一、Caspase蛋白酶活化在牛磺酸脱氧胆酸诱导HepG2细胞凋亡中的作用（论文文献综述）
高强[1]（2021）在《星蒌承气汤治疗急性缺血性卒中痰热腑实证机制研究》文中认为急性缺血性脑卒中（Acute Ischemic Stroke,AIS）,即急性脑梗死,中医称缺血性中风,是脑组织因局部的血流循环障碍缺血、缺氧而发生的软化、坏死。目前溶栓是治疗缺血性卒中急性期最快、最有效的方法,但由于适应证严格、时间窗短、出血和再灌注损伤风险高,其临床效果受到限制。基础与临床研究证实,中医药治疗中风独具优势。中医认为痰热腑实证是缺血性中风急性期最为常见的证型,而化痰通腑法代表方星蒌承气汤是治疗中风急性期痰热腑实证的代表性方剂。星蒌承气汤“脑病治肠”、“上病治下”的中医理论与现代医学提出的“菌-肠-脑轴”具有异曲同工之妙。诸多临床试验及系统性综述已证实星蒌承气汤治疗缺血性卒中的确切临床疗效与神经保护作用,但是其效应机制研究尚且不足。因此本文基于网络药理学及肠道微生态理论,深入探讨缺血性中风的肠道微生态机制及化痰通腑法代表方星蒌承气汤治疗中风痰热腑实证的效应机理。目的:基于中医“上病治下”理论与现代医学“菌-肠-脑轴”理论,（1）通过中药网络药理学与分子对接技术全面探讨星蒌承气汤治疗缺血性卒中的多组分、多靶点、多通路机制;（2）明确具有“化痰通腑”作用的星蒌承气汤对急性缺血性中风痰热腑实证小鼠模型的神经保护作用,并验证网络药理学研究的关键靶点与通路;（3）探讨星蒌承气汤对急性缺血性中风痰热腑实证小鼠模型肠道菌群的影响,探讨其治疗中风痰热腑实证“通腑”与“通便”差异的肠道微生态机制;（4）观察星蒌承气汤对伪无菌小鼠急性缺血性中风模型菌-肠-脑轴的影响,验证星蒌承气汤通过直接影响肠道菌群而改善脑卒中预后的假说。方法:（1）借助TCMSP、BATMAN-TCM、ETCM及TCMID等数据库收集星蒌承气汤活性成分及作用靶点,并应用STITCH等对未找到靶点的化合物进行靶点预测。通过6个数据库挖掘缺血性卒中的靶点。通过GO和KEGG富集对交集靶点进行高级功能分析,并用cytoscape3.6.0构建PPI、化合物-靶点及药物-靶点-通路网络。最后进行分子对接验证。（2）雄性C57BL/6小鼠随机分为:假手术（Sham）组、模型（MCAO）组、星蒌承气汤（XCD）组、尼莫地平（Nim）组及舒泰清（PGE）组,通过制备高脂低纤维饮食复合线栓法的小鼠急性缺血性中风痰热腑实证模型,采用神经功能评分、除胶实验、TTC和TUNNEL染色,综合评价星蒌承气汤的神经保护作用,并运用ELISA、W estern blot等技术验证网药关键靶点与通路;（3）雄性C57BL/6小鼠随机分为:Sham组、MCAO组、XCD组、Nim组与PG E组,通过制备高脂低纤维饮食复合线栓法的小鼠急性缺血性中风痰热腑实证模型,采用高通量16srDNA基因测序、代谢组学技术、免疫组化、免疫荧光、ELISA及流式多因子技术分别对肠道菌群、短链脂肪酸（SCFAs）及其受体GPR43、神经-内分泌-免疫途径相关指标（NE及TH、血清MTL、脑IBA-1及GFAP、血清炎症因子）进行分析;（4）雄性C57BL/6小鼠在术前14天服用多种抗生素剔除肠道菌群后,随机分为:伪无菌假手术（ABX-Sham）组、伪无菌模型（ABX-MCAO）组以及伪无菌中药（ABX-XCD）组,通过神经功能评分、除胶实验、TTC染色以及高通量16srDNA基因测序、代谢组学技术、免疫组化、免疫荧光、ELISA及流式多因子技术,观察中药对伪无菌小鼠菌-肠-脑轴相关指标的影响。结果:（1）网络药理学及分子对接结果表明,星蒌承气汤包含51个活性成分及44个治疗缺血性卒中的交集靶点。高级功能分析显示星蒌承气汤抗缺血性卒中的机制与脂多糖介导的信号通路、凋亡过程的调控、炎症反应、内皮屏障的建立以及对脂肪酸的反应有关。星蒌承气汤发挥作用的有10条关键KEGG信号通路。PPI网络分析得到AKT 1,PTGS2,TNF,TP53,CASP3,IL1B等关键靶点。分子对接验证了星蒌承气汤活性成分与关键靶点具有良好的对接能力。（2）星蒌承气汤神经保护作用及对网络药理学关键靶点及通路的影响:①神经功能评分:与MCAO组相比,XCD组及Nim组术后48h及72h Longa评分降低（P<0.05）,PGE组未见变化（P>0.05）。②除胶实验:XCD组和Nim组术后48和72h的接触和去除胶带时间缩短（P<0.05）,PGE组未见变化（P>0.05）。③TTC染色:XCD组梗死面积下降（P<0.05）,Nim组及PGE组未见变化。④TUNNEL:MCAO组梗死区细胞凋亡明显增加,XCD组和Nim组TUNEL阳性染色减少（P<0.05）。⑤网络药理学验证:XCD组及Nim组TNF-α含量具有下降趋势（P>0.05）;XCD组p-AKT、PI3K及NF-κB蛋白表达具有升高趋势。AKT蛋白表达组间未见明显变化（P>0.05）。（3）星蒌承气汤对中风急性期痰热腑实证小鼠菌-肠-脑轴影响:①肠道菌群:与MCAO组相比,XCD组α多样性有升高趋势,Nim组及PGE组无显着变化。β多样性显示MCAO组与Sham组PCoA曲线有显着差异（P<0.05）。MCAO组拟杆与变形杆菌门显着增加,厚壁菌门显着减少;XCD组拟杆菌比例显着降低,疣微菌门显着增加,Nim组变形菌门显着增加,厚壁菌门进一步降低,PGE组菌群组成与MCAO相似,变形杆菌略降低。此外,XCD组Akkermansia比率增加,Nim组Klebsiella增加最为显着,而 PGE 组 Parabacteroides 和Escherichia/Shigella增加较为显着。②SCFAs 及GPR43:MCAO组的SCFAs含量显着降低（P<0.05）,XCD组丁酸含量增加（P<0.05）。XCD组及Nim组GPR43表达显着降低（P<0.05）。③自主神经途径:XCD组NE有下降趋势,PGE组NE有上升趋势（P>0.05）。MCAO组及PGE组TH蛋白表达上升（P<0.05）,XCD组及Nim组TH表达未见显着变化趋势（P>0.05）。④神经内分泌途径:MCAO组MTL显着升高（P<0.05）,PGE组有升高趋势（P>0.05）,XCD组及Nim组MTL显着下降（P<0.05）。⑤免疫途径:MCAO组星形胶质细胞增生、肥大,显着活化,小胶质细胞迅速从“静息态”转变为“激活态”,从梗死周边区域向病变部位募集,而XCD组星形胶质细胞及小胶质细胞活化较MCAO组降低。MCAO 组 TNF-α、IL-17A、IL-22 升高（P<0.05）,而 XCD 和 Nim 组的 IL-10显着升高（P<0.05）,TNF-α、IL-17A 和 IL-22 降低。（4）星蒌承气汤对中风急性期痰热腑实证伪无菌小鼠菌-肠-脑轴影响:①神经保护作用:与ABX-MCAO组相比,ABX-XCD组在Longa评分、除胶实验及TTC染色等方面未见显着变化（P>0.05）。②肠道菌群:ABX-MCAO和ABX-XCD组的α多样性低于ABX-Sham,PCoA分析显示ABX-XCD组肠道菌群的β多样性和组成与AB X-MCAO组相似。相对丰度结果显示,在ABX组中,小鼠的微生物区系均以变形杆菌为特征,这与正常小鼠有显着差异。LEfSe分析显示MCAO组富集了更多的病原体或机会性病原体,包括Bacteroidetes,EscherichiaShigella与Helicobacter,而 XCD富集了Verrucomicrobia和Akkermansia等有益菌群。条件致病菌如Streptococcus,Lact ococcus,Morganella,Klebsiella,Proteobacteria,Enterobacteriaceae 等在 ABX-XCD组富集显着增多。PGE组富集菌群主要有oSelenomonadales、cNegativicutes、gRomboutsia及fPeptostreptococcaceae。③SCFAs 及 GPR43:ABX-XCD 的丙酸显着下降（P<0.05）。ABX-MCAO 组 GPR43 表达显着上调（P<0.05）,ABX-XCD 组 G PR43表达显着降低（P<0.05）。④自主神经途径:ABX-XCD组NE含量未见显着变化（P>0.05）,TH蛋白表达未见显着变化（P>0.05）。⑤神经内分泌途径:ABX-MCAO组MTL升高趋势（P>0.05）,ABX-XCD组MTL未见显着变化（P>0.05）。⑥免疫途径:ABX-XCD组IL-22显着升高（P<0.05）,IL-17A有降低趋势（P>0.05）,余未见显着变化趋势（P>0.05）。ABX-MCAO组星形胶质细胞表达显着升高,小胶质细胞显着活化,ABX-XCD组星形胶质细胞及小胶质细胞活化较ABX-MCAO组有降低趋势。结论:星蒌承气汤对急性缺血性中风痰热腑实证小鼠具有一定神经保护作用,其效应机制具有多成分、多靶点、多通路特点。其对伪无菌小鼠中风模型则未发现确切的脑保护效应,说明其脑保护的部分机制是通过改善肠道微生态实现的。其具体机制包括提高肠道短链脂肪酸,尤其是丁酸含量,增强肠道短链脂肪酸受体GPR43表达,增加血液IL10、减少TNF-α等炎性因子及MTL水平,最终减少梗死区域胶质细胞活化和神经细胞凋亡,从而达到中风脑保护的作用。本研究成果对中风病的临床治疗具有重要的指导意义——对于中风后便秘患者,仅仅“通便”治疗是不够的,需要结合患者的证候特点进行中医药“化痰通腑”治疗,才能取得好的临床效果。
