经因子对重型颅脑创伤大鼠神经细胞和神经功能的影响,观察不同实验组大鼠肢体功能恢复差异,探索外源性神经因子治疗重型颅脑创伤的合适策略及机制。方法:将48只SD大鼠随机分为四个组,即神经生长因子组、碱性成纤维细胞生长因子组、联用神经生长因子和碱性成纤维细胞生长因子组以及对照组。颅脑创伤模型参照改良Feeney法制作,在造模一天后,对照组通过脑室注射途径注射生理盐水,各个实验组分别由脑室途径注入相应的神经因子。采用免疫组化法、免疫荧光法比较各组大鼠脑内损伤皮层、室管膜下区、海马齿状回以及损伤对侧相应区域阳性细胞的表达;采用前肢放置实验和平衡实验观察大鼠的肢体功能情况,比较各组大鼠肢体功能恢复情况的差异。结果:（1）在造模3 d、7d、14d后神经生长因子组、碱性成纤维细胞生长因子组、联合组相应区域的神经元、神经胶质细胞数量明显多于对照组,差异有显着性意义（P<0.05）,同时神经生长因子组、碱性成纤维细胞生长因子组神经元、神经胶质细胞明显少于联合组（P<0.05）,而神经生长因子组和碱性成纤维细胞生长因子组对应的各个区域阳性细胞数量没有明显差异;（2）在造模5天后,行为学实验评分对比中,对照组评分均高于神经生长因子组、碱性成纤维细胞生长因子组以及联合组,差异具有统计学意义（P<0.05）,且联合组评分低于碱性成纤维细胞生长因子组、神经生长因子组,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:联合应用外源性神经生长因子和碱性成纤维细胞生长因子较单用二者之一更能促进神经细胞的增殖和大鼠肢体功能的恢复。
张云峰[9]（2021）在《促绵羊iPSC生成效率的miRNAs筛选与评价及向雌性PGC样细胞定向分化研究》文中研究指明绵羊是一种非常重要的家养动物,利用基因修饰手段来改良或育种是一个方向。目前利用转基因技术进行分子育种,存在较难控制外源基因与效率较低等问题。基于小鼠胚胎干细胞（ESC）的基因打靶技术能进行精确有效的敲入或敲出。由于绵羊ESC很难分离获得,利用同样具有多能性的诱导多能干细胞（iPSC）代替ESC进行精确遗传工程操作成为目前急需解决的问题。目前绵羊的iPSC存在诱导效率低,难以获得完全重编程的iPSC的问题。microRNA是基因表达转录后的调节器,研究证明ESC特异性的miRNAs能促进体细胞重编程。因此,筛选能促绵羊体细胞重编程的miRNAs,并探讨其重编程机制,有望建立一种高效获得绵羊iPSC的体系,对优质绵羊培育具有应用价值,也为获得绵羊ESC奠定基础。生殖细胞是唯一将基因组和表观遗传信息传递给下一代的细胞谱系,但在体外重建生殖细胞发育一直是生物学研究的挑战。随着小鼠多能干细胞在体外可以分化为原始生殖细胞样细胞（PGCLC）,进而发育为卵母细胞并能进行生殖系传代,为绵羊多能干细胞在体外生产PGC提供了理论依据和方法。研究绵羊iPSC定向分化为雌性PGCLC,为绵羊PGC的发育研究可以提供一种细胞模型,为后期分化为功能卵子奠定了基础,对提高绵羊优质配子利用,加快畜群的改良速度具有重要的应用价值。目的:（1）筛选出能促进绵羊体细胞重编程的microRNA;（2）初步探索microRNA在绵羊体细胞重编程过程中的机制;（3）建立一种利用绵羊iPSC诱导分化为原始生殖样细胞的方法。方法:（1）组织块法分离培养妊娠45d左右的绵羊胎儿肾细胞（SKC）,作为重编程的起始细胞;胰酶消化法分离CF-1小鼠胎儿成纤维细胞（MEF）,丝裂霉素C处理后,作为诱导绵羊iPSC的饲养层细胞。（2）结合文献报道和数据库综合分析在小鼠和人干细胞中高表达或可促进重编程的miRNAs,筛选出可能促绵羊体细胞重编程的miR302/367簇、miR200b-200a-429簇、miR200c-141簇,并包装慢病毒;同时将Oct4、Klf4、Sox2、c-Myc、Nanog、Lin28、SV40T、h TERT等八种人源转录因子包装慢病毒;利用不同慢病毒感染SKC进行诱导重编程,通过碱性磷酸酶（AP）染色统计诱导效率,筛选出可促进绵羊体细胞重编程的最优miRNA;并对获得的绵羊iPSC从AP染色、实时定量PCR、细胞免疫荧光、核型分析、甲基化测序分析、拟胚体分化这几个方面进行鉴定。（3）利用miRbase和Target Scan等生物信息平台预测miR-200c靶基因,并送公司合成oar-miR-200c模拟物、抑制物和阴性对照;设计引物,克隆靶基因结合位点的3’UTR区及突变3’UTR,构建ZEB1和TWISTNB靶基因的双荧光素酶报告分析载体。（4）通过oar-miR-200c mimics转染细胞,利用荧光素酶报告载体分析与靶基因的作用;利用qRT-PCR检测靶基因的转录水平;利用Western blot检测靶基因的蛋白水平;探讨oar-miR-200c在绵羊体细胞重编程过程的作用机制。（5）设计引物,扩增克隆绵羊生殖相关基因DAZL和BOULE,并构建慢病毒载体PLVX-Dazl和PLVX-Boule,并进行包装慢病毒。（6）组织块法分离培养原代绵羊卵巢细胞;DAZL和BOULE慢病毒感染绵羊iPSC,建立转基因绵羊iPSC;通过摸索培养体系和条件,利用绵羊iPSC定向分化原始生殖细胞;利用qRT-PCR检测绵羊生殖细胞特异因子的转录水平,利用Western blotting检测生殖细胞特异因子的蛋白水平。