一、绵羊东毕吸虫胎盘感染四例（论文文献综述）
岳永程[1]（2021）在《东毕吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶生物特性的初步研究》文中指出东毕吸虫病是由东毕属的六种虫体引起的一种人畜共患寄生虫病。在中国,主要流行的是土耳其斯坦东毕吸虫,成虫主要寄生在羊和牛的肠系膜静脉和肝门静脉中,病变主要发生在肝脏组织。东毕吸虫寄生在牛羊等终末宿主的血管中,虫体自身需要氧化还原酶来抵抗宿主免疫系统或代谢产生的活性氧自由基（ROS）,而东毕吸虫没有Trx和Grx这两种相互独立的系统,取而代之的是一种多功能酶——硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶（TGR）系统,该酶具有硫氧还蛋白还原酶（Trx R）、谷胱甘肽还原酶（GR）和谷氧还蛋白（Grx）三种酶活性。鉴于这种独特性质,对寄生蠕虫TGR的研究受到寄生虫学者们的高度重视。本研究以常用的实验动物作为东毕吸虫的终末宿主,对其感染情况进行了探索。在实验室条件下,成功以山羊作为终末宿主维持东毕吸虫生活史循环;在大鼠和豚鼠体内可以获得虫体,但虫体发育迟缓;在小鼠和东方田鼠体内收集不到成虫。在兔子体内可以获得90-120天、发育成熟的虫体,并可用于后续实验;但180天后虫体发育受阻。利用PCR技术从东毕吸虫cDNA中扩增得到TGR基因的ORF序列,并将大肠杆菌含有的硒代半胱氨酸插入元件（SECIS）插入到东毕吸虫TGR开放阅读框的末端。构建重组原核表达质粒p ET-28a（+）-Ot TGR和p ET-28a（+）-Ot TGRsec,并在在大肠杆菌BL21（DE3）中进行诱导表达,通过His-tag蛋白纯化磁珠对重组表达蛋白r Ot TGRsec和r Ot TGR进行纯化。将纯化的r Ot TGRsec蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,利用制备的抗体进行蛋白免疫印迹实验和免疫组织化学实验。实验结果表明,在大肠杆菌BL21（DE3）中,r Ot TGR以可溶性蛋白和包涵体形式表达,而r Ot TGRsec主要以可溶性蛋白的形式表达。制备得到了抗r Ot TGRsec的多克隆抗体,Western blotting的结果显示,可以检测到虫体蛋白中Ot TGRsec的存在,免疫组织化学结果显示,该蛋白在虫体中广泛分布,主要集中在虫体体被,其他组织有部分分布。通过TrxR、GR、Grx三种酶活性的检测体系,检测并计算了rOtTGRsec的Trx R、GR和Grx的酶活性。酶活性检测结果显示,r Ot TGRsec的Trx R酶活性为12.30±1.63 U/m L,GR酶活性为8.83±3.15 U/m L,Grx酶活性为0.31±0.07 U/m L。研究了Furoxan衍生物对r Ot TGRsec蛋白Trx R酶活性的抑制作用。利用实验室前期筛选的、对日本血吸虫、大片形吸虫TGR具有较好抑制效果的三种Furoxan衍生物LGM-35、ZWJ-19和CH-33,检测了其对东毕吸虫TGR酶Trx R活性的抑制作用,通过RNA干扰技术对东毕吸虫TGR基因进行了体外干扰,利用实时定量PCR和Western blot,比较分析了不同si RNA分子对该基因的体外干扰效果。结果显示,6个si RNA产生了不同的干扰效果,该基因的转录水平最高可降低46.1%,蛋白表达可降低30.6%。同时对不同浓度LGM-35的体外杀虫效果进行了观察和评价。实验结果表明,LGM-35对东毕吸虫具有一定的杀伤效果,当浓度为400m M,作用96 h后,杀虫效果可达100%,该结果略差于其对日本血吸虫的体外杀虫效果。本研究在实验室条件下维持了东毕吸虫的生活史循环,并对东毕吸虫TGR基因的生物学功能进行了初步研究,为后续开展东毕吸虫的实验室研究及以Ot TGR为靶标研制新的抗东毕吸虫药物奠定了基础。
王宇[2]（2010）在《土耳其斯坦东毕吸虫线粒体基因组的研究》文中研究表明土耳其斯坦东毕吸虫（Orientobilharzia turkestanicum）隶属于扁形动物门,吸虫纲,复殖目,裂体科,东毕属（Orientobilharzia）,是寄生于牛、羊等多种动物门静脉和肠系膜静脉的一种血吸虫。它与其属内其它血吸虫寄生于动物体内导致的疾病称东毕吸虫病（orientobilharziasis）,该病分布广泛,常呈地方性流行,给畜牧业生产造成很大的经济损失。过去对土耳其斯坦东毕吸虫的研究主要集中在形态学、生活史以及东毕吸虫病的流行病学调查、疾病的诊断和防治等方面,近年又利用线粒体和核糖体部分基因进行了土耳其斯坦东毕吸虫分子种系发生的研究,但关于土耳其斯坦东毕吸虫线粒体全基因组的研究尚未见报道。线粒体DNA是后生动物胞核外的遗传物质,其具有结构简单、进化速度快、母性遗传等特点,是研究寄生虫分子分类、系统进化、推导进化年限的一种很好的分子标记。本研究以土耳其斯坦东毕吸虫为研究对象,利用分子生物学方法,获得了虫体线粒体全基因组,并分析基因组的组成、各基因顺序、编码使用模型、起始终止密码子、tRNA编码基因的二级结构,探讨了土耳其斯坦东毕吸虫在裂体科中的系统发生位置。