汪戎锦[2]（2021）在《基于代谢组学的刺五加叶治疗缺血性脑卒中作用机制研究》文中进行了进一步梳理缺血性脑卒中作为全球性的公共健康问题,危害着全世界人类的健康,并以其高发病率和高死亡率,引起了科学家们的广泛关注。缺血性脑卒中发生的主要原因为凝结的血栓或栓子阻塞在脑动脉中使大脑供血受限从而引起氧气和营养的供应不足。刺五加叶作为一种可再生资源,因其化学成分以及药效作用与刺五加根相似,被广泛用于脑血管疾病、缺血性心脏病等疾病的治疗。本实验室在前期的研究工作中筛选并制备了刺五加叶的主要活性组分,并采用药效学研究证明了刺五加叶具有抗氧化、抑制细胞损伤以及缺血性脑卒中的保护作用。然而,刺五加叶的化学成分复杂,在体内作用于多个靶点,致使其治疗缺血性脑卒中的整体作用机制研究尚不够深入,目前缺乏系统研究,在一定程度上限制了刺五加叶的开发及应用。代谢组学作为一种系统生物学研究方法,能够对内源性小分子的整体变化进行系统分析,逐渐成为揭示病机复杂疾病的发病机理,和多成分、多靶点药物作用机制的一种强有力工具。因此,本研究围绕脂质异常、神经损伤以及菌群失调等缺血性脑卒中的关键病理环节,采用基于质谱技术的多样本（血清、粪便、尿液、脑组织）代谢组学的研究方法,对刺五加叶治疗缺血性脑卒中的作用机制进行了深入研究,并阐明其科学内涵。主要研究内容包括以下几个方面:1.刺五加叶治疗缺血性脑卒中的血清脂质组学及其神经保护作用研究首先对刺五加叶的主要活性组分进行基于UPLC方法的成分分析。结果表明,刺五加叶的主要活性组分含有有机酸类化合物、黄酮类化合物和糖苷。其次,建立大鼠缺血性脑卒中疾病模型,并给予刺五加叶治疗四周。由于脂质异常、神经损伤、氧化应激和炎症反应是缺血性脑卒中发作的四个主要方面,本文围绕以上四个方面展开了研究。首先,采用基于UPLC-Q-TOF/MS的脂质组学方法,研究缺血性脑卒中发生后大鼠血清脂质的代谢紊乱,以及刺五加叶的调节作用。利用UPLC-Q-TOF/MS采集刺五加叶给药四周后缺血性脑卒中大鼠血清样本的脂质代谢轮廓,结合Progenesis QI软件进行包括多元统计学分析、潜在脂质标记物鉴定以及通路分析在内的数据处理。共鉴定出27种脂质组学生物标记物,包括PC,PE,SM和TG类脂质,分布在各种脂质代谢途径中,包括甘油磷脂、亚油酸、α-亚麻酸、甘油脂、鞘脂和花生四烯酸代谢途径。结果表明,刺五加叶能够调节缺血性脑卒中发生发展过程中出现的脂质代谢紊乱。其次,针对缺血性脑卒中发生时的神经损伤过程,采用UPLC-TQ/MS对大鼠脑组织及血清中10种神经递质进行了定量研究。结果表明,缺血性脑卒中能够导致谷氨酸（Glu）,天冬氨酸（Asp）等兴奋性氨基酸的过度释放,产生神经毒性,还能够增加γ-氨基丁酸（GABA）、五羟色胺（5-HT）、去甲肾上腺素（NE）、肾上腺素（E）、多巴胺（DA）以及牛磺酸（Tau）的含量,并降低抑制性神经递质甘氨酸（Gly）以及神经炎症调节剂乙酰胆碱（Ach）的含量。而给予刺五加叶治疗后,能够使以上神经递质在脑组织和血清中的水平均向正常水平调节,说明其能够通过调节缺血性脑卒中大鼠的神经递质含量发挥保护中枢神经系统的作用。最后,通过MDA和SOD的定量分析,检测缺血性脑卒中后氧化应激程度,通过TNF-α,IL-6和IL-10的定量分析,检测炎症反应程度。结果表明,刺五加叶可以在一定程度上减轻机体的氧化应激和炎症损伤,从而减轻缺血性脑卒中对机体的损伤。从调节脂质代谢紊乱、神经损伤、氧化应激反应以及炎症反应等方面揭示了刺五加叶治疗缺血性脑卒中的作用机制。2.刺五加叶治疗缺血性脑卒中粪便代谢组学研究及其对微生物-肠-脑轴的影响微生物-肠-脑轴双向通讯系统与缺血性脑卒中的发生及预后相互关联,这种关联作用近年来逐渐引起科学家的广泛关注。本文采用基于UPLC-Q-TOF/MS的粪便非靶向代谢组学方法,结合基于UPLC-TQ/MS的粪便胆汁酸靶向代谢组学方法,以及16S r RNA粪便菌群测序,研究了刺五加叶对缺血性脑卒中模型大鼠微生物-肠-脑轴的平衡作用。首先,利用UPLC-Q-TOF/MS采集刺五加叶治疗四周后缺血性脑卒中大鼠粪便样本的代谢轮廓,结合多元统计学分析筛选具有显着差异的潜在生物标记物,并进行通路分析,共鉴定出40个潜在的差异性生物标记物,主要涉及花生四烯酸代谢通路、不饱和脂肪酸的生物合成途径、胆汁酸的生物合成途径、鞘脂代谢通路等。以上生物标记物的含量在缺血性脑卒中发生后具有显着的变化,而刺五加叶可以调节其含量以恢复正常状态。其次,基于UPLC-TQ/MS的靶向代谢组学方法对13种胆汁酸进行了定量分析。结果显示,缺血性脑卒中发生时,大鼠粪便胆汁酸发生代谢紊乱,刺五加叶能够调节多种胆汁酸的含量,使其更加趋近于正常水平。最后,16S r RNA菌群测序结果表明,缺血性脑卒中可导致大鼠肠道内病原体富集,益生菌水平大幅降低,而刺五加叶能够使缺血性脑卒中大鼠体内病原体含量降低,同时增加益生菌水平。上述结果揭示了刺五加叶具有对缺血性脑卒中大鼠微生物-肠-脑轴的调节作用,为阐明刺五加叶治疗缺血性脑卒中的作用机制研究奠定基础。3.刺五加叶通过对益生菌的调节作用治疗缺血性脑卒中的机制验证选择能够被刺五加叶调节的益生菌给药缺血性脑卒中大鼠,验证给药刺五加叶后,益生菌水平的升高是发挥其治疗效果的重要因素之一。首先,培养罗伊氏乳酸杆菌以及丁酸梭菌并制备菌液,分别给予缺血性脑卒中大鼠以上两种菌液。经四周给药后,检测大鼠粪便的菌群组成。结果表明,与模型组比较,益生菌给药后的缺血性脑卒中大鼠粪便中菌群组成与含量产生较大变化,并与对照组大鼠粪便菌群组成更为相似。其次,采用基于UPLC-TQ/MS的定量方法检测缺血性脑卒中大鼠经益生菌给药后,脑组织中神经递质的含量变化。结果表明,给予两种益生菌后,具有神经毒性的神经递质含量降低,而具有神经调节作用的神经递质含量显着升高,更加趋近于健康大鼠。最后,通过ELISA法检测大鼠血清和脑组织中多种炎症因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的含量和脑组织中MDA、SOD、COX-2、MAO的含量。结果表明,当缺血性脑卒中发生时,大鼠体内IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA、COX-2和MAO含量显着升高,而IL-10和SOD含量显着降低。给予两种益生菌后,缺血性脑卒中大鼠体内以上指标的含量均能够被调节至正常水平,推测两种益生菌均能够通过减轻炎症及氧化应激损伤,对机体产生一定的保护作用。本研究验证了刺五加叶能够通过影响微生物-肠-脑轴的代谢,增加体内益生菌丰度,调节卒中引起的神经损伤、炎症反应以及氧化应激损伤,从而起到对机体的保护作用。4.刺五加叶治疗缺血性脑卒中的尿液代谢组学研究尿液样本能够准确、灵敏地反映机体的代谢变化,为代谢组学研究中最重要的生物样本。采用基于UPLC-Q-TOF/MS的非靶向尿液代谢组学方法对刺五加叶治疗缺血性脑卒中的作用机制进行研究并验证。采用UPLC-Q-TOF/MS采集大鼠尿液样本的代谢轮廓,结合Progenesis QI软件进行数据处理,筛选并鉴定潜在生物标记物,构建基因-酶-生物标记物代谢网络。本研究共筛选出42种在缺血性脑卒中疾病进程中具有显着变化的潜在生物标记物,经刺五加叶治疗后,38种生物标记物的含量变化能够被显着调节,涉及体内牛磺酸和次牛磺酸代谢通路、花生四烯酸代谢通路、半胱氨酸和蛋氨酸代谢通路、类固醇激素生物合成途径、色氨酸代谢通路、酪氨酸代谢通路和嘧啶代谢途径等多种代谢途径的调节作用。最后,选择3种与以上通路相关的关键酶COX-2,NOS和MAO作为刺五加叶治疗的靶点酶,进行定量验证。结果表明,模型大鼠经刺五加叶治疗后血清和脑组织中三种酶的含量与假手术组大鼠相似,证明了刺五加叶可以通过调节以上三种酶的含量发挥刺五加叶治疗缺血性脑卒中的作用。本实验结果有助于进一步了解缺血性脑卒中的发病机制,并为刺五加叶的潜在治疗机制研究提供科学依据。5.