结果:（1）成功分离绵羊体细胞SKC,其表达角蛋白CK18;成功分离小鼠CF-1MEF细胞,并制备饲养层细胞,能很好的支持siPSC生长。（2）筛选的三个miRNA簇,成功包装miRNA慢病毒;成功包装8种转录因子的慢病毒;慢病毒感染绵羊SKC后,通过诱导效率比较分析,筛选出miR-200c-141簇可将重编程效率提高到0.95%;获得的绵羊iPSC经鉴定呈阳性;（3）成功构建miR-200c靶基因ZEB1和TWISTNB的双荧光素酶报告载体;（4）双荧光素酶报告分析,oar-miR-200c靶向ZEB1和TWISTNB的3’UTR;qRT-PCR和Western blotting检测oar-miR-200c可显着降低ZEB1和TWISTNB基因的表达,但可增加E-cadherin的表达;oar-miR-200c通过对TGF-β信号通路的影响,提高MET转化,从而提高绵羊体细胞重编程效率;（5）成功构建绵羊生殖相关基因慢病毒载体LVX-Dazl-F2A-mcherry-IRES-NEO和PLVX-Boule-F2A-mcherry-IRES-NEO,并成功包装慢病毒;（6）成功建立稳转Dazl和Boule基因的绵羊iPSC,在培养液中添加Activin A、bFGF、BMP4、LIF、EGF等因子及卵巢细胞培养上清,可使绵羊iPSC分化为PGC样细胞,分化第八天可表达生殖相关标记蛋白PRDM1、PRDM14和VASA,其基因Dazl、Boule、Prdm14和Vasa的mRNA转录呈高水平状态。结论:（1）成功筛选出miR-200c-141可以促进绵羊体细胞重编程为iPSC;（2）oar-miR-200c靶向Zeb1和Twist NB基因的3’UTR,显着降低Zeb1和Twist NB表达水平,增加E-cadherin的表达;oar-miR-200c通过对TGF-β信号通路的影响,提高MET转化,从而提高绵羊体细胞重编程效率。（3）利用生殖系相关基因DAZL和BOULE的慢病毒感染绵羊iPSC,在添加activin A、b FGF、BMP4、LIF、EGF等因子的条件下,可以将绵羊iPSC诱导分化为原始生殖样细胞。
刘家杰[10]（2021）在《Ⅰ型胶原蛋白对ADSCs及EPCs体外增殖与分化的调控机制研究》文中进行了进一步梳理[目 的]探讨I型胶原蛋白（Collagen I）在体外对脂肪干细胞（Adipose Derived Stem Cells,ADSCs）及内皮祖细胞（Endothelial progenitor cells,EPCs）增殖与分化的调控机制,为种子细胞生长增殖提供良好微环境,为干细胞体外培养提供简便方法,为脂肪移植物早期血管化和提高其成活率提供理论依据。[方法]（1）体外培养并鉴定大鼠成纤维细胞、ADSCs及EPCs,大量扩增并收获成纤维细胞,采用酸提取法提取胶原蛋白、纯化,并采用Western Blot鉴定胶原蛋白。（2）CCK-8法探索适合ADSCs增殖的最佳浓度为0.1mg/ml,并描绘生长曲线;0.1mg/ml浓度的I型胶原蛋白对不同代次ADSCs增殖能力进行检测;0.Img/ml浓度的I型胶原蛋白包被Transwell小室下室（胶原组）,对照组小室下室不做处理,胶原组和对照组上室接种细胞数分别为3 ×104/孔,分别在24h、48h和72h染色并计数迁移细胞数;RT-qPCR分别检测胶原组与对照组中ADSCs表达VEGFA的量;胶原组细胞和对照组细胞分别进行成脂分化、成骨分化和成软骨分化,分别在第3天、第10天和第5天将各组细胞进行染色,观察其形态,另一部分细胞收样提取RNA,RT-qPCR检测各组早期成脂、成骨、成软骨基因表达量。（3）CCK-8法探索适合EPCs增殖的最佳浓度为5μg/cm2,并描绘生长曲线;5 μg/cm2浓度I型胶原蛋白对不同代次EPCs增殖能力进行检测;5μg/cm2浓度的Ⅰ型胶原蛋白包被Transwell小室下室（胶原组）,对照组小室下室不做处理,胶原组和对照组上室接种细胞数分别为3 ×104/孔,在24h、48h染色并计数迁移细胞数;RT-qPCR检测胶原组和对照组EPCs表达VEGFA、VEGFR1、vWF、CD133、CD31的量;基质胶上接种胶原组、对照组大鼠的EPCs,显微镜下在2h、4h时间点观察各组成管情况,随机选取5个视野拍照,用Image J统计成管总长度和分支节点数;用Trizol法收集成管前与成管时EPCs样品送公司测基因组序列,并用RT-qPCR验证测序结果;采用Trizol法提取胶原蛋白处理和对照组EPCs总RNA,采用实时定量PCR（RT-qPCR）检测胶原组和对照组中EPCs基因表达量。[结 果]（1）成纤维细胞提取纯化出I型胶原蛋白。（2）0.1mg/ml浓度的I型胶原蛋白对ADSCs增殖能力最强（p<0.05）,且0.1mg/ml浓度的I型胶原蛋白对不同代次细胞的增殖能力均强于对照组（p<0.05）。（3）Ⅰ型胶原蛋白对ADSCs迁移能力明显强于对照组（p<0.05）。（4）Ⅰ型胶原蛋白组中 ADSCs 表达 VEGFA、PPARG、RUNX2、COMP 的量明显多于对照组（p<0.05）。