利用SDS-蛋白酶K法抽提土耳其斯坦东毕吸虫基因组DNA,通过与GenBank上已发表的相关血吸虫基因组序列比对,利用Oligo6.0软件设计出12对保守性引物,PCR扩增线粒体各基因,扩增产物经纯化后克隆于pMD18-T载体,分别转化到JM109、XL1 Blue、TG1感受态细胞中,提取质粒DNA,经PCR鉴定后,阳性质粒测序,应用DNAStar软件对所测出的序列进行拼接获得线粒体全基因组,对基因组进行分段研究,并与其他血吸虫进行同源性比对,同时应用Clustal X 1.83软件对相关序列进行排序,提交引导树,使用MEGA软件采用最大似然法（Maximum Likelihood methods, ML）和邻接法（neighbor-joining method, NJ）绘制系统发生树。结果显示,土耳其斯坦东毕吸虫全基因组序列长14754bp,含有12个蛋白编码基因,分别为细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ（cox1、cox2、cox3）、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚基Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、ⅣL、Ⅴ、Ⅵ（nad1、nad2、nad3、nad4、nad4L、nad5、nad6）、细胞色素b（cytb）和三磷酸腺苷酶第六亚基（atp6）,22个tRNA编码基因和2个核糖体编码基因（核糖体RNA大亚基,rrnL和核糖体RNA小亚基,rrnS）。以豆状带绦虫作外群,与曼氏血吸虫、湄公血吸虫、日本血吸虫、马来血吸虫、梭型血吸虫、埃及血吸虫及肝片吸虫、卫氏并殖吸虫、华支睾吸虫、猫后睾吸虫比较构建进化树,结果显示,裂体科血吸虫分为二个分支,日本血吸虫、马来血吸虫和湄公血吸虫为一分支,埃及血吸虫、梭型血吸虫和曼氏血吸虫为另一分支,土耳其斯坦东毕吸虫归于裂体属内,与梭型血吸虫、埃及血吸虫和曼氏血吸虫所属的非洲血吸虫这一分支更近。
陈佳[3]（2009）在《东毕吸虫病ELISA诊断方法的建立》文中提出东毕吸虫病（orientobilharziasis）是由多种东毕吸虫（Orientobilharzia spp.）寄生于牛、羊等动物门静脉和肠系膜静脉内而引起的一种血吸虫病。该病主要分布于亚洲和欧洲的一些国家和地区,常呈地方性流行,对畜牧业危害十分严重,同时东毕吸虫的尾蚴可以引起人的尾蚴性皮炎,严重影响人类的健康,是一种非常重要的人兽共患寄生虫病。东毕吸虫病的早期准确诊断是有效的控制该病的发生和蔓延的重要手段,传统的诊断方法主要为病原学检查和免疫学检测,如粪便水洗沉淀法、毛蚴孵化法、间接血凝试验和酶联免疫吸附试验等。然而病原检查检出率低,且虫体感染已过急性期,延误了有效治疗时间而影响了对该病的控制,免疫学检测常用抗原通常为成虫抗原和虫卵抗原,这两种抗原成分复杂、制备成本高、周期长,限制该法的广泛应用。因此,本试验拟利用分子生物学手段,对在血吸虫诊断中起重要作用的信号蛋白14-3-3基因采用RACE技术进行克隆,并制备成重组蛋白,建立间接ELISA诊断方法。本试验根据GenBankTM上发表的日本血吸虫、曼氏血吸虫和牛血吸虫信号蛋白14-3-3序列,依其保守区设计合成一对引物,以提取的东毕吸虫总RNA为模板,PT-PCR方法扩增信号蛋白14-3-3基因的中间片段,连接pMD18-T载体并转化到TG1宿主菌中,经鉴定,获得阳性克隆,并进行序列分析。根据测得的序列信息,再设计一对引物,利用5’RACE和3’RACE技术分别扩增目的基因的5’端和3’端,鉴定正确后并测序。利用分子生物学软件拼接三段序列得到全长序列信息。其次,根据东毕吸虫信号蛋白14-3-3全长cDNA序列设计两条加有EcoRⅠ、XhoⅠ酶切位点的引物,利用RT-PCR从东毕吸虫总RNA中扩增信号蛋白14-3-3全长序列,连接pMD18-T载体并转化到TG1宿主菌中,经鉴定及序列分析,获得阳性克隆。阳性质粒pMD18-T-信号蛋白14-3-3和表达载体pET-30a（+）,经EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切后回收、连接、转化到TG1宿主菌,提取质粒,酶切鉴定正确后,阳性质粒转化到最佳宿主菌BL21（DE3）中,构建其原核重组表达载体pET-30a-信号蛋白14-3-3,经酶切鉴定和DNA序列分析证实,构建的重组质粒pET-30a-信号蛋白14-3-3中含有信号蛋白14-3-3基因,且基因序列和阅读框架均正确。将重组菌株BL21（pET-30a-信号蛋白14-3-3）按1%的量接种到含有Kan（50μg/mL）的LB液体培养基中,37℃振荡培养2.5h,然后用1mmol/L IPTG诱导4h,融合目的蛋白获得高效表达。经Western blot检测,重组菌株表达的融合蛋白能够被东毕吸虫特异性抗体所识别。以纯化的重组信号蛋白14-3-3作为抗原包被酶标板,通过对间接ELISA各反应条件的优化,确定了最佳反应条件为:最佳封闭液为5%脱脂奶粉,封闭条件为37℃1h;抗原最佳包被浓度为5.0μg/mL;抗原的最佳包被液为50mM pH9.6的碳酸盐缓冲液;最佳血清稀释液为5%脱脂奶粉,血清稀释倍数为100倍;HRP-兔抗羊IgG的最适工作浓度为1:5 000。采用已确立的间接ELISA反应条件,对105份阴性血清的检测结果进行统计学分析,确定了间接ELISA方法判定标准,即OD450值大于等于0.31为阳性,小于0.31为阴性。应用建立的间接ELISA方法对105份阴性血清和65份阳性血清（经剖检法和形态鉴定证实）的检测结果表明,ELISA方法的特异性为91.5%,敏感性为88.6%。而且与肝片吸虫、鹿前后盘吸虫、扩展莫尼茨绦虫和捻转血矛线虫阳性血清均无交叉反应。采用本研究建立的方法,对来自于不同地区的240份绵羊血清进行了检测,结果阳性率为35.3%,与省内的感染情况基本相似。