基于高效同位素标记衍生化的刺五加叶治疗缺血性脑卒中尿液代谢组学研究高效化学同位素标记（CIL）衍生化结合液质联用（LC-MS）的代谢组学方法是使用靶向特定官能团的试剂标记生物样本,使所有具有相同官能团的代谢物生成相应的衍生代谢物,在提高总体代谢组学覆盖率的同时,将同位素引入标记代谢物中,使重同位素试剂衍生的代谢产物作为轻同位素试剂衍生代谢物产物的内标,从而提高代谢产物的定性及定量精度。本研究采用基于CIL LC-MS的刺五加叶治疗大鼠缺血性脑卒中的尿液代谢组学方法,分别对胺/酚类亚代谢组和羧酸类亚代谢组进行分析研究。结果表明,刺五加叶能够通过体内多种通路调节缺血性脑卒中发生后的代谢紊乱,与传统尿液代谢组学研究结果相比,CIL LC-MS法筛选出了更多潜在生物标记物,并覆盖更多体内代谢通路,得到了覆盖率更广、定量更精准的代谢组学结果。同时,在每条通路中匹配到更多的具有显着差异的代谢产物,明确通路中上游化合物及下游产物的显着变化及机制,使针对各通路的研究更加全面。最终,从神经保护、调节能量代谢、抑制炎症损伤、拮抗氧化应激的角度对刺五加叶治疗缺血性脑卒中的作用机制进行系统阐述。进而为刺五加叶治疗缺血性脑卒中的作用机制提供更加全面的科学依据。综上所述,本论文采用基于大鼠血清、粪便、尿液以及脑组织多种生物样本的代谢组学方法,进行刺五加叶治疗大鼠缺血性脑卒中作用机制的系统研究。将尿液和粪便的非靶向代谢组学研究,与血清脂质、脑组织神经递质以及粪便胆汁酸的靶向代谢组学研究相结合,明确刺五加叶对缺血性脑卒中大鼠体内多种代谢通路的调节作用,对脂质紊乱的调节作用,以及对神经系统的保护作用。其次,通过对大鼠粪便的菌群分析和验证实验,阐述刺五加叶可能通过调节微生物-肠-脑轴双向通讯系统发挥缺血性脑卒中的治疗作用,推测刺五加叶增加肠道益生菌含量是其发挥缺血性脑卒中治疗作用的关键因素之一。并采用基于高效同位素标记结合LC-MS的代谢组学方法,对体内胺/酚类亚代谢组及羧酸类亚代谢组进行全面分析,从神经保护、调节能量代谢、抑制炎症损伤、拮抗氧化应激的角度系统阐述刺五加叶治疗缺血性脑卒中的作用机制。本研究结合先进的分析技术手段,探讨中药的作用机制,为阐明刺五加叶治疗缺血性脑卒中的作用机制提供理论依据,同时也为中药作用机制的系统研究提供了新的方法路线。
杜欣[3]（2021）在《牛黄及其有效成分对神经血管单元的保护作用研究》文中提出目的:观察牛黄及其有效成分对体外脑神经血管单元的保护作用,阐明牛黄及其有效成分治疗缺血性中风的内在生物学机制。方法:1.体外脑神经血管单元模型的建立以及缺氧/复氧模型的建立（1）利用体外原代细胞培养技术,提取大脑皮质神经元、星形胶质细胞和微血管内皮细胞,进行细胞鉴定;（2）利用transwell板将三种细胞共培养,构建体外脑神经血管单元的模型,利用TEER值,判定模型是否成功;（3）采用缺氧1h,复氧24h,构建OGD/R模型,利用TEER值、荧光素钠渗透系数判定模型是否成功。2.牛黄及其有效成分对三种细胞的毒性利用不同浓度的牛黄（Bezoar）、牛磺酸（Taurine）、牛黄熊去氧胆酸（TUDCA）和熊去氧胆酸（UDCA）,作用于神经元、星形胶质细胞和内皮细胞,分别干预24h和48 h,利用CCK8检测细胞活力,检测每种不同浓度的药物对细胞的毒性。3.牛黄及其有效成分对脑神经血管单元的保护作用（1）通过OGD/R模型,检测牛黄、牛磺酸、TUDCA和UDCA的不同剂量对细胞的作用,利用CCK8法检测细胞活力,确定每种药物的最佳剂量;（2）利用药物的最佳剂量进行干预,通过检测血脑屏障的通透性:TEER值、荧光素钠渗透系数和γ-GT;炎症细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β;氧化应激指标SOD、NO、MDA以及神经元凋亡率。（3）牛黄对脑神经血管单元的保护机制研究加入抑制剂LY294002,检测牛黄对细胞的干预是通过PI3K/AKT通路实现的;检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3,金属蛋白酶MMP2、MMP9,紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-5 以及 HIF-1α、VEGF、PI3K、AKT、p-AKT。4.不同配伍组分对脑神经血管单元的保护作用（1）利用OGD/R模型,筛选牛磺酸+牛磺熊去氧胆酸（T+T）,牛磺酸+熊去氧胆酸（T+U）的最佳剂量;（2）利用药物的最佳剂量进行干预,通过检测血脑屏障的通透性:TEER值、荧光素钠渗透系数和γ-GT;炎症细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β;氧化应激指标SOD、NO、MDA以及神经元凋亡率。5.配伍组分牛磺酸和熊去氧胆酸对脑神经血管单元的作用机制利用T+U的最佳剂量,进行OGD/R的造模,检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3,金属蛋白酶 MMP2、MMP9,紧密连接蛋白 ZO-1、Occludin、Claudin-5 以及 NF-κBp65,p-P65,IKBα,p-IKBα 蛋白表达。6.配伍组分牛磺酸和牛磺熊去氧胆酸对脑神经血管单元的作用机制利用T+T的最佳剂量,进行OGD/R的造模,检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3,金属蛋白酶MMP2、MMP9,紧密连接蛋白 ZO-1、Occludin、Claudin-5,CA43、AQP4以及 P38MAPK,P-P38MAPK。结果1.获得了纯度较高的神经元、星形胶质细胞和内皮细胞（1）神经元培养7d后成熟,经MAP2免疫荧光鉴定,纯度大于95%;（2）星形胶质细胞培养7d后成熟,经GFAP免疫荧光鉴定,纯度大于95%;（3）内皮细胞培养7d后成熟,经Ⅷ因子免疫荧光鉴定,纯度大于95%。2.利用transwell,建立了脑神经血管单元的模型（1）该模型的电阻值在3-5天趋于平稳;（2）三细胞共培养,三种细胞的状态和单细胞相比,更佳。3.成功复制OGD/R模型利用缺氧1h,复氧24h,能够成功复制OGD/R模型,和正常组相比,模型组电阻值降低,荧光素钠渗透系数升高,能够进行下一步的实验研究。4.筛选药物毒性利用不用浓度的牛黄、牛磺酸、牛磺熊去氧胆酸和熊去氧胆酸分别干预24h和48h,筛选药物的毒性。5.筛选药物的保护剂量利用无毒性的各种药物浓度,通过OGD/R造模方法,检测细胞活力,筛选出保护作用的最佳剂量。6.牛黄及其有效成分对体外脑神经血管单元的保护作用（1）牛黄及其有效成分降低LDH,升高γ-GT,提高TEER值和降低荧光素钠渗透系数;（2）牛黄及其有效成分减少炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1 β的水平;（3）牛黄及其有效成分降低NO、MDA的水平,升高SOD的水平;（3）牛黄及其有效成分抑制神经元的凋亡;（4）牛黄降低MMP2、MMP9的蛋白表达;（5）牛黄能升高紧密连接蛋白的表达,提高ZO-1、Occludin、Claudin-5的蛋白表达;（6）牛黄通过HIF-α/VEGF,PI3K/AKT通路,发挥保护NVU的作用,牛黄降低HIF-1α、VEGF的蛋白表达水平,升高PI3K、AKT的蛋白表达水平。7.不同配伍组分对脑神经血管单元的保护作用（1）筛选了配伍组分的最佳剂量,T+T的最佳剂量1mM Taurine和1μM TUDCA,T+U的最佳剂量1mM Taurine和1μM UDCA;（2）T+T、T+U有效保护血脑屏障,降低TEER值,降低荧光素钠渗透系数,升高γ-GT;（3）T+T、T+U有效减轻细胞损伤,降低LDH的水平;（4）T+T、T+U有效减轻炎症反正,降低TNF-α、IL-6、IL-1β的值;（5）T+T、T+U有效抑制氧化反应,降低NO、MDA的水平,升高SOD的活力;（6）T+T、T+U抑制神经元的凋亡率。8.配伍组分牛磺酸和熊去氧胆酸对脑神经血管单元的作用机制（1）T+U抑制神经元的凋亡率;（2）T+U 提高 ZO-1、Occludin、Claudin-5 的蛋白表达;（3）T+U降低MMP2、MMP9的蛋白表达;（4）T+U降低Bax、Caspase-3蛋白表达,升高Bcl-2蛋白表达;（5）T+U降低MyD88、P-P65、P-IKB α的蛋白表达,通过MyD88/NF-κB信号通路发挥脑保护作用。9.配伍组分牛磺酸和牛黄熊去氧胆酸对脑神经血管单元的作用机制（1）T+T抑制神经元的凋亡率;（2）T+T 提高 ZO-1、Occludin、Claudin-5 的蛋白表达;（3）T+T降低MMP2、MMP9的蛋白表达;（4）T+T降低Bax、Caspase-3蛋白表达,升高Bcl-2蛋白表达;（5）T+U降低AQP4、P38MAPK,升高CX43的蛋白表达。结论（1）牛黄、牛磺酸、TUDCA和UDCA能够减轻炎症反应,降低氧化应激的水平,抑制神经元的凋亡发挥神经保护的作用;（2）牛黄通过HIF-1α/VEGF和PI3K/AKT通路发挥脑保护作用;（3）牛磺酸和牛磺熊去氧胆酸,牛磺酸和熊去氧胆酸配伍,发挥协同作用,比单独使用牛磺酸药效更好;（4）牛磺酸和熊去氧胆酸1000:1的配伍能够抑制炎症反应,降低氧化应激的水平,保护血脑屏障,抑制神经元的凋亡,能够抑制通路MyD88/NF-κB通路发挥脑保护作用（5）牛磺酸和牛磺熊去氧胆酸1000:1的配伍能够抑制炎症反应,降低氧化应激,保护血脑屏障,能够抑制P38MAPK通路,发挥脑保护作用;