（5）5μ/cm2浓度的Ⅰ型胶原蛋白对EPCs增殖能力最强（p<0.05）,且5μg/cm2浓度的Ⅰ型胶原蛋白对不同代次EPCs的增殖能力均强于对照组（p<0.05）。（6）Ⅰ型胶原蛋白对EPCs迁移能力明显比对照组差（p<0.05）。（7）Ⅰ型胶原蛋白组中EPCs表达CD31、VEGFR1、VEGFA、vWF的量明显低于对照组,表达CD133的量明显高于对照组（p<0.05）。（8）Ⅰ型胶原蛋白可以上调细胞周期、粘附分子、代谢过程。（9）Ⅰ型胶原蛋白可以激活PI3K/Akt信号通路,且Ⅰ型胶原蛋白组中表达PI3K和Akt基因的量明显高于对照组（p<0.05）。[结 论]（1）本实验成功从成纤维细胞提取出Ⅰ型胶原蛋白,为Ⅰ型胶原蛋白的提取提供新方法。（2）Ⅰ型胶原蛋白可以诱导ADSCs增殖、趋化,为脂肪移植后脂肪再生提供良好微环境。（3）Ⅰ型胶原白通过上调细胞周期和代谢过程促进EPCs增殖。（4）Ⅰ型胶原蛋白通过上调PI3K/Akt信号通路和粘附分子促进EPCs血管形成,为脂肪移植早期血管化提供理论依据。（5）Ⅰ型胶原蛋白可以保持干细胞多向分化潜能,为脂肪移植联合干细胞应用提供新方法。
二、碱性成纤维细胞生长因子研究进展（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、碱性成纤维细胞生长因子研究进展（论文提纲范文）
（2）复合碱性成纤维细胞生长因子聚乳酸/胶原支架修复兔尿道缺损（论文提纲范文）
| 文章快速阅读： |
| 文题释义： |
| 0引言Introduction |
| 1 材料和方法Materials and methods |
| 1.1 设计 |
| 1.2 时间及地点 |
| 1.3 材料 |
| 1.3.1 主要材料与试剂 |
| 1.3.2主要仪器与设备 |
| 1.3.3 实验动物 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.4.1 制备聚乳酸/胶原支架 |
| 1.4.2制备负载细胞生长因子的支架 |
| 1.4.3 检测支架的细胞相容性 |
| 1.4.4 支架的体外缓释性能 |
| 1.4.5 动物体内实验 |
| 1.5 主要观察指标 |
| 1.6 统计学分析 |
| 2 结果Results |
| 2.1 聚乳酸/胶原支架的形貌 |
| 2.2 两组支架的细胞相容性 |
| 2.2.1 细胞增殖实验 |
| 2.2.2 细胞黏附实验 |
| 2.2.3 细胞活死染色 |
| 2.3 实验支架的体外缓释性能 |
| 2.4 兔尿道缺损修复实验结果 |
| 2.4.1 尿道造影 |
| 2.4.2 组织学观察 |
| 2.5 支架生物相容性 |
| 3 讨论Discussion |
（3）Ilizarov胫骨横向骨搬移术对人和兔创伤性足部慢性创面的临床与实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 Ilizarov胫骨横向骨搬移术对人创伤性足部慢性创面的影响 |
| 1 实验目的 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 Ilizarov胫骨横向骨搬移术对兔创伤性足部慢性创面的影响 |
| 1 实验目的 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 6 不足与展望 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 足部慢性创面的病因及治疗现状 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及获得的科研成果 |
（4）消炎生肌膏对肛周脓肿术后bFGF、VEGF表达的相关性研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 临床资料 |
| 1 研究目的 |
| 2 研究对象 |
| 2.1 研究对象来源 |
| 2.2 研究对象入选标准 |
| 3 药物 |
| 3.1 药物制剂来源及主要组成 |
| 3.2 药物使用方法 |
| 4 研究方法 |
| 4.1 分组 |
| 4.2 操作方法 |
| 4.3 分组处理 |
| 4.4 主要试剂及检测方法 |
| 5 观察指标 |
| 6 疗效评定 |
| 6.1 疗效评定标准 |
| 6.2 肛门疼痛程度评分标准 |
| 6.3 创缘水肿评分情况 |
| 6.4 创面分泌物渗液量评分标准 |
| 6.5 创面愈合率 |
| 6.6 创面愈合时间 |
| 7 统计方法 |
| 研究结果 |
| 1 一般资料分析 |
| 1.1 性别 |
| 1.2 年龄 |
| 1.3 创面原始面积的比较 |
| 1.4 生长因子治疗前的比较 |
| 2 观察指标数据分析和对比 |
| 2.1 VEGF的数据分析 |
| 2.2 bFGF的数据分析 |
| 2.3 两组术后第7 天、14 天、21 天的VAS的分析与对比 |
| 2.4 两组术后创面渗液积分分析和对比 |
| 2.5 两组术后创缘水肿积分分析和对比 |
| 2.6 两组创面面积的分析与对比 |
| 2.7 两组创面愈合率的分析和对比 |
| 2.8 两组创面愈合时间的分析和对比 |