李利[4]（2008）在《土耳其斯坦东毕吸虫分子种系发生的研究》文中研究指明土耳其斯坦东毕吸虫（Orientobilharzia turkestanicum）是寄生于牛、羊等多种动物门静脉和肠系膜静脉的一种血吸虫。它与所在属内的其它血吸虫寄生于动物导致的疾病称为东毕吸虫病（orientobilharziasis）,主要分布于亚洲和欧洲的一些国家和地区,常呈地方性流行,对畜牧业危害十分严重。近年来,土耳其斯坦东毕吸虫的研究主要集中在其形态特征描述、生活史研究及东毕吸虫病的流行病学调查、诊断、药物防治和预防措施等方面,关于其分子分类和种系发生的基础研究少见报道。核糖体DNA是细胞核内编码核糖体RNA的基因,为一类中度重复序列,以串联多拷贝的形式存在于细胞核内染色体DNA中,每个重复单位由非转录间隔区（non-transcribed spacer regions, NTS）、内部转录间隔区（internal transcribed spacer region, ITS）和3种核糖体基因编码区（18S、5.8S、28S）组成,不同区域其进化速率不同。线粒体为母系遗传,其基因间很少重组,所以可以反映出母系的进化历史,这样线粒体一个基因就可以代表整个线粒体基因组的变异情况。因此,我们以土耳其斯坦东毕吸虫核糖体内转录间隔区（ITS）序列、28S核糖体DNA大亚基序列（28S ribosomal DNA large-subunit sequences, 28S rDNA-LSU）、线粒体细胞色素c氧化酶亚基1（cytochrome c oxidase subunit 1 gene, cox1）基因和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚基1（nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase subunit 1 gene, nad1）基因为研究对象,对目的片段进行克隆和序列测定,构建分子系统发生树,探讨土耳其斯坦东毕吸虫在裂体科中的系统发生位置。从自然感染黄牛、绵羊、绒山羊和山羊的肝门静脉及肠系膜静脉内采集虫体,经形态学鉴定为土耳其斯坦东毕吸虫。以SDS-蛋白酶K法抽提不同终末宿主的土耳其斯坦东毕吸虫基因组DNA,根据GenBank上发表的土耳其斯坦东毕吸虫及相关血吸虫序列,利用Oligo6.0软件设计特异引物,PCR扩增ITS区序列、28S rDNA-LSU序列、线粒体cox1基因和nad1基因,扩增产物经纯化后克隆于pMD18-T载体,转化到JM109感受态细胞,提取质粒DNA,经PCR和双酶切鉴定后,阳性质粒测序,应用DNAStar软件比较不同终末宿主土耳其斯坦东毕吸虫核苷酸序列的同源性,并应用DNAMAN软件分析28S rDNA-LSU序列RNA二级结构的改变情况。检索GenBank,查找血吸虫相关基因序列,应用Clustal X1.83软件对相关序列进行排序,提交引导树,使用MEGA软件采用邻接法（neighbor-joining method, NJ）和最大简约法（maximum parsimony method, MP）,绘制系统发生树。序列分析结果表明,土耳其斯坦东毕吸虫核糖体ITS区序列、28S rDNA-LSU序列、线粒体cox1编码基因、nad1编码基因大小分别为874 bp,1 304 bp,1 125 bp和518 bp;不同终末宿主土耳其斯坦东毕吸虫ITS区序列、28S rDNA-LSU序列、cox1基因序列和nad1基因序列存不同程度的差异,绵羊、绒山羊和山羊源土耳其斯坦东毕吸虫28S rDNA-LSU序列RNA二级结构相同或相似,黄牛源与羊源土耳其斯坦东毕吸虫28S rDNA-LSU序列RNA二级结构存在较大差异。以肝片形吸虫作外群,基于核糖体ITS区序列、28S rDNA-LSU序列、线粒体cox1基因序列和nad1基因序列采用NJ法和MP法构建的系统发生树,其结果一致,均显示土耳其斯坦东毕吸虫的分类地位处于裂体属内,同时土耳其斯坦东毕吸虫归属非洲血吸虫种群。
魏佳[5]（2006）在《土耳其斯坦东毕吸虫肌动蛋白基因的克隆和磷酸丙糖异构酶基因的克隆及表达》文中认为东毕吸虫病是由分体科东毕属的各种吸虫寄生于牛、羊等哺乳动物的门静脉和肠系膜静脉而引起的一种血吸虫病。该病在我国分布极其广泛，给畜牧业带来极大经济损失。同时东毕吸虫的尾蚴可使人患尾蚴性皮炎，也称稻田皮炎，严重影响人类的身体健康，是一种非常重要的人畜共患寄生虫病。 目前对东毕吸虫病的防制还存在诸多困难，首先，实践证明通过杀灭血吸虫的中间宿主——螺类来防治血吸虫感染的效果是不明显的；其次，通过吡喹酮治疗血吸虫病虽然效果很好，但也存在治疗费用高、不能防止重复感染以及耐药性的产生等缺点，现普遍认为有必要研究血吸虫的疫苗来预防此病。本研究克隆了土耳其斯坦东毕吸虫肌动蛋白基因（ACTIN）和磷酸丙糖异构酶基因（TPI）的全长序列，并将磷酸丙糖异构酶基因在毕赤酵母中高效表达。 首先，根据日本血吸虫和曼氏血吸虫肌动蛋白基因和磷酸丙糖异构酶基因核苷酸序列的保守区设计引物，利用RT-PCR从土耳其斯坦东毕吸虫成虫总RNA分别扩增ACTIN和TPI的中间大片段，再根据已知序列利用5RACE和3RACE技术分别扩增出ACTIN和TPI的5’和3’端，将三段序列拼接得到ACTIN和TPI的全长cDNA序列并登录GeneBank，登录号为：ACTIN为DQ017265，TPI为DQ092331。 