樊小瑞[4]（2021）在《高脂饮食对阿尔茨海默症的影响及黄连解毒汤的干预作用》文中进行了进一步梳理阿尔茨海默症（AD）是一种与年龄有关的进行性神经疾病,以脑组织老年斑沉积和神经元内神经元纤维缠结的形成为特征性病理,伴有脑组织萎缩、海马和前脑基底部神经元脱失。AD病因目前仍不明确,一般认为与遗传及环境因素有关。长期高脂饮食被认为与肥胖、高血脂、高血压等疾病密切相关,可增加AD的患病风险,而多元不饱和脂肪酸类的膳食补充会缓解疾病的发展。然而,近期有研究表明血清胆固醇水平与AD发病率无相关性,他汀类降脂药物对于AD病程没有影响,在有血管疾病风险的老年人群中他汀类药物并不能防治认知减退。且在高脂饮食干预的AD动物实验模型中,脑组织Aβ水平无显着影响且可增强血脑屏障功能,减缓脑组织萎缩。由此可见高脂饮食对AD疾病进程的影响存在较大争议,明确高脂饮食在AD病程中的作用,将有助于生活质量的提升,缓解人口老龄化对社会整体资源的需求压力。黄连解毒汤记载于《肘后备急方》,由黄连、黄芩、黄柏、栀子四味药物按3:2:2:3比例配伍而成,复方中活性成分主要有生物碱类、黄酮类及环烯醚萜苷类,包含小檗碱、巴马汀、黄芩苷、黄芩素、京尼平苷等,是历代清热解毒之经典方剂。现代研究表明,黄连解毒汤具有抗炎、抗菌、抗氧化、降脂降糖、抗肿瘤、神经保护等多种药理作用。文献研究和课题组前期实验均表明黄连解毒汤能够减少APP/PS1转基因小鼠中枢Aβ斑块,提高其认知能力,改善小鼠中枢-外周脂质、炎症环境,调节中枢神经递质、氨基酸类及外周胆汁酸的代谢,协同肠道菌群的调节作用从而缓解AD症状。本研究中将继续探讨黄连解毒汤对高脂饮食叠加AD模型小鼠的疗效和作用机理。研究目的本研究主要探讨高脂饮食对阿尔茨海默模型小鼠病程的影响,明确高脂饮食的干预作用并评价黄连解毒汤的药效。从中枢和外周两个角度阐述高脂饮食对机体炎症、胆固醇代谢及肠道菌群的影响,结合转录组学技术分析并发现高脂饮食对阿尔茨海默疾病的具体干预机制及黄连解毒汤的治疗机理。研究方法1.采用高脂饮食长期饲养的APP/PS1小鼠模型,利用水迷宫实验评价高脂饮食干预后APP/PS1小鼠的行为认知能力;随后取小鼠脑组织观察病理变化,HE染色分析脑组织形态,刚果红染色和免疫组化实验展示并统计分析AD典型病理Aβ蛋白沉积状况以及脑组织胶质细胞活化标志物GFAP和MHC class Ⅱ的表达水平。2.利用RT-PCR技术和Elisa实验测定脑组织中IL-6、TNF-α和IL-1β等炎症因子水平,检测脑组织SOD、CAT、GSH-px、NO和MDA含量来评价脑组织氧化应激状态;利用生化分析仪测定外周胆固醇、甘油三酯、低/高密度脂蛋白-胆固醇等血脂水平,采用MSD电化学发光技术检测小鼠血清中炎症因子水平。3.采用气相质谱联用仪检测脑组织胆固醇水平、粪便中短链脂肪酸含量;利用UPLC-QQQ-MS/MS技术建立胆汁酸的测定方法,并检测小鼠血清胆汁酸类物质含量。4.利用RT-PCR技术测定脑组织PPARγ、LXR、ApoE基因的表达水平,Western Blot技术验证脑组织胆固醇代谢相关蛋白PPARγ、LXR、ApoE的表达。5.利用16s rRNA测序技术对小鼠肠道内容物测序并鉴定微生物,分析AD小鼠及高脂饮食干预后AD小鼠肠道菌群的改变;分析黄连解毒汤给药后对肠道菌群的影响。6.对小鼠脑组织样本进行全转录组学研究,测定并分析mRNA、长链非编码RNA、环状RNA和小RNA的差异表达,结合竞争性内源RNA分析,从RNA层面系统揭示高脂饮食对AD小鼠转录调控机制及黄连解毒汤的干预作用。研究结果1.与正常小鼠比较,AD小鼠和高脂叠加AD小鼠均存在认知能力损伤和脑组织Aβ斑块沉积,但AD小鼠和高脂叠加AD小鼠间无显着差异,即高脂饮食对AD认知能力和Aβ斑块沉积均无显着影响。2.在中枢系统,AD小鼠及高脂叠加AD小鼠脑组织均存在明显的炎症及氧化应激反应,但高脂饮食可缓解中枢炎症水平及氧化状态。高脂饮食可显着增加AD小鼠体重、外周血脂水平及炎症因子表达。3.高脂饮食可增加AD小鼠脑组织中胆固醇含量,降低24-羟基胆固醇水平。高脂饮食对外周胆汁酸也有较大的调节作用,可使次级胆汁酸石胆酸显着升高,同时也升高CDCA/CA 比值,及 CDCA 代谢相关产物 UDCA、HDCA、TUDCA、THDCA、GHDCA、TCDCA水平,改变AD小鼠的胆汁酸合成途径。4.AD小鼠脑组织LXR和PPARγ基因水平表达降低,ApoE基因水平表达升高,高脂饮食使AD小鼠ApoE表达显着降低,LXRB和PPARγ显着增加,WB检测发现蛋白水平具有同样的变化趋势。5高脂饮食可使AD小鼠菌群丰度降低,可增加肥胖相关菌丰度,除此之外,可部分重塑肠道微生物结构,高脂饮食可显着回调Bacteroides和Alistipes的变化,其中可显着降低AD小鼠中Alistipes丰度。6.黄连解毒汤可改善高脂饮食叠加AD小鼠认知能力,减少脑组织Aβ沉积,抑制脑组织炎症因子的表达,缓解氧化应激状态,同样可缓解外周炎症,降低外周血脂水平,也可显着降低脑组织胆固醇含量。黄连解毒汤可回调多数高脂饮食引起的胆汁酸水平变化,可显着降低高脂饮食引起的血清CDCA、UDCA、TUDCA、THDCA、GHDCA、TCDCA的增加;黄连解毒汤可升高短链脂肪酸水平,对乙酸、丁酸的调节作用显着。HLJDD高剂量可明显增加群落丰富度,对多种菌种具有回调作用,其中可显着降低Alistipes 丰度。7.APP/PS1小鼠脑组织差异基因富集到的多数通路与神经递质类物质代谢及炎症有关,高脂饮食可引起脑组织基因表达水平的改变进而影响脑组织神经递质类物质的代谢及炎症反应。mmu-miR-450b-3p、mmu-miR-6540-3p可能参与调控脑组织Th、Ddc的表达,miR-551b-5p调控包括Slc18a2、Igfbp3在内的多种基因的表达。PCSK9可促进LDL的降解,AD+HFD组Pcsk9表达的上调可能与其脑组织胆固醇的增加密切相关,而黄连解毒汤可显着下调Pcsk9的表达。结论高脂饮食可使转基因APP/PS1小鼠体重增长显着增快,同时升高外周血脂水平,但未加重AD小鼠典型病理Aβ沉积和认知能力的损伤,相反,高脂饮食可缓解脑组织炎症反应及氧化应激状态。高脂饮食可影响脑组织脂代谢,通过PPARγ-LXR-ApoE通路调节脑组织胆固醇代谢及神经炎症,此外还可部分重塑肠道菌群影响胆汁酸和短链脂肪酸的代谢进而调节中枢代谢。高脂饮食可通过影响脑组织基因表达水平的改变进而影响脑组织胆固醇和神经递质类物质的代谢。黄连解毒汤可改善高脂饮食叠加AD小鼠模型的认知障碍,可能与其改善中枢和外周的脂代谢、抑制炎症反应及增加短链脂肪酸水平有关。