| 2.9 两组创面总体疗效分析和对比 |
| 3 脱落说明 |
| 4 安全性审查 |
| 讨论 |
| 1 祖国医学对肛周脓肿的认识 |
| 1.1 病名的认识 |
| 1.2 病因病机的认识 |
| 1.3 肛周脓肿术后病因病机的认识 |
| 2 现代医学对肛周脓肿的认识 |
| 2.1 定义 |
| 2.2 发病机制 |
| 3 祖国医学治疗肛周脓肿的研究进展 |
| 3.1 祖国医学对治疗肛周脓肿的认识 |
| 3.2 祖国医学对治疗肛周脓肿术后创面的认识 |
| 4 现代医学治疗肛周脓肿的研究进展 |
| 4.1 现代医学对治疗肛周脓肿及术后创面的认识 |
| 5 生长因子在创面愈合过程中的意义 |
| 5.1 创面愈合与生长因子的联系 |
| 5.2 生长因子直接调控创面修复 |
| 5.3 生长因子间接调控创面修复 |
| 6 中药油膏外治疗法 |
| 6.1 中药油膏的定义及特点 |
| 6.2 膏药的中医治疗理论 |
| 6.3 中药油膏促进肛周脓肿术后创面恢复 |
| 7 消炎生肌膏的认识 |
| 7.1 方药组成及方解 |
| 7.2 消炎生肌膏主要药物现代药理研究及临床应用 |
| 8 研究结果分析 |
| 8.1 一般资料分析 |
| 8.2 血清生长因子VEGF、bFGF治疗前后的表达分析 |
| 8.3 疗效分析 |
| 9 问题和展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述 中药油膏治疗肛周脓肿影响生长因子表达的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（5）102例犬细菌性角膜溃疡的流行病学调查及手术对深层角膜溃疡的疗效观察（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一章 角膜溃疡的病因和愈合机制 |
| 1 角膜溃疡的病因与致病机制 |
| 1.1 角膜溃疡的病因 |
| 1.2 角膜溃疡的致病机制 |
| 2 角膜上皮层伤口的愈合机制 |
| 2.1 生长因子/细胞因子在上皮创面愈合中的作用 |
| 2.2 Toll样受体2 |
| 2.3 蛋白酶在上皮创面愈合中的作用 |
| 2.4 细胞外基质(ECM)在上皮创面愈合中的作用 |
| 3 角膜基质伤口的愈合机制 |
| 3.1 愈合过程中角膜细胞向成纤维细胞和肌成纤维细胞转化 |
| 3.2 免疫系统细胞在基质修复中的作用 |
| 3.3 创面愈合过程中基质细胞外基质的改建 |
| 3.4 与基质创面愈合过程相关的信号通路 |
| 第二章 治疗角膜溃疡方法的研究进展 |
| 1 药物治疗 |
| 2 角膜工程生物材料 |
| 2.1 胶原蛋白 |
| 2.2 丝素蛋白 |
| 2.3 明胶 |
| 2.4 脱细胞角膜 |
| 2.5 壳聚糖 |
| 2.6 其他合成聚合物水凝胶 |
| 3 手术治疗 |
| 3.1 角膜溃疡清创术 |
| 3.2 结膜瓣遮盖术 |
| 3.3 羊膜移植术 |
| 3.4 穿透角膜移植术 |
| 3.5 板层角膜移植术 |
| 4 本研究的目的与意义 |
| 参考文献 |
| 第二部分 试验研究 |
| 第一章 102例犬角膜溃疡的流行病学调查及细菌分离鉴定与药敏试验 |
| 1 材料 |
| 1.1 临床病例 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 常用试剂配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 样品采集 |
| 2.2 细菌的分离和纯化培养 |
| 2.3 MALDI Biotyper系统鉴定细菌和细菌保存 |
| 2.4 药物敏感性试验 |
| 3 结果 |
| 3.1 病因 |
| 3.2 发病率 |
| 3.3 品种 |
| 3.4 性别和年龄 |
| 3.5 治疗方法 |
| 3.6 治疗效果 |
| 3.7 细菌学分类 |
| 3.8 药物敏感性试验 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二章 不同治疗方法对犬伪中间葡萄球菌性角膜溃疡的疗效观察 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要药品和试剂 |
| 1.3 试剂配制 |
| 1.4 仪器和设备 |
| 1.5 手术器械 |
| 2 方法 |
| 2.1 造模前准备 |
| 2.2 麻醉与保定 |
| 2.3 术部消毒 |
| 2.4 角膜溃疡模型建立 |
| 2.5 手术治疗前准备 |
| 2.6 抗生素治疗组 |
| 2.7 抗生素联合手术治疗组 |
| 2.8 术后护理 |
| 3 术后临床常规检查及裂隙灯观察 |
| 3.1 临床检查 |
| 3.2 裂隙灯检查 |
| 3.3 治疗过程中犬泪液量检测 |
| 3.4 犬眼内压测定 |
| 4 统计分析 |
| 5 结果 |
| 5.1 抗生素治疗组裂隙灯观察的变化 |
| 5.2 手术治疗组裂隙灯观察 |
| 5.3 临床评分 |
| 5.4 泪液量检测结果 |