其次，根据TPI全长cDNA序列设计两条加有EcoR I和Not I酶切位点的引物，利用RT-PCR扩增TPI全长序列并克隆到pMD18-T载体，EcoR I和Not I双酶切重组载体pMD18-T／TPI后将获得的全长TPI亚克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9k构成重组表达载体pPIC9k／TPI，Sal I酶切重组表达载体pPIC9k／TPI后电击转化到酵母菌株GS115感受态细胞中，用组氨酸缺陷培养基和G418依次筛选多拷贝质粒整合的毕赤酵母菌株。重组酵母细胞在含甲醇的培养基中分泌表达目的蛋白，培养3d后收取上清，SDS-PAGE显示表达的蛋白分子量为43kDa，进行westernblot分析结果表明该蛋白被自然感染东毕吸虫的绵羊血清所识别。蛋白表达时相分析表明，甲醇诱导72h蛋白表达产量最高。表达产物通过葡聚糖凝胶G-75层析柱纯化，测定蛋白浓度为1200mg／L。 最后，用纯化的蛋白免疫新西兰大白兔，ELISA分析结果表明：空白组的抗体水平一直处于平稳的状态，而免疫组在免疫后抗体水平呈现不断上升的趋势，一次免疫组和加强免疫组的抗体水平均在第四周达到峰值，但加强免疫组较一次免疫组的免疫效果好。由此可见，TPI蛋白具有一定的免疫原性，可以作为东毕吸虫疫苗的候选基因。
魏佳,何国声,姚宝安[6]（2005）在《东毕吸虫病的研究进展(综述)》文中指出从东毕吸虫病的病原、流行病学、临床症状及病理变化等方面对东毕吸虫病的病原分类、虫体形态和生活史、流行病学特点、诊断防治等方面的研究进展进行了综述。
邢继兰[7]（2004）在《土耳其斯坦东毕吸虫cDNA文库的构建及原肌球蛋白基因的克隆和表达》文中研究说明东毕吸虫病（orientobilharziasis）是由东毕属吸虫寄生于牛、羊等多种动物的门静脉和肠系膜静脉内引起的一种血吸虫病，其尾蚴也可感染人类引起尾蚴性皮炎（cercarial dermatitis），是一种重要的人兽共患寄生虫病。我国以土耳其斯坦东毕吸虫为主，该病在我国分布广泛，常呈地方和季节性流行，严重危害人们的健康并给畜牧业带来巨大经济损失。由于东毕吸虫感染人后特殊的发育过程，从而引起了人们广泛关注。目前东毕吸虫研究相对滞后于曼氏、日本血吸虫，因此深入研究东毕吸虫就显得尤为重要。 本文利用SMART cDNA文库构建试剂盒成功构建了土耳其斯坦东毕吸虫成虫cDNA文库。采用RT-PCR结合RACE和已构建的cDNA文库克隆了土耳其斯坦东毕吸虫原肌球蛋白（tropomyosin，TM）基因，提交GenBank，登录号为AY560898。TM部分编码序列亚克隆至原核表达载体pET28a（+），重组质粒pET28-TM在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达出可溶性融合蛋白，其分子量为37.5KDa左右，利用Ni-NTA亲和层析纯化目的蛋白。Western-blotting结果表明纯化蛋白可以识别自然感染东毕吸虫的山羊血清；将纯化蛋白与法国Montanide ISA 206佐剂等体积混合免疫家兔，并收集血清到免疫后第10周。Western-blotting结果表明纯化蛋白可以被特异性免疫后血清识别，表明纯化蛋白可以刺激实验兔产生抗TM抗体。ELISA结果表明抗体在第5周时达到峰值，从第7周到第10周抗体一直保持较高水平。原肌球蛋白较好的免疫原性表明其在疫苗和诊断试剂研制方面有重要的应用前景。上述结果为进一步研究东毕吸虫病的免疫提供重要的基础。
王春仁[8]（2003）在《黑龙江省牛羊东毕吸虫病综合防制技术的研究》文中研究说明东毕吸虫病（Orientobilharziasis）是由东毕属吸虫（Orientobilharzia sp.）寄生于牛、羊等动物的门静脉和肠系膜静脉引起的一种血吸虫病，主要分布于亚洲和欧洲，我国有23个省（市）自治区发生此病。关于东毕吸虫病的流行情况，印度、伊朗及我国的吉林、四川、陕西等地曾有报道，但不同的地理位置，其流行情况不同，因此本研究对黑龙江省牛、羊东毕吸虫病的流行情况进行了调查。结果表明，按照传统分类法，黑龙江省有三种东毕吸虫，即土耳其斯坦东毕吸虫（O.turkestanica）、土耳其斯坦东毕吸虫结节变种（O.turkestanica var.tuberculata）和程氏东毕吸虫（O.cheni）；中间宿主有耳萝卜螺（Radix auricularia）、卵萝卜螺（R.ovata）和小土窝螺（Galba pervia）三种；该病为黑龙江省牛、羊的主要寄生虫病，其平均感染率分别为43.97％（714／1624）和61.98％（1503／2425），齐齐哈尔地区感染最为严重，牛、羊的平均感染率分别达到62.73％（345／550）和76.93％（1017／1322）。大庆、绥化、哈尔滨、北安地区感染率也较高，佳木斯、黑河、鸡西地区属零星发生，牡丹江地区未检出。本试验对在黑龙江省牛、羊体内检出的在光镜下鉴定为土耳其斯坦东毕吸虫结节变种和程氏东毕吸虫的二种虫体进行了体表扫描电镜观察，同时与唐崇惕所作土耳其斯坦东毕吸虫体表扫描电镜结果进行了比较和分析，初步认定程氏东毕吸虫与土耳其斯坦东毕吸虫结节变种为同一种，与土耳其斯坦东毕吸虫可能是同物异名或为其亚种或地域株。 东毕吸虫病防制的关键在于早期特异性诊断和有效治疗药物的研制。本研究建立了牛、羊东毕吸虫病早期特异性诊断方法——斑点金渗滤试验（DIGFA）。结果表明，该法具有操作简单、敏感性高，特异性强及检出时间早等优点。