周肸[5]（2021）在《固正消癌方对结肠癌糖代谢作用机制研究》文中研究指明背景:肿瘤细胞的持续高速增殖、不停转移、侵袭,顽强抵抗化疗药物的效用,很大程度上都依赖于其周身所营造的酸性缺氧微环境。此种微环境毫无疑问的会杀伤正常的机体细胞,提供违背规律的能量代谢结果。最早从1924年起,就有着名的医学家Otto Herinrich Warburg针对此非正常代谢形式提出了“Warburg Effect”学说,这种新代谢型编码程序,在现代研究认为是启动肿瘤局部缺氧、酸性环境和畸形无限生长的关键。从糖代谢的角度来切入研究抗肿瘤药品,已经成为目前结肠癌有望治愈的新希望。国医大师周仲瑛教授在长年累月的临床工作中,提炼出了具有中医基础和科学性、实用性为一体的“癌毒理论”。在“祛毒即扶正”的治疗理念下结合中药组方优势形成了集清热解毒、扶正补气、行气活血为一体的消癌解毒方。此方不管是在基础研究还是临床实践中能证实可以实现带癌共存的宗旨。本研究团队在临床运用周老消癌解毒方门诊治疗结肠癌术后患者过程中,经周仲瑛团队的帮助对消癌解毒方予以化裁,演变为固正消癌方。实践观察认为对于结肠癌患者更具有针对性和适用性,大大提高了结肠癌病患的生活质量。目的:从糖代谢及肿瘤微环境视角,探索固正消癌方押制结肠癌细胞的具体机制,从而更深入地巩固“癌毒理论”,发挥中医药抗肿瘤的优势。方法:1.细胞实验:1.1选取HT-29人结肠癌细胞系,将细胞系随机分为四组。即①空白对照组（Control）:细胞接种于含正常大鼠血清的RPMI-1640培养基中培养;②低剂量组（Low）:使用包含10%固正消癌方含药血清的RPMI-1640培养基培养;③中剂量组（Medium）:使用包含20%固正消癌方含药血清的RPMI-1640培养基培养;④高剂量组（High）:使用包含30%固正消癌方含药血清的RPMI-1640培养基培养。观察不同分组培养12h、24h的HT-29细胞Transwell实验情况;测定4个分组干预48h后的葡萄糖含量和乳酸水平、乳酸脱氢酶含量（LDH）、HT-29细胞内、外pH的影响、72h后的各组中ATP的浓度;利用Western Blot检测不同分组下低氧诱导因子1α（HIF-1α）、细胞能量感受器AMPK α1、磷酸化的AMPKα1（p-AMPK α1）、己糖激酶（HK2）;以AnnexinV-FITC/PI双标记法流式细胞术检测HT-29细胞的凋亡率。1.2选取HT-29人结肠癌细胞系,将细胞系随机分为四组。即①空白对照组（Control）:HT-29细胞接种于含正常大鼠血清的RPMI-1640培养基中培养;②高剂量组（High）:使用包含30%固正消癌方含药血清的RPMI-1640培养基培养HT-29细胞;③高剂量合并小分子干扰AMPK（High+Si-AMPK）组:以包含30%固正消癌方含药血清的RPMI-1640培养基与特异性沉默AMPK技术结合,对HT-29细胞共同作用。④高剂量合并AMPK激动剂（High+AMPK activator）组:使用包含30%固正消癌方含药血清的RPMI-1640与AMPK激动剂AICAR共同作用HT-29细胞。计算不同分组下培养24h、48h、72h后细胞的OD值;4个分组下对HT-29细胞进行划痕和Transwell实验观察12h、24h的迁移和侵袭能力;利用Western Blot检测不同分组下HIF-1α、葡萄糖转运蛋白4（Glut4）、凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2以及p53的表达情况。2.动物实验:选取HT-29人结肠癌细胞系构建荷瘤裸鼠模型,随机分为5组,每组8只,雌雄各半。即空白对照组、模型组、低剂量固正消癌方组（5g/kg）、中剂量固正消癌方组（10g/kg）、高剂量固正消癌方组（20g/kg）。药物干预14天,处死裸鼠后进行肝、肾、脾脏的HE染色;瘤体组织的免疫组化检测Cleaved-caspase-3、HIF-1α、HK2、Ki67、p-AMPK α1的表达;利用Western Blot检测瘤体内AMPKα1、p-AMPKα1、HIF-1α、HK2、Glut4蛋白情况;对模型组、低剂量组、高剂量组内裸鼠末次给药后2h取血清进行糖代谢组学液相色谱、质谱联用技术（Liquid ChromatograpH Mass Sepctrometer,LC-MS）分析。结果:1.细胞实验:在细胞体外实验中发现,不同分组药物干预后证实固正消癌方能抑制肿瘤细胞Transwell侵袭、迁移能力;ATP浓度测定结果显示固正消癌方含药血清浓度与ATP的浓度呈反比,固正消癌方含药血清浓度越高,ATP的浓度就越低;当固正消癌方含药血清达到一定药物浓度时,可以降低HT-29细胞对葡萄糖的获取,减慢糖代谢进程;同时,固正消癌方也能相应的降低HT-29细胞产生的乳酸以及限制LDH的表达;固正消癌方含药血清可以下降细胞内的pH值,缩小细胞内外pH差值,且随着固正消癌方含药血清干预浓度的上升而作用效果增强;固正消癌方含药血清可以下调HK2、HIF-1α蛋白的表达,明显激活AMPK的信号通路,调节HT-29细胞的代谢方式;Annexin—FITC/PI流式细胞术亦证实固正消癌方可以呈剂量依赖性方式发挥抑制HT-29细胞增殖的作用。在固正消癌方含药血清对HT-29细胞AMPK通路影响的细胞实验研究结果中可知,High组HT-29细胞的增殖情况弱于High+Si-AMPK组,但是High组HT-29细胞的增殖情况强于High+AMPK activator组,说明固正消癌方含药血清可以通过激活AMPK信号通路作用HT-29细胞,且其抑制肿瘤细胞的程度受活化的AMPK数量的影响;同时,固正消癌方含药血清可以通过激活AMPK通路弱化HT-29细胞的迁移、侵袭能力;High组Western Blot结果显示:Glut4明显表达受到抑制,弱于Control组（P<0.05）;High+Si-AMPK 组的 Glut4 表达强于 High 组（P<0.05）;High+AMPK activator 组的 Glut4 表达又弱于High组。说明,固正消癌方含药血清可以通过AMPK通路调控Glut4蛋白的表达,从而抑制HT-29细胞的糖代谢。High组与Control组的HIF-1α表达量未见差异,High+Si-AMPK组与High组的HIF-1α得表达也未见差异;High+AMPK activator组的HIF-1α表达却明显低于High组（P<0.05）。High组的p53蛋白表达明显高于Control组（P<0.05）,High+AMPK activator组的p53含量亦多于High组（P<0.05）,说明p53依赖于活化的AMPK发挥抗肿瘤作用;而相反地,抑制HT-29细胞中的AMPK,会使得High+Si-AMPK组内p53表达量下凋,影响HT-29细胞的凋亡。High+Si-AMPK组的Bcl-2表达高于High组（P<0.05）,在AMPK被沉默后,HT-29细胞增殖程度会提高。在High+AMPK activator组内的Bax含量高于High组,但无统计学差异;然而,High+AMPK activator组内的Bcl-2表达量低于High组（P<0.05）,可以认为在AMPK活化达到一定程度时能够促进HT-29细胞的凋亡,其结果与AMPK可能影响下游Bcl-2通路有关。2.动物实验在荷瘤裸鼠的体内实验中可知,固正消癌方对肝、脾、肾脏无明显损害;瘤体组织的免疫组化检测显示固正消癌方会下调Ki67、HIF-1α、HK2蛋白及促进Cleaved-caspase-3、p-AMPK α1蛋白的表达,以此通过限制糖代谢来控制瘤体细胞的增殖,促进其凋亡;Western Blot检测显示固正消癌方也同样会激活AMPK通路,限制糖代谢相关酶HIF-1α、HK2、Glut4的表达,磷酸化p53,诱发结肠癌细胞程序性凋亡。模型组、低剂量组、高剂量组内裸鼠血清LC-MS分析:各分组区分聚集性明显,筛选出5种差异糖类代谢产物分别是甘露糖（Mannose）、葡萄糖（Glucose）、阿拉伯糖（Arabinose）、岩藻糖（Fucose）、果糖（Fructose）以及多条信号通路比如:ABC转运蛋白通路、半乳糖的代谢途径。结论:1)固正消癌方可以从糖代谢途径减少结肠癌细胞的能量来源,改善其周围的微酸环境,下调相关蛋白等方面起到抗肿瘤作用。2)在固正消癌方的作用下,AMPK通路的激活也会起到干预结肠癌细胞的糖代谢过程,诱导细胞凋亡的作用。3)LC-MS分析认为固正消癌方作用下的差异糖类代谢物为甘露糖（Mannose）、葡萄糖（Glucose）、阿拉伯糖（Arabinose）、岩藻糖（Fucose）、果糖（Fructose）,以此为靶点的信号通路还包括ABC转运蛋白通路、半乳糖的代谢途径等。