| 5.5 眼内压检测结果 |
| 5.6 三种治疗方案的疗效 |
| 5.7 三种治疗方案的愈合时间 |
| 6 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 不同治疗方法对角膜溃疡模型犬角膜组织病理学与相关细胞因子表达的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 试剂配制 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 实验动物分组 |
| 2.2 实验犬术前准备 |
| 2.3 手术采样 |
| 2.4 组织切片制作 |
| 2.5 荧光定量PCR检测相关基因表达量 |
| 2.6 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 组织病理学观察 |
| 3.1.1 抗生素治疗组组织病理学观察 |
| 3.1.2 抗生素联合手术治疗组病理学切片观察 |
| 3.2 qPCR检测角膜细胞因子的结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四章 带蒂板层角膜移植术对犬深层角膜溃疡临床病例的疗效观察 |
| 1 材料与试剂 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 临床病例介绍 |
| 2 方法 |
| 2.1 术前临床检查 |
| 2.2 手术方法 |
| 2.3 术后护理 |
| 2.4 术后临床检查 |
| 3 结果 |
| 3.1 术前检查结果 |
| 3.2 术后检查结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 附录 |
（6）海参酶解物促SD大鼠皮肤创面愈合的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 海参的研究进展 |
| 1.1.1 海参的概述 |
| 1.1.2 海参的营养和药用价值 |
| 1.1.3 海参的加工现状 |
| 1.1.4 海参酶解的研究进展 |
| 1.2 创面愈合的研究进展 |
| 1.2.1 创面愈合的概述 |
| 1.2.2 影响创面愈合的因素 |
| 1.2.3 创面愈合的实验模型 |
| 1.3 蛋白酶解物在促创面愈合方向的研究现状 |
| 1.4 肽消化吸收的研究进展 |
| 1.4.1 肽的概述 |
| 1.4.2 肽的消化机制 |
| 1.4.3 肽的吸收机制 |
| 1.5 立题背景、意义和研究内容 |
| 1.5.1 立题背景和意义 |
| 1.5.2 主要研究内容 |
| 1.5.3 主要技术路线 |
| 第二章 海参酶解物不同剂量组促SD大鼠皮肤创面愈合的研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料和主要仪器 |
| 2.2.1 材料与试剂 |
| 2.2.2 实验主要仪器和设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 酶解条件的确定 |
| 2.3.2 海参酶解物(SCH)的制备 |
| 2.3.3 营养组成测定方法 |
| 2.3.4 分子量分布测定方法 |
| 2.3.5 实验动物分组及处理 |
| 2.3.6 伤口愈合率测定方法 |
| 2.3.7 组织切片染色分析方法 |
| 2.3.8 血液中炎症因子的Elisa分析 |
| 2.3.9 组织中Hyp和生长因子的Elisa分析 |
| 2.3.10 数据处理 |
| 2.4 结果与分析 |
| 2.4.1 海参营养成分分析 |
| 2.4.2 酶解条件的分析 |
| 2.4.3 SCH分子质量分布情况 |
| 2.4.4 SCH不同剂量组对大鼠体质量的影响 |
| 2.4.5 SCH不同剂量组对大鼠伤口愈合率的影响 |
| 2.4.6 SCH不同剂量组对大鼠伤口组织切片病理染色的影响 |
| 2.4.7 SCH不同剂量组对大鼠伤口组织中Hyp含量的影响 |
| 2.4.8 SCH不同剂量组对大鼠炎症指标的影响 |
| 2.4.9 SCH不同剂量组对大鼠伤口组织生长因子含量的影响 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 海参酶解物不同分子量组促SD大鼠皮肤创面愈合的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料和主要仪器 |
| 3.2.1 材料与试剂 |
| 3.2.2 实验主要仪器和设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 不同分子量SCH的制备 |
| 3.3.2 氨基酸和矿物质组成测定方法 |
| 3.3.3 分子量分布测定方法 |
| 3.3.4 实验动物分组及处理 |
| 3.3.5 伤口愈合率测定方法 |
| 3.3.6 组织切片染色分析方法 |
| 3.3.7 血液中炎症因子的测定方法 |
| 3.3.8 血液和组织中氧化应激指标的测定方法 |