与剖检法相比，阳性符合率为98.53％（67／68），阴性符合率为97.78％（44／45），与肝片吸虫阳性血清有2.86％（1／35）的交叉反应，与鹿前后盘吸虫、胰阔盘吸虫阳性血清未产生交叉反应；该法与ELISA一样都可在人工感染后第7天检出抗体。试验结果经X2检验，DIGFA与沉淀法和孵化法比较，差异显着（P＜0.01），与ELISA相比差异不显着（P＞0.05）；在治疗药物研制方面，本研究以吡喹酮为主要原料，经复方配合，研制出7.5％复方吡喹酮注射液。采用15mg／kg体重的剂量对绵羊进行驱虫试验，东毕吸虫的虫卵转阴率和虫卵减少率分别为85％和95.69％，与口服40mg／kg体重用药的疗效相似，节约药量62.5％，同时该药对绵羊体内的消化道线虫、莫尼茨绦虫也有很强的驱除作用，是一种高效、广谱、低毒的驱虫药。 本研究通过对黑龙江省牛、羊东毕吸虫病的流行情况、东毕吸虫虫种的分类地位、诊断方法及治疗药物的研究，基本摸清了黑龙江省牛、羊东毕吸虫的种类、感染率、感染强度、地理分布特征以及中间宿主螺的种类、消长规律和三种东毕吸虫之间的分类关系；建立了良好的诊断方法、研制了有效的治疗药物。这对控制黑龙江省东毕吸虫病，有十分重要的意义。
包金权,褚世新,魏广祥[9]（2000）在《绵羊东毕吸虫胎盘感染四例》文中研究指明东毕吸虫病在我国流行区域广,在东三省及内蒙古疫情十分严重,牛羊感染东毕吸虫病生长迟缓,消瘦、贫血、甚至造成大批死亡。是制约东北地区畜牧业发展的主要寄生虫病之一。1998年11月14日,双辽市玻璃山乡河心村养羊户有4只妊娠母羊死亡,经解剖后发现肠系膜静脉中有大量东毕...
二、绵羊东毕吸虫胎盘感染四例（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、绵羊东毕吸虫胎盘感染四例（论文提纲范文）
（1）东毕吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶生物特性的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 东毕吸虫病的现状 |
| 1.1.1 东毕吸虫病的危害 |
| 1.1.2 东毕吸虫病的防治 |
| 1.2 寄生虫氧化还原系统 |
| 1.2.1 生物体的氧化还原系统 |
| 1.2.2 寄生虫氧化还原系统 |
| 1.2.3 硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶 |
| 1.2.4 谷胱甘肽(GSH)系统 |
| 1.2.5 超氧化物歧化酶(SOD)系统 |
| 1.2.6 硫氧还蛋白(Trx)系统 |
| 第二章 东毕吸虫不同宿主适宜性观察 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 耳萝卜螺的饲养 |
| 2.3.2 土耳其斯坦东毕吸虫毛蚴孵化与耳萝卜螺感染 |
| 2.3.3 土耳其斯坦东毕吸虫尾蚴的释放、收集与终末宿主的感染 |
| 2.3.4 粪便毛蚴孵化检查 |
| 2.3.5 感染宿主的不同组织虫卵计数 |
| 2.3.6 兔子感染不同时间虫体发育情况统计 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 不同实验动物感染东毕吸虫的情况统计 |
| 2.4.2 兔子在感染后不同时间的虫体发育情况 |
| 2.4.3 兔子在感染后不同时间的虫卵分布情况 |
| 2.4.4 东毕吸虫不同时期虫体观察 |
| 2.5 讨论 |
| 第三章 东毕吸虫TGR的克隆表达和纯化 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 主要仪器和实验试剂配制 |
| 3.2.2 菌株和质粒 |
| 3.2.3 试剂的配制 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 东毕吸虫总RNA的提取和反转录 |
| 3.3.2 东毕吸虫TGR序列的生物信息学分析 |
| 3.3.3 OtTGR基因的扩增和pET-28a(+)-OtTGR表达质粒的构建 |
| 3.3.4 pET-28a(+)-OtTGRsec表达质粒构建 |
| 3.3.5 rOtTGR和 rOtTGRsec的表达和纯化 |
| 3.3.6 rOtTGR多克隆抗体的制备与免疫组织化学实验 |
| 3.3.7 蛋白免疫印记实验(Western blot) |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 OtTGR、OtTGRsec基因的克隆及pET28a(+)-OtTGRsec和 p ET28a(+)-Ot TGR的重组质粒构建与鉴定 |
| 3.4.2 OtTGR的生物信息学分析 |
| 3.4.3 rOtTGR和 rOtTGRsec的表达和纯化 |
| 3.4.4 rOtTGR蛋白免疫印迹与重组蛋白的质谱鉴定 |
| 3.4.5 OtTGR的免疫组织化学结果 |
| 3.4.6 免疫小鼠抗体效价的测定 |
| 3.5 讨论 |
| 第四章 东毕吸虫TGR的酶特性研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 主要试剂 |
| 4.2.2 主要仪器 |
| 4.2.3 主要试剂的配制 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 rOtTGRsec硫氧还蛋白还原酶(TrxR)的活性检测 |