赵圆圆[6]（2020）在《杏鲍菇子实体多糖的提取纯化、结构表征及降脂活性研究》文中研究指明杏鲍菇是一种在我国被广泛栽培的食药兼备的真菌,具有丰富的营养价值和多种活性物质,如多糖、多酚、蛋白质、矿物质、维生素等。据报道,杏鲍菇多糖具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒、预防糖尿病及提高免疫力等诸多功效,但对其功效机理的研究不够深入,特别是对降脂机理的研究浅显。本论文以杏鲍菇子实体为原料,使用传统的水提醇沉法提取杏鲍菇子实体中的多糖（PEP）。通过纯化得到三种组分的多糖PEP1-A、PEP2-A和PEP3-A,并对其进行结构表征。鉴于初步体外抗氧化活性筛选的结果,选择抗氧化活性较好的多糖PEP进行抗疲劳和降脂活性研究;通过常规生化指标检测,肝脏和脂肪组织的形态学观察,发现PEP具有抗疲劳和降脂功效。通过LC-MS技术、蛋白免疫印迹法和qRT-PCR技术分别从代谢组学方面、AMPK（腺苷酸活化蛋白激酶）和ACC（乙酰辅酶A羧化酶）具体的蛋白和基因表达层面研究了 PEP降脂机制。发现PEP通过调节氨基酸、脂肪酸和其它内源性化合物变化,及它们所参与的多种代谢通路共同发挥作用来降脂;AMPK-ACC通路中PEP降脂机制是通过调节AMPK、ACC的蛋白和基因的表达水平起作用。具体研究结果如下:（1）优化了提取PEP的最佳工艺参数,测定了 PEP的水合性质,并通过分离纯化得到PEP1-A、PEP2-A和PEP3-A三种多糖组分,测定并比较了它们的多糖、蛋白、糖醛酸、硫酸基含量,发现纯化后的组分除多糖含量升高外,蛋白、糖醛酸、硫酸基含量都有所减少。通过单因素和响应面实验,得到PEP得率最高的工艺参数,当提取温度为80℃,提取时间为3 h、提取料液比为1:50（g/mL）时获得的杏鲍菇多糖得率最高,达到7.52%。测定PEP总糖、蛋白、糖醛酸含量分别为67.84%、4.42%、0.28%。PEP的水溶性是45.8%,持水力为19.7 g/g,膨胀力为24.00 mL/g。（2）初步表征了 PEP1-A,PEP2-A 和 PEP3-A 的结构。PEP1-A、PEP2-A和PEP3-A的单糖组成中都有不同含量的岩藻糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖四种单糖,其中葡萄糖含量最高,岩藻糖含量最少。此外PEP3-A含有1.39%的阿拉伯糖。紫外、红外结果表明PEP1-A,PEP2-A和PEP3-A都含有多糖的特征吸收峰。核磁共振结果表明PEP1-A、PEP2-A和PEP3-A都有吡喃糖环,PEP1-A糖残基通过β-糖苷键连接,PEP2-A和PEP3-A的糖残基通过α-糖苷键连接。甲基化结果表明PEP1-A的主链是由1,3-Glc（p）、1,4-Glc（p）、1,6-Gal（p）、1,6-Glc（p）连接而成,分支是 1,3,4-Glc（p）、1,2,6-Man（p）。PEP2-A的骨架是由 1,3-Glc（p）、1,4-Man（p）、1,6-Gal（p）连接,支链是 1,2,6-Glc（p）。PEP3-A 的骨架由 1,3-Glc（p）、1,6-Glc（p）、1,4-Man（p）、1,6-Gal（p）、1,6-Ara（p）连接,分支是1,3,6-Glc（p）、1,2,6-Glc（p）连接而成。扫描电镜观察得知,PEP1-A、PEP2-A和PEP3-A有相似的条形片状结构表征。由于自身带电荷、分子内作用力和多支链等原因在原子力显微镜下观察到PEP1-A、PEP2-A、PEP3-A是无规则团状、岛屿状和谷堆状。（3）杏鲍菇多糖体外抗氧化实验表明:在测定范围内,PEP、PEP1-A、PEP2-A、PEP3-A均具有一定的还原力、超氧阴离子自由基清除能力、羟基自由基清除能力、DPPH自由基清除能力、ABTS+自由基清除能力。综合比较PEP的体外抗氧化能力较好。（4）抗疲劳活性中PEP对小鼠体重和肝脏指数变化没有显着影响,PEP对小鼠负重游泳时间的影响与正常对照组相比,杏鲍菇高、中、低剂量组小鼠的竭力游泳时间显着增加（p<0.05）。高、中、低剂量组竭力游泳时间的增加率分别为89.70%,75.12%和53.11%,其效果与实验范围内的灌胃剂量呈正相关。抗疲劳生化指标表明与对照组相比PEP干预组降低BUN（尿素氮）、LD（乳酸）水平含量,降低LDH（乳酸脱氢酶）活性。（5）不同剂量的PEP灌胃高脂小鼠,小鼠体重、生化指标和组织病理学切片都说明PEP具有降脂作用。阳性对照组和高剂量的PEP组能显着降低小鼠体重,中、低剂量的PEP组体重降低不显着,说明灌胃浓度对体重变化有影响。小鼠的生化指标和酶学检测结果表明,在辛伐他汀和不同剂量的PEP灌胃后,阳性对照组、不同剂量的PEP处理组和高脂模型组比较发现,TC（总胆固醇）、TG（甘油三酯）、LDL-C（低密度脂蛋白胆固醇）、ALT（丙氨酸氨基转移酶）、AST（天门冬氨酸氨基转移酶）含量都显着降低,而HDL-C（高密度脂蛋白胆固醇）含量显着增高,其降低和升高程度与PEP含量呈剂量性关系。说明PEP具有降脂作用,能够预防食源性肥胖,且高剂量PEP降血脂的效果最好,中剂量PEP效果次之,低剂量PEP效果最低。小鼠肝脏和附睾脂肪组织形态学观察结果表明,不同剂量的PEP灌胃处理后,小鼠肝脏组织中的脂肪空泡的数量和体积与模型组相比均有所减少和变小;小鼠附睾脂肪组织中脂肪细胞体积大小和数目与高脂模型组相比都有所减少,其中高剂量PEP组作用最佳。（6）通过LC-MS技术对各组小鼠的血清样品进行代谢组学分析,从代谢组学的角度阐明PEP的降脂作用及机制。结果发现高脂模型组和不同剂量的PEP组血清代谢物的组间有较好的分离度,说明PEP对高脂小鼠有一定的降脂效果,可用于对高脂人群的预防和治疗。各组比较分析后寻找出PEP灌胃高脂小鼠后血清中代谢差异物包括氨基酸、脂肪酸、胆碱、脂质变异体和其他内源性化合物及所参与的代谢通路的变化。发现甘油磷脂代谢、三羧酸循环、脂肪酸代谢等多条通路发生改变,表明不同剂量的PEP对肥胖引起的高脂血症的改善可能与能量代谢相关。（7）对PEP介导的AMPK-ACC信号通路发挥的降脂作用进行了初步分析。采用Western blot和qRT-PCR技术分析AMPK-ACC通路中关键蛋白和基因的表达水平,发现PEP具有降脂作用是通过上调pAMPK和pACC的蛋白表达水平,及上调AMPK和ACC的基因表达水平来实现的,进而抑制高脂及并发症等代谢异常疾病的发生。通过本研究,发现杏鲍菇子实体多糖具有抗疲劳和降脂的生物活性,并初步分析了 PEP1-A,PEP2-A和PEP3-A结构。从代谢组学层面、AMPK及ACC蛋白和基因的表达水平层面阐明了 PEP降脂作用机制。为杏鲍菇多糖的深入研究和作为保健品的开发奠定了理论基础。
段晨阳[7]（2020）在《Drp1在急性缺血缺氧损伤致线粒体质量失衡中的作用及机制研究》文中进行了进一步梳理线粒体作为细胞有氧呼吸的主要场所,是缺血缺氧后较早发生损害的细胞器之一。以往针对线粒体的治疗措施主要以抗氧化应激、抗凋亡等线粒体功能障碍发生后的效应为靶点,缺乏针对线粒体质量调控过程中关键环节的防治措施,治疗效果有限。近年研究表明,线粒体质量失衡如线粒体过度分裂、融合受损、自噬和代谢紊乱等关键环节异常与缺血缺氧损伤后多器官功能障碍和机体物质能量代谢紊乱的发生密切相关。Drp1作为经典线粒体动力蛋白,主要影响了线粒体质量调节中的线粒体分裂过程。以往研究认为Drp1只有在内质网和线粒体接触（ER-Mito接触）引起线粒体预收缩后才会被招募到线粒体上参与线粒体分裂过程,但招募机制还有待深入研究。并且正常情况下转位到线粒体上参与线粒体分裂的Drp1仅占总Drp1含量的6%,还有大量Drp1存在于胞浆中。那么大量存在的细胞质Drp1具有哪些功能?在被招募到线粒体之前是否已经开始参与线粒体分裂过程?对于ER-Mito接触形成及线粒体预收缩是否有调控作用?对除了线粒体分裂的其他线粒体质量调控环节比如线粒体自噬、线粒体代谢等是否也有影响呢?此外,目前研究认为Drp1被招募到线粒体上后主要是通过其GTPase活性切割线粒体膜介导分裂的,但是Drp1介导线粒体分裂结束后下一步如何发展一直是困扰大家的问题。近年来在多种疾病模型中发现Drp1参与了线粒体和细胞功能调节,但具体调控机制尚不清楚。有研究表明,线粒体mPTP通道过度开放是线粒体膜电位改变、细胞坏死等发生的先决条件,而ROS大量堆积可能是引起上述线粒体和细胞功能障碍的重要诱因。那么缺血缺氧后线粒体Drp1除了介导线粒体分裂外,是否对线粒体外膜mPTP通道开放和ROS的产生及清除也有影响?为此,本研究利用整体失血性休克和细胞糖氧剥夺方法复制急性缺血缺氧损伤模型。首先我们了解了缺血缺氧损伤后多组织器官线粒体质量失衡的特征规律。其次我们探究了Drp1在急性缺血缺氧损伤致线粒体质量失衡中的作用及调控机制,重点研究了细胞质Drp1介导ER-Mito接触对线粒体预收缩的启动机制以及线粒体Drp 1对mPTP和ROS等线粒体功能的调控机制。最后,我们观察了使用Drp 1抑制剂Mdivi-1或者Drp 1敲除干预等措施对缺血缺氧损伤后多器官功能的保护作用,为从维持线粒体质量平衡角度调整急性缺血缺氧损伤临床救治方案提供了新思路和新靶点。[研究内容]第一部分:急性缺血缺氧损伤后多组织器官线粒体质量失衡的特征规律研究利用失血性休克SD大鼠模型和糖氧剥夺细胞模型,观察缺血缺氧不同时相点（0.5h、1h、2h、3h、4h）血管组织、肠组织、心肌组织及其对应细胞线粒体形态和数量变化以及ATP产生、ROS含量、线粒体膜电位等线粒体功能变化,以了解急性缺血缺氧损伤多组织器官线粒体质量失衡的特征规律。第二部分:Drp1在急性缺血缺氧损伤致线粒体质量失衡中作用及调控机制研究1.