| 3.3.9 组织中Hyp、生长因子和通路相关因子的Elisa分析 |
| 3.3.10 组织中通路相关因子m RNA的 RT-PCR分析 |
| 3.3.11 数据处理 |
| 3.4 结果与分析 |
| 3.4.1 SCH不同分子量组样品的分子质量分布差异 |
| 3.4.2 SCH不同分子量组样品的氨基酸和矿物质组成差异 |
| 3.4.3 SCH不同分子量组对大鼠体质量的影响 |
| 3.4.4 SCH不同分子量组对大鼠伤口愈合率的影响 |
| 3.4.5 SCH不同分子量组对大鼠伤口组织切片病理染色的影响 |
| 3.4.6 SCH不同分子量组对大鼠伤口组织中Hyp含量的影响 |
| 3.4.7 SCH不同分子量组对大鼠炎症指标的影响 |
| 3.4.8 SCH不同分子量组对大鼠氧化应激的影响 |
| 3.4.9 SCH不同分子量组对大鼠伤口组织生长因子含量的影响 |
| 3.4.10 SCH不同分子量组对TGF-β/Smad信号通路的影响 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 海参酶解物不同分子量组的体内吸收差异 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料和主要仪器 |
| 4.2.1 材料与试剂 |
| 4.2.2 实验主要仪器和设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 实验动物分组及处理 |
| 4.3.2 胃肠内容物质量测定 |
| 4.3.3 血浆中游离态和结合态的Hyp、Pro含量测定 |
| 4.3.4 组织中游离态和结合态的Hyp、Pro含量测定 |
| 4.3.5 Hyp结合小肽标准曲线的建立 |
| 4.3.6 血浆中5 种Hyp结合小肽含量测定 |
| 4.3.7 组织中5 种Hyp结合小肽含量测定 |
| 4.3.8 十二指肠和空肠中Pep T1的RT-PCR分析 |
| 4.3.9 数据处理 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 大鼠胃肠的吸收情况 |
| 4.4.2 结合态和游离态Hyp的含量变化 |
| 4.4.3 结合态和游离态Pro的含量变化 |
| 4.4.4 大鼠血浆中5 种Hyp结合小肽的含量变化 |
| 4.4.5 大鼠组织中5 种Hyp结合小肽的含量变化 |
| 4.4.6 大鼠十二指肠和空肠中Pep T1的m RNA表达水平 |
| 4.4.7 SCH促大鼠创面愈合的体内吸收机理 |
| 4.5 本章小结 |
| 主要结论与展望 |
| 主要结论 |
| 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录1:实验数据附图 |
| 附录2:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 |
（7）“补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的临床疗效观察及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文名称缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 “补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的临床疗效观察 |
| 1 一般资料 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 纳入标准 |
| 2.2 排除标准 |
| 2.3 剔除标准 |
| 2.4 退出标准 |
| 2.5 中止标准 |
| 2.6 观察指标:包括安全性观察指标和疗效性观察指标 |
| 2.7 疗效判断 |
| 3 治疗方法 |
| 4 统计学分析 |
| 5 结果 |
| 5.1 三组患者基线资料比较 |
| 5.2 三组患者治疗前后生存率及生存期比较 |
| 5.3 三组患者治疗前后肿瘤大小比较 |
| 5.4 三组患者治疗前后生化指标水平比较 |
| 5.5 三组患者中医证候评分比较 |
| 5.6 三组患者生存质量评分比较 |
| 5.7 观察指标对患者疗效及预后的影响 |
| 讨论 |
| 1 “补肾生髓成肝”对晚期肝癌患者生存率及生存期的影响 |
| 2 肝癌肝再生微环境及“补肾生髓成肝”的改善作用 |
| 3 “补肾生髓成肝”对患者中医证候评分及生存质量的影响 |
| 4 “补肾生髓成肝”对患者并发症及预后的影响 |
| 参考文献 |
| 第二部分 “补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的疗效机制研究 |
| 1 研究样本及方法 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.2 实验操作流程 |
| 2 统计学处理方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 肝再生相关细胞因子正态性检验结果 |