| 4.3.2 rOtTGRsec谷胱甘肽还原酶(GR)的活性检测 |
| 4.3.3 rOtTGRsec谷氧还蛋白(Grx)的活性检测 |
| 4.3.4 抑制剂对rOtTGRsec TrxR酶活性的抑制作用 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 rOtTGRsec TrxR的酶活性 |
| 4.4.2 rOtTGRsec GR的酶活性 |
| 4.4.3 rOtTGRsec Grx的酶活性 |
| 4.4.4 抑制剂对rOtTGRsec的 TrxR酶活性的抑制作用 |
| 4.5 讨论 |
| 第五章 东毕吸虫TGR的体外干扰及抑制实验 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.2.1 生物材料 |
| 5.2.2 试剂 |
| 5.2.3 仪器 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 东毕吸虫收集 |
| 5.3.2 东毕吸虫培养 |
| 5.3.3 体外干扰东毕吸虫虫体实验 |
| 5.3.4 虫体RNA提取 |
| 5.3.5 qPCR分析干扰结果 |
| 5.3.6 Western blot分析siRNAs干扰OtTGR后的蛋白表达水平 |
| 5.3.7 LGM35 对东毕吸虫成虫的抑制效果评价 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.4.1 siRNAs干扰后OtTGR的转录水平 |
| 5.4.2 siRNAs干扰OtTGR后的蛋白表达分析 |
| 5.4.3 LGM35 对东毕吸虫成虫的杀伤效果评价 |
| 5.5 讨论 |
| 第六章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（2）土耳其斯坦东毕吸虫线粒体基因组的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 土耳其斯坦东毕吸虫及东毕吸虫病 |
| 1.2 裂体血吸虫线粒体基因的研究进展 |
| 1.3 研究的目的和意义 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 土耳其斯坦东毕吸虫各基因序列PCR 扩增及阳性质粒的PCR 鉴定 |
| 3.2 土耳其斯坦东毕吸虫线粒体全基因特征 |
| 3.3 序列分析 |
| 3.4 进化分析 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 土耳其斯坦东毕吸虫线粒体基因组的结构特征 |
| 4.2 蛋白编码基因特征 |
| 4.3 核糖体编码基因 |
| 4.4 TRNA 编码基因 |
| 4.5 非编码区 |
| 4.6 系统发生 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 作者简历 |
（3）东毕吸虫病ELISA诊断方法的建立（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 东毕吸虫病研究进展 |
| 1.2 东毕吸虫分子生物学研究进展 |
| 1.3 血吸虫诊断抗原基因的研究进展 |
| 1.4 研究目的和意义 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 信号蛋白 14-3-3 基因中间片段的克隆 |
| 3.2 东毕吸虫信号蛋白14-3-3 基因5’端和3’端的克隆 |
| 3.3 东毕吸虫信号蛋白 14-3-3 全长序列的克隆 |
| 3.4 东毕吸虫信号蛋白 14-3-3 基因的表达 |
| 3.5 临床样本检测 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 目的基因的选择 |
| 4.2 RACE 技术的选择 |
| 4.3 RNA 的提取 |
| 4.4 表达系统的选择 |
| 4.5 其他 |
| 4.6 ELISA 条件的摸索 |
| 4.7 ELISA 方法的临床应用 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 作者简历 |
（4）土耳其斯坦东毕吸虫分子种系发生的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 引言 |
| 1.1 东毕吸虫与东毕吸虫病研究进展 |
| 1.2 血吸虫分类和遗传变异的研究进展 |
| 1.3 标记基因的研究进展 |
| 1.4 研究的目的和意义 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 虫体的鉴定 |
| 3.2 土耳其斯坦东毕吸虫各基因序列PCR 扩增及阳性质粒鉴定 |
| 3.3 测序 |
| 3.4 序列分析 |
| 3.5 土耳其斯坦东毕吸虫285 RDNA-LSU 序列RNA 二级结构分析 |
| 3.6 基于土耳其斯坦东毕吸虫各基因序列构建的系统发生树 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 遗传标记的选择 |
| 4.2 遗传标记的序列分析 |