急性缺血缺氧损伤后线粒体动力蛋白Drp1表达、分布及修饰变化利用失血性休克SD大鼠模型和糖氧剥夺血管平滑肌细胞（VSMC）模型,观察缺血缺氧不同时相点线粒体动力蛋白表达、分布情况;观察缺血损伤后血管和肠组织Drp1修饰变化。2.Drp1在缺血缺氧损伤后线粒体形态和数量变化中作用及对ER-Mito接触的调控机制（1）Drp1介导线粒体分裂对线粒体形态和数量变化的调控作用利用Drp1干扰/过表达腺病毒转染的VSMC细胞,观察干预线粒体Drp1对正常情况下和缺氧后线粒体形态和数量变化的影响,以明确Drp1介导线粒体分裂对线粒体形态和数量变化的调控作用。（2）细胞质Drp1介导ER-Mito接触对线粒体预收缩的启动机制利用失血性休克SD大鼠和Drp1敲除小鼠（Drp1+/-）模型、糖氧剥夺VSMC细胞模型,观察缺血缺氧不同时相点ER-Mito接触情况;观察干预细胞质Drp1对ER-Mito接触和线粒体预收缩的影响;观察干预Drp1-Shroom4复合体对肌动蛋白束化、ER-Mito接触以及线粒体预收缩的影响,以阐明细胞质Drp1通过Shroom4束化肌动蛋白启动ER-Mito接触形成的机制。（3）细胞质Drp1加速线粒体转位的发生机制利用失血性休克SD大鼠模型和糖氧剥夺VSMC细胞模型,观察缺血不同时相点Calnexin、Fundc1表达及分布情况;观察干预内质网蛋白Calnexin对缺氧早期Drp1和Fundc1的线粒体转位、线粒体预收缩和线粒体分裂的影响,以了解细胞质Drp1在ER-Mito接触位点Calnexin-Fundc1环的招募作用下加速线粒体转位的发生机制。（4）Drp1介导线粒体自噬对破损线粒体的清除机制利用失血性休克Drp1敲除小鼠（Drp1+/-）模型和糖氧剥夺Drp1干扰腺病毒转染的VSMC细胞模型,基因组学分析生理和缺血损伤情况下Drp1可能参与的调控通路;观察干预Drp1对缺血缺氧后线粒体自噬小体和自噬溶酶体形成的影响;观察干预Drp1对自噬相关蛋白表达及分布的影响,以阐明Drp1通过Clec16a-Parkin途径介导线粒体自噬的机制。3.Drp1在缺血缺氧损伤mPTP开放和ROS堆积等线粒体功能变化中作用及调控机制（1）Drp1在缺血缺氧损伤后线粒体mPTP通道开放中的作用及调控机制利用失血性休克SD大鼠、Drp1敲除小鼠（Drp1+/-）模型和糖氧剥夺VSMC细胞模型,观察缺氧不同时相点mPTP开放情况;观察缺血缺氧不同时相点mPTP结构蛋白表达和分布情况;观察干预mPTP结构蛋白HK2表达活性对缺氧后mPTP开放的影响;观察干预线粒体Drp1-LRRK2结合对HK2活性、分布和mPTP开放的影响,以阐明线粒体Drp1对缺血缺氧损伤mPTP过度开放的调控机制。（2）Drp1在缺血缺氧损伤后线粒体ROS堆积中的作用及调控机制利用失血性休克Drp1敲除小鼠（Drp1+/-）模型和糖氧剥夺VSMC细胞模型,观察机体能量代谢变化;代谢组学检测干预Drp1对缺血损伤后线粒体代谢的影响;观察干预Drp1介导谷胱甘肽代谢对线粒体功能的影响,以阐明Drp1通过影响线粒体代谢参与ROS生成和清除的潜在调控通路。第三部分:干预Drp1对急性缺血缺氧损伤重要器官功能保护作用及临床意义研究使用Drp1抑制剂Mdivi-1以及Drp1敲除干预观察缺血缺氧损伤后（1）血管反应性、血管管径变化、血管平滑肌细胞收缩张力以及动态血压维持情况;（2）肝肾血流灌注、肝功、肾功、心输出量、心损和心肌细胞收缩力;（3）肠上皮紧密连接情况、肠道菌群组成及肠屏障功能;（4）血流动力学指标（LVSP、±dp/dt max）、血气指标（Lac、HCO3-、BE、pH等）以及72h存活情况,以阐明干预Drp1对急性缺血缺氧损伤后重要器官功能的保护作用及其临床意义。[研究结果]第一部分:急性缺血缺氧损伤后多组织器官线粒体质量失衡的特征规律研究1.缺血缺氧损伤后血管、肠和心脏组织线粒体形态和数量均发生明显变化,但变化时间、变化程度和变化形式存在差异。血管组织变化起始于缺血缺氧后1h并逐渐加剧。肠组织在缺血缺氧后0.5h即发生明显变化,但后续并没有进一步加重。心脏组织变化不如血管和肠组织明显,缺血缺氧后2h才有稍许增加,并且不同于血管和肠组织线粒体缺血缺氧后表现为线粒体过度分裂和碎片化线粒体数量增多,缺血缺氧损伤对心肌线粒体的影响主要体现在心肌线粒体排布紊乱和内部嵴结构的破坏。2.缺血缺氧损伤后血管、肠和心脏组织线粒体功能均发生明显变化,且缺血缺氧损伤后相同组织线粒体功能变化均晚于线粒体形态和数量的变化。第二部分:Drp1在急性缺血缺氧损伤致线粒体质量失衡中作用及调控机制研究1.急性缺血缺氧损伤后线粒体动力蛋白Drp1表达、分布及修饰变化（1）缺血缺氧损伤1h后Drp1发生从细胞质到线粒体转位,且其时相变化规律与线粒体碎片化程度呈正相关,提示Drp1线粒体转位在缺血缺氧早期线粒体过度分裂中发挥了重要作用。进一步发现转位到线粒体上的Drp1主要富集在线粒体预收缩位点,对于线粒体分裂的发生具有重要意义。（2）缺血损伤后Drp1的磷酸化、苏木化、亚硝基化修饰明显增高,泛素化修饰轻度减低。缺血缺氧损伤后活跃的Drp1修饰变化对于线粒体质量调控具有重要意义。2.Drp1在缺血缺氧损伤后线粒体形态和数量变化中作用及对ER-Mito接触的调控机制（1）缺血缺氧后线粒体碎片化的发生是由于Drp1线粒体转位后介导线粒体过度分裂导致的。干扰Drp1后线粒体Drp1减少的同时伴随线粒体碎片数量减少。正常情况下过表达Drp1会导致线粒体过度分裂和线粒体数量的增加。上述结果明确了 Drp1线粒体转位介导线粒体分裂对线粒体形态和数量变化的决定作用。（2）缺血缺氧损伤初期Drp1发生大量线粒体转位之前,过度磷酸化和亚硝基化的细胞质Drp1通过激活细胞骨架调节蛋白Shroom4并与之结合形成Drp1-Shroom4复合体。Drp1-Shroom4复合体如“卡扣”一样将内质网周围散乱分布的F-肌动蛋白束化,增强了内质网与线粒体之间的牵引力和有效接触面积。随后内质网在束化F-肌动蛋白锚定端INF2的牵引下,缠绕在线粒体周围,形成ER-Mito接触并进一步引起线粒体预收缩。（3）缺血缺氧损伤ER-Mito接触引起大量线粒体预收缩后,内质网Calnexin会迁移到ER-Mito接触位点并与细胞质中Fundcl结合形成功能环,加速细胞质Drp1沿内质网轨迹向ER-Mito接触位点的线粒体转位过程。（4）缺血缺氧损伤后活化Drp1可上调线粒体Clec16a表达,一方面抑制了 Parkin的线粒体募集,导致线粒体碎片形成自噬小体受阻;另一方面也加速了自噬小体向自噬溶酶体的转变,促进了缺血缺氧损伤后的自噬流过程。3.Drp1在缺血缺氧损伤mPTP开放和ROS堆积等线粒体功能变化中作用及调控机制（1）缺血缺氧晚期,线粒体收缩位点大量富集的Drp1除了介导线粒体分裂外,还会通过结合mPTP结构蛋白BAX,识别线粒体收缩位点附近的mPTP通道。然后通过招募线粒体LRRK2到线粒体收缩或分裂位点形成Drp1-LRRK2复合体引起mPTP通道结构蛋白HK2失活及其线粒体分离,破坏mPTP通道结构,导致mPTP通道过度开放,线粒体CytC释放增多,影响线粒体功能和细胞功能。（2）缺血缺氧后活化Drp1会造成ROS的过度堆积,进而破坏线粒体功能,引起细胞能量代谢异常。其潜在发生机制包括:（a）活化Drp1通过抑制辅酶Q的生物合成破坏线粒体呼吸链,导致线粒体ROS生成增加;（b）活化Drp1抑制线粒体谷氨酸-谷胱甘肽代谢,导致ROS清除减少;（c）活化Drp1通过阻断神经递质途径（包括酪氨酸-多巴胺代谢和维生素E相关通路）进一步降低ROS清除率。第三部分:干预Drp1对急性缺血缺氧损伤重要器官功能保护作用及临床意义研究1.急性缺血缺氧损伤后合并使用Drp1抑制剂Mdivi-1液体复苏可以明显提高血管反应性及其收缩张力。干预Drp1可以很好地维持缺血缺氧损伤后的动态血压。2.干预Drp1可以改善缺血损伤后肝肾血流灌注和肝肾功能,对于缺血损伤后心肌细胞收缩力也有一定的影响。3.Drp1敲除干预可以通过影响肠道菌群中拟杆菌门的组成、恢复短链脂肪酸（SCFA）的产生,从而保护缺血损伤后的肠屏障功能。4.干预Drp1介导的线粒体质量失衡可以很好地改善缺血缺氧损伤后血流动力学、血气和存活情况。[结论]1.Drp1在急性缺血缺氧损伤致线粒体质量失衡中发挥了重要作用。其中“Drp1的过度激活（磷酸化、苏木化、亚硝基化）”和“大量细胞质Drp1的线粒体转位”是急性缺血缺氧后线粒体形态数量和功能发生变化的重要原因。2.缺血缺氧后大量存在的细胞质Drp1在被招募到线粒体之前已经开始参与线粒体分裂过程。具体表现为过度磷酸化和亚硝基化的细胞质Drp1通过Shroom4束化肌动蛋白,增强内质网和线粒体之间牵引力,启动大量ER-Mito接触并引起大量线粒体预收缩,为后续细胞质Drp1转位到线粒体收缩位点介导线粒体过度分裂奠定了结构基础。3.缺血缺氧后细胞质Drp1加速线粒体转位是由于ER-Mito接触位点Calnexin-Fundcl功能环大量形成,促进了细胞质Drp1沿内质网向ER-Mito接触位点的大量迁移。4.缺血缺氧晚期Drp1介导线粒体分裂结束后下一步会进一步影响线粒体功能。线粒体Drp1一方面在线粒体收缩或分裂位点通过识别并破坏线粒体mPTP通道结构引起mPTP过度开放,CytC释放增加;另一方面还可通过多种线粒体代谢途径影响ROS的清除和生成,导致ROS过度堆积,最终加重了缺血缺氧后线粒体和细胞功能损伤。5.急性缺血缺氧损伤后使用Drp1抑制剂Mdivi-1液体复苏或者Drp1敲除干预可以保护血管收缩张力、改善肝肾血流灌注以及肠屏障功能,弥补了常规林格液体复苏“虽然可以快速扩容但难以长时间维持血压”的缺陷,对于延长急性缺血缺氧损伤患者的临床救治时间、提高患者救治率和存活率具有重要临床意义。