| 3.2 肝再生相关细胞因子在各组人群中表达的差异性 |
| 3.3 肝再生相关细胞因子表达水平之间的相关性分析 |
| 讨论 |
| 1 “补肾生髓成肝”疗法相关研究进展 |
| 2 “补肾生髓成肝”改善肝再生微环境防治肝癌的疗效机制 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述一 肝癌微环境的研究现状 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 中医药影响肝癌微环境的研究进展 |
| 参考文献 |
| 中医证候评分量表 |
| SF-36 |
| 在校期间论文发表情况 |
| 致谢 |
（8）联用神经因子对重型颅脑创伤大鼠神经细胞和神经功能的影响研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 英汉缩略词对照表 |
| 神经因子对重型颅颅脑创伤后神经保护的研究进展 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（9）促绵羊iPSC生成效率的miRNAs筛选与评价及向雌性PGC样细胞定向分化研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1 研究的目的和意义 |
| 2 国内外研究进展 |
| 2.1 诱导多能干细胞的研究进展 |
| 2.1.1 体细胞重编程的机制 |
| 2.1.2 多能干细胞由不同信号通路调节 |
| 2.1.3 提高体细胞重编程效率的研究 |
| 2.2 家畜诱导多能干细胞的研究现状 |
| 2.2.1 猪诱导多能干细胞 |
| 2.2.2 绵羊和山羊诱导多能干细胞 |
| 2.2.3 牛诱导多能干细胞 |
| 2.3 miRNAs与多能干细胞 |
| 2.3.1 miRNA简介及生物学功能 |
| 2.3.2 miRNA在多能干细胞中的作用 |
| 2.3.3 miRNAs促进体细胞重编程 |
| 2.4 多能干细胞定向分化原始生殖细胞的研究进展 |
| 2.4.1 形成原始生殖细胞的关键因子和基因 |
| 2.4.2 ESC/iPSC定向分化原始生殖细胞的途径 |
| 2.4.3 ESC/iPSC体外诱导分化为生殖细胞的培养体系 |
| 3 研究内容 |
| 4 技术路线 |
| 第二章 试验研究 |
| 试验一 促进绵羊体细胞重编程miRNAs的筛选研究 |
| 1.材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 动物和细胞 |
| 1.1.2 主要仪器和设备 |
| 1.1.3 主要试剂耗材 |
| 1.1.4 质粒 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 绵羊肾细胞(SKC)分离培养及鉴定 |
| 1.2.2 小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)分离培养与饲养层细胞制作 |
| 1.2.3 促绵羊体细胞重编程miRNAs的初步筛选 |
| 1.2.4 慢病毒质粒提取与酶切鉴定 |
| 1.2.5 慢病毒包装 |
| 1.2.6 慢病毒收集及病毒滴度测定 |
| 1.2.7 miRNAs促绵羊肾上皮细胞重编程效率比较 |
| 1.2.8 siPSC的鉴定 |
| 1.2.9 数据统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 绵羊体细胞的分离纯化 |
| 2.2 MEF细胞分离培养及饲养层细胞的制备 |
| 2.3 慢病毒质粒提取与酶切鉴定 |
| 2.4 成功包装各类慢病毒 |
| 2.5 促绵羊SKC重编程的miRNAs筛选 |
| 2.5.1 慢病毒成功感染SKC |
| 2.5.2 比较不同miRNA诱导绵羊SKC的效率 |
| 2.5.3 miR-200c-141+8因子诱导绵羊iPSC |
| 2.6 由miR-200c-141促进重编程获得的siPSC的多能性鉴定 |
| 2.6.1 AP染色鉴定 |
| 2.6.2 细胞免疫荧光技术鉴定siPSC中多能性蛋白因子表达 |
| 2.6.3 qPCR鉴定siPSC中多能性因子基因转录 |
| 2.6.4 siPSC中多能基因Nanog启动子甲基化分析 |
| 2.6.5 siPSC核型分析 |
| 2.6.6 siPSC向拟胚体(EB)三胚层分化鉴定 |
| 3 讨论 |
| 3.1 绵羊iPSC的特征及诱导效率 |
| 3.2 miRNA提高干细胞诱导效率 |
| 4 小结 |
| 试验二 miR-200c提高羊体细胞重编程机制研究 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 细胞和载体 |
| 1.1.2 重要仪器和设备 |
| 1.1.3 主要试剂 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 miR-200c靶蛋白的预测 |
| 1.2.2 合成绵羊miR-200c模拟物、抑制物和阴性对照 |