| 4.3 关于RNA 二级结构进行分析 |
| 4.4 关于系统发生树构建方法 |
| 4.5 土耳其斯坦东毕吸虫系统发生树 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录一 |
| 附录二 |
| 个人简历 |
（5）土耳其斯坦东毕吸虫肌动蛋白基因的克隆和磷酸丙糖异构酶基因的克隆及表达（论文提纲范文）
| 目录 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表 |
| 1.前言 |
| 1.1 文献综述 |
| 1.1.1 东毕吸虫病研究进展 |
| 1.1.2 血吸虫肌动蛋白研究进展 |
| 1.1.3 血吸虫磷酸丙糖异构酶研究进展 |
| 1.2 研究的目的和意义 |
| 2.材料和方法 |
| 2.1 材料与试剂 |
| 2.1.1 主要仪器 |
| 2.1.2 试验材料 |
| 2.1.3 主要试剂及试剂盒 |
| 2.1.4 主要试剂及配制 |
| 2.2 技术路线图 |
| 2.3 肌动蛋白基因和磷酸丙糖异构酶基因全长序列的克隆 |
| 2.3.1 肌动蛋白基因和磷酸丙糖异构酶基因中间大片段的克隆 |
| 2.3.2 肌动蛋白基因5’端和磷酸丙糖异构酶基因5’端的克隆 |
| 2.3.3 肌动蛋白基因3’端和磷酸丙糖异构酶基因3’端的克隆 |
| 2.3.4 肌动蛋白基因和磷酸丙糖异构酶基因全长序列的拼接 |
| 2.4 磷酸丙糖异构酶基因在毕赤酵母中的表达 |
| 2.4.1 磷酸丙糖异构酶全长基因的克隆 |
| 2.4.2 重组表达载体的构建 |
| 2.4.3 重组质粒的转化和筛选 |
| 2.4.4 蛋白诱导表达 |
| 2.4.5 表达产物的生物特性鉴定 |
| 2.5 表达产物的纯化及蛋白浓度的检测 |
| 2.5.1 表达产物的纯化 |
| 2.5.2 蛋白浓度的检测 |
| 2.6 免疫效果分析 |
| 2.6.1 免疫程序 |
| 2.6.2 酶联免疫吸附试验 |
| 3.结果与分析 |
| 3.1 肌动蛋白基因和磷酸丙糖异构酶基因全长序列的克隆 |
| 3.1.1 肌动蛋白基因和磷酸丙糖异构酶基因中间大片段的克隆 |
| 3.1.2 肌动蛋白基因5’端和磷酸丙糖异构酶基因5’端的克隆 |
| 3.1.3.肌动蛋白基因3’端和磷酸丙糖异构酶基因3’端的克隆 |
| 3.1.4 肌动蛋白基因和磷酸丙糖异构酶基因全长序列的拼接 |
| 3.2.磷酸丙糖异构酶基因在毕赤酵母中的表达 |
| 3.2.1 磷酸丙糖异构酶全长基因的克隆 |
| 3.2.2 重组表达载体的构建、转化及筛选 |
| 3.2.3 蛋白诱导表达 |
| 3.2.4 表达产物的生物特性鉴定 |
| 3.3 表达产物的纯化及蛋白浓度的检测 |
| 3.4 免疫效果分析 |
| 3.4.1 酶联免疫吸附试验 |
| 4.讨论 |
| 4.1 RNA质量对RACE的影响 |
| 4.2 TPI蛋白在毕赤酵母中表达的研究 |
| 4.2.1 毕赤酵母表达系统 |
| 4.2.2 TPI蛋白在毕赤酵母中表达 |
| 4.3 纯化TPI蛋白的免疫和抗体消长水平的检测 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
（6）东毕吸虫病的研究进展(综述)（论文提纲范文）
| 1 东毕吸虫病病原 |
| 2 东毕吸虫病的流行病学 |
| 3 东毕吸虫的临床症状及病理变化 |
| 4 东毕吸虫病的诊断及防制 |
| 4.1 病原检查 |
| 4.1.1粪便水洗沉淀法 |
| 4.1.2沉淀集虫法 |
| 4.1.3毛蚴孵化法 |
| 4.2 免疫检测 |
| 4.2.1血凝试验 (Indirect Haemagglutination, IHA) |
| 4.2.2酶联免疫吸附试验 (ELISA) |
| 4.2.3酶联免疫印渍技术 (ELIB) |
| 4.2.4斑点免疫金渗漏法 (DIGFA) |
| 4.3 关于东毕吸虫的治疗 |
| 4.5 东毕吸虫的预防 |
| 4.5.1定期驱虫 |
| 4.5.2杀灭中间宿主——螺类 |
| 4.5.3加强畜粪管理 |
| 4.5.4加强饲养卫生管理 |
| 4.5.5安全期放牧 |
| 5 东毕吸虫的分子生物学研究 |
| 6 展 望 |
（7）土耳其斯坦东毕吸虫cDNA文库的构建及原肌球蛋白基因的克隆和表达（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 1 东毕吸虫和东毕吸虫概述 |
| 2 东毕吸虫病的诊断和防治 |
| 3 东毕吸虫分子生物学方面的研究 |
| 第一部分 土耳其斯坦东毕吸虫cDNA文库的构建 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要工具酶 |
| 1.4 主要溶液的配制 |
| 1.5 主要仪器 |
| 1.6 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 总RNA的提取 |
| 2.2 双链cDNA鉴定结果 |
| 2.3 文库重组率的PCR鉴定结果 |
| 3 结论 |
| 第二部分 土耳其斯坦东毕吸虫原肌球蛋白基因的克隆与表达 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 2.1 总RNA的提取 |
| 2.2 反转录(RT) |
| 2.3 原肌球蛋白基因(tropomyosin，TM)中间大片段的克隆 |