蔡红英[8]（2020）在《植物乳杆菌对小鼠肝脏脂代谢的调控与作用机制》文中研究表明非酒精性脂肪肝的发病率逐年提高并有低龄化趋势,有报告显示我国目前成人患病率为15%-25%,已成为超越病毒性肝炎的第一大肝病。迄今,脂肪肝仍缺乏一些特效的药物,虽然有一些保肝、降酶、降血脂等对症处理的药物,但大多伴随着不良的副作用,所以更加安全健康的非药物疗法相继提出,其中包括益生菌的使用。已报道植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）可以促进肠道菌群平衡、缓解代谢综合征和免疫调节等多种功能,但植物乳杆菌对缓解高血脂、肥胖、脂肪肝等疾病的作用机制尚不明确,同时存在菌株特异性。其次,植物乳杆菌对肠道菌群向宿主代谢稳态的潜在调节机制,以及肠道菌群,肠道菌群代谢物与肝脏代谢物之间的关系仍知之甚少。针对植物乳杆菌对小鼠肝脏脂代谢的调控与作用机制,本论文主要从以下六个试验开展相关的研究。试验一:体外评价11株植物乳杆菌耐胃酸耐胆盐、降胆固醇以及黏附性等特性,综合筛选出两株降脂黏附性能良好的植物乳杆菌FRT4和FRT10。试验二:FRT4与FRT10在细胞水平上进行降脂效果验证及机制研究。利用油酸构建Hep G2细胞脂质变性模型,结果发现FRT4和FRT10干预显着降低肝细胞中的甘油三酯含量,下调脂质合成基因SREBP-1,ACC和FAS,以及炎症因子TNF-α和IL-6在m RNA水平的表达。试验三:FRT4和FRT10是否能够在体内缓解脂质的积累尚不清楚,因此,以FRT4与FTR10为出发菌株,进一步在模型小鼠上进行实验。通过8周高脂饮食诱导非酒精性脂肪肝小鼠建模,实验分为正常对照组（CT）,高脂饮食模型组（HF）,FRT4高剂量处理组（HF4H,5×109 CFU/m L）,FRT4低剂量处理组（HF4L,5×108 CFU/m L）,FRT10高剂量处理组（HF10H,5×109 CFU/m L）,FRT10低剂量处理组（HF10L,5×108 CFU/m L）,每天分别灌胃相应剂量的植物乳杆菌,持续8周。结果表明,FRT4和FRT10干预显着降低小鼠体重、体增重、肝重、脂肪重、血清胆固醇、甘油三酯和肝组织ALT水平以及肝组织病理学都有明显的改善作用（p<0.05）。进一步的机制研究表明,与HF组相比,FRT4和FRT10都能在m RNA水平上调肝脏β-氧化基因CPT1α和下调脂质合成相关基因SREBP-1和DGAT1基因的表达,增强结肠紧密连接蛋白ZO-1,Occludin和Claudin-1以及减少内毒素受体TLR4以及肝中炎症因子IL-6在m RNA水平上表达。此外,FRT10增加胆汁酸合成限速酶基因CYP7A1的表达,可通过激活PPARα/CPT1α通路缓解小鼠肥胖。这些结果表明,FRT4与FRT10都可作为一种单一的益生菌制剂,用于饮食干预缓解肥胖。试验四:针对肝脂质代谢物的变化,利用代谢组对肝脏组织进行分析。结果表明,与正常饮食组相比,高脂饮食导致肝中甘油磷脂中间代谢物choline、glycerophosphocholine、phosphporylcholine、cytidine 5’-diphosphocholine、sn-glycerol 3-phosphoethanolamine以及ophosphoethanolamine显着升高（p<0.05）。FRT4干预后显着降低choline、glycerophosphocholine、phosphporylcholine、o-phosphoethanolamine的含量（p<0.05）。代谢通路分析显示,甘油磷脂代谢是密切参与FRT4缓解NAFLD机制的潜在靶通路。FRT10缓解NAFLD通路分析显示主要在甘油磷脂代谢,半乳糖代谢,蛋白消化和吸收路径中起作用。试验五:为了探究FRT4与FRT10缓解NAFLD是否与调控肠道微生物有关,本研究对盲肠内容物进行16S r RNA基因高通量测序。结果表明,与正常对照组相比,高脂饮食引起肠道微生物在厚壁菌门和拟杆菌门发生显着的变化（p<0.05）。FRT4与FRT10都能显着改变肠道微生物的组成（p<0.05）。FRT4诱导了肠道菌群在结构和关键系统类型上发生不同变化。与高脂组相比,FRT4干预使Alistipes、Intestimonas、Butyicicoccus和Butyricimonas属的相对丰度显着增加（p<0.05）,Oscillibacter和Lachnoclostridium相对丰度显着减少（p<0.05）。Spearman方法对肠道微生物与肝脏代谢产物关联分析显示,一些特定的菌属与甘油磷脂代谢产物具有显着的相关性（p<0.05）。FRT10显着调节高脂饮食诱导的肠道菌群失调,显着增加Butyricicoccus、Butyricimonas、Odoribacter和Alistipes,显着降低Desulfovibrionaceae、Roseburia和Lachnoclostridium。这些结果表明,FRT4和FRT10都可改善高脂饮食所导致的肠道菌群紊乱,从而缓解肥胖和肝脏的脂质异常。试验六:肠道代谢物在“肠-肝”轴中起着关键的作用。为了探究肠道微生物所引起代谢物变化,利用代谢组对盲肠内容物进行分析。结果表明,代谢物质主要参与到甘油磷脂代谢,脂肪酸代谢,初级胆汁酸合成和胆汁分泌等途径,其中,高脂饮食使脂质,小肽等显着增加（p<0.05）,FRT4和FRT10干预后,某些脂质和小肽显着减少（p<0.05）。肠道差异代谢物与差异菌属相关性分析显示Lyso PC（18:1（9Z））与Dorea和Enterorhabdus呈正相关（p<0.05）,与Bacteroides,Bilophila,Butyricimonas和Intestinimonas呈负相关（p<0.05）。这些结果表明肠道菌群结构及多样性发生显着变化引起了肠道内容物发生显着变化。此外,肠道代谢物与肝代谢物关联路径分析显示植物乳杆菌降脂主要在甘油磷脂代谢路径起作用。综上所述,本研究通过降胆固醇,黏附性以及在脂质变性Hep G2细胞上评价实验,综合筛选出2株植物乳杆菌FRT4与FRT10。利用高脂饮食构建非酒精性脂肪肝小鼠模型,FRT4与FRT10都能缓解肥胖以及高脂饮食所导致的脂质异常。从生长性能、生理生化指标、肝病理组织学观察、脂质相关基因的表达、肝脏代谢物组成、肠道微生物的组成以及肠道代谢物组成等多组学研究,结果表明植物乳杆菌干预后肠道菌群结构及多样性发生显着变化,引起了肠道内容物发生显着变化,进而通过“肠-肝”轴影响肝脏中脂质代谢,从而更全面了解植物乳杆菌降脂作用机制,对预防和治疗脂肪肝都具有重要意义。
徐路[9]（2020）在《基于FXR/FGF15/FGFR4通路研究黄连吴茱萸配伍调控胆汁酸代谢发挥降脂效应的作用机制》文中指出研究背景:随着饮食习惯和生活方式的改变,高脂血症已成为一个重要的公共健康问题。临床上常用治疗高脂血症的药物,长期应用会出现不同概率、不同程度的不良反应,因此需要探索新的治疗方法,近年来中草药的降脂作用受到了越来越多的关注。本课题组前期研究发现黄连、吴茱萸的主要有效成分小檗碱和吴茱萸碱1:1配伍可显着降低血浆甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平,减轻高脂模型大鼠肝脏组织脂肪变性情况,通过作用于Leptin-AMPK通路、Leptin-Jak2-Stat3通路调节脂代谢,影响SREBP2、HMGCR、PPARα、LXRα、CYP7A1、NPC1L1、SR-BI、ABCG5、ABCG8