| 1.2.3 双荧光素酶报告基因载体的构建 |
| 1.2.4 双荧光素酶报告基因分析miR-200c靶基因 |
| 1.2.5 实时荧光定量PCR检测miR-200c靶基因的m RNA水平 |
| 1.2.6 Western blot检测miR-200c靶基因的蛋白水平 |
| 1.2.7 数据统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 miR-200c靶基因的预测 |
| 2.2 双荧光素酶报告基因载体的构建 |
| 2.2.1 靶基因ZEB1和TWISTNB3’UTR区扩增测序 |
| 2.2.2 靶基因双荧光素酶报告载体的构建 |
| 2.3 靶基因双荧光素酶报告系统分析 |
| 2.4 实时荧光定量PCR检测ZEB1、TWISTNB及 E-cadherin转录水平 |
| 2.5 Western blot检测ZEB1、TWISTNB及 E-cadherin蛋白表达水平 |
| 3 讨论 |
| 3.1 TGF-β信号通路与细胞重编程 |
| 3.2 miRNA提高重编程的机制 |
| 4 小结 |
| 试验三 绵羊iPSC定向分化雌性PGC样细胞研究 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 细胞和载体 |
| 1.1.2 重要仪器和设备 |
| 1.1.3 主要试剂 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 绵羊生殖相关基因DAZL和 BOULE慢病毒载体的构建 |
| 1.2.2 PLVX-Dazl和 PLVX-Boule的慢病毒包装 |
| 1.2.3 慢病毒滴度测定 |
| 1.2.4 绵羊卵巢细胞的分离培养 |
| 1.2.5 绵羊iPSC定向分化原始生殖细胞样细胞(PGCLC) |
| 1.2.6 绵羊iPSC定向分化雌性PGC样细胞鉴定 |
| 1.2.7 数据统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 绵羊生殖相关基因DAZL和 BOULE慢病毒载体的构建 |
| 2.1.1 绵羊生殖相关基因DAZL和 BOULE的扩增 |
| 2.1.2 成功构建绵羊生殖相关基因DAZL和 BOULE慢病毒载体 |
| 2.1.3 成功包装慢病毒LV-DAZL和 LV-BOULE |
| 2.2 绵羊卵巢细胞分离培养 |
| 2.3 稳转DAZL和 BOULE基因siPSC的建立 |
| 2.4 原始生殖细胞样细胞(PGCCL)的鉴定 |
| 2.4.1 绵羊PGC样细胞的分化条件和过程 |
| 2.4.2 细胞免疫荧光技术检测绵羊PGC样细胞 |
| 2.4.3 实时定量RT-PCR验证绵羊PGC样细胞 |
| 3 讨论 |
| 3.1 原始生殖细胞与多能干细胞 |
| 3.2 体外重构原始生殖细胞的方法 |
| 4 小结 |
| 全文结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 作者简历 |
| 石河子大学博士研究生学位论文导师评阅表 |
（10）Ⅰ型胶原蛋白对ADSCs及EPCs体外增殖与分化的调控机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 早期脂肪移植物血管化的调节及机制 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
四、碱性成纤维细胞生长因子研究进展（论文参考文献）
- [1]重组牛bFGF凝胶治疗中度干眼的多中心随机双盲平行对照临床试验[J]. 黄彩虹,刘祖国,张明昌,孙旭光,徐建江,梁凌毅,林祥,王家松,田磊,吴苏潜,刘艳,钟桃玲. 中华眼科杂志, 2021(12)
- [2]复合碱性成纤维细胞生长因子聚乳酸/胶原支架修复兔尿道缺损[J]. 刘沛,张冠英,余泉峰,李泽宇,韩广业,吴春磊. 中国组织工程研究, 2022(34)
- [3]Ilizarov胫骨横向骨搬移术对人和兔创伤性足部慢性创面的临床与实验研究[D]. 袁健. 右江民族医学院, 2021
- [4]消炎生肌膏对肛周脓肿术后bFGF、VEGF表达的相关性研究[D]. 李志红. 福建中医药大学, 2021(01)
- [5]102例犬细菌性角膜溃疡的流行病学调查及手术对深层角膜溃疡的疗效观察[D]. 张红超. 扬州大学, 2021
- [6]海参酶解物促SD大鼠皮肤创面愈合的研究[D]. 程敏君. 江南大学, 2021(01)
- [7]“补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的临床疗效观察及机制研究[D]. 刘皎皎. 湖北中医药大学, 2021
- [8]联用神经因子对重型颅脑创伤大鼠神经细胞和神经功能的影响研究[D]. 朱业淘. 西南医科大学, 2021(01)
- [9]促绵羊iPSC生成效率的miRNAs筛选与评价及向雌性PGC样细胞定向分化研究[D]. 张云峰. 石河子大学, 2021(01)
- [10]Ⅰ型胶原蛋白对ADSCs及EPCs体外增殖与分化的调控机制研究[D]. 刘家杰. 昆明医科大学, 2021