| 2.4 用5’-RACE(Rapid amplify cDNA end)克隆TM基因的5’端序列 |
| 2.5 TM基因的3’端克隆 |
| 2.6 TM基因全序列的拼接 |
| 2.7 TM中间大片段的原核表达和动物免疫研究 |
| 3 结果 |
| 3.1 原肌球蛋白基因TM中间大片段的克隆 |
| 3.2 重组质粒pGEM-TM和pET28-TM的鉴定 |
| 3.3 TM基因3’端序列克隆 |
| 3.4 5’RACE克隆TM基因的5’端序列 |
| 3.5 TM全长基因的拼接 |
| 3.6 重组菌pET28-TM／BL21的诱导表达和纯化 |
| 3.7 蛋白的纯化 |
| 3.8 纯化的目的蛋白Western-blotting检测 |
| 3.9 琼脂糖凝胶扩散试验 |
| 3.10 原肌球蛋白抗体的消长规律初步研究 |
| 4 结论 |
| 全文讨论 |
| 1 关于cDNA文库构建 |
| 2 关于原肌球蛋白全长基因的克隆和表达 |
| 3 关于纯化的TM蛋白的免疫和抗体消长规律的初探 |
| 全文小结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 1 cDNA文库构建的原理和流程 |
| 2 TM基因克隆和表达的技术路线图 |
| 3 pGEM-T easy vector图谱 |
| 4 pET28a(+)表达载体图谱 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（8）黑龙江省牛羊东毕吸虫病综合防制技术的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 引言 |
| 1.1 项目研究的目的和意义 |
| 1.2 东毕吸虫及东毕吸虫病研究进展 |
| 1.2.1 东毕属的建立与分类 |
| 1.2.2 东毕吸虫病的流行病学 |
| 1.2.3 东毕吸虫病的免疫诊断 |
| 1.2.4 东毕吸虫病的治疗 |
| 1.3 亟待解决的问题 |
| 1.3.1 东毕属吸虫的分类问题 |
| 1.3.2 东毕吸虫病免疫诊断抗原问题 |
| 1.3.3 东毕吸虫病的治疗问题 |
| 1.4 本研究课题的来源及主要研究内容 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器和试剂 |
| 2.2 黑龙江省东毕吸虫中间宿主调查 |
| 2.3 黑龙江省牛羊东毕吸虫种类调查 |
| 2.3.1 光镜形态学观察 |
| 2.3.2 成虫体表扫描电镜观察 |
| 2.4 黑龙江省牛羊东毕吸虫病感染情况与地理分布特征 |
| 2.4.1 水洗沉淀法和毛蚴孵化法 |
| 2.4.2 局部蠕虫剖检法 |
| 2.4.3 斑点免疫金渗滤试验 |
| 2.5 东毕吸虫病的诊断 |
| 2.5.1 DIGFA方法的建立 |
| 2.5.2 DIGFA准确性和特异性试验 |
| 2.5.3 DIGFA敏感性检查 |
| 2.5.4 DIGFA重复性检查 |
| 2.5.5 DIGFA稳定性检查 |
| 2.5.6 DIGFA与其它诊断法的比较 |
| 2.6 东毕吸虫病治疗药物的研制与药效试验 |
| 2.6.1 复方吡喹酮注射液的研制 |
| 2.6.2 复方吡喹酮注射液的检测 |
| 2.6.3 复方吡喹酮注射液安全性试验 |
| 2.6.4 复方吡喹酮注射液对羊东毕吸虫及其它寄生虫的驱杀试验 |
| 3 结果 |
| 3.1 中间宿主 |
| 3.2 东毕吸虫种类 |
| 3.3 牛羊东毕吸虫感染情况及地理分布 |
| 3.4 DIGFA诊断结果 |
| 3.5 东毕吸虫病治疗药物的研制与药物试验结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 关于东毕属三种吸虫的分类地位 |
| 4.2 东毕吸虫病在黑龙江省的流行情况 |
| 4.3 关于东毕吸虫的中间宿主 |
| 4.4 关于诊断方法 |
| 4.5 关于治疗药物 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、绵羊东毕吸虫胎盘感染四例（论文参考文献）
- [1]东毕吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶生物特性的初步研究[D]. 岳永程. 中国农业科学院, 2021
- [2]土耳其斯坦东毕吸虫线粒体基因组的研究[D]. 王宇. 黑龙江八一农垦大学, 2010(08)
- [3]东毕吸虫病ELISA诊断方法的建立[D]. 陈佳. 黑龙江八一农垦大学, 2009(S2)
- [4]土耳其斯坦东毕吸虫分子种系发生的研究[D]. 李利. 黑龙江八一农垦大学, 2008(09)
- [5]土耳其斯坦东毕吸虫肌动蛋白基因的克隆和磷酸丙糖异构酶基因的克隆及表达[D]. 魏佳. 华中农业大学, 2006(02)
- [6]东毕吸虫病的研究进展(综述)[J]. 魏佳,何国声,姚宝安. 河北科技师范学院学报, 2005(01)
- [7]土耳其斯坦东毕吸虫cDNA文库的构建及原肌球蛋白基因的克隆和表达[D]. 邢继兰. 中国农业科学院, 2004(04)
- [8]黑龙江省牛羊东毕吸虫病综合防制技术的研究[D]. 王春仁. 东北农业大学, 2003(03)
- [9]绵羊东毕吸虫胎盘感染四例[J]. 包金权,褚世新,魏广祥. 中国兽医寄生虫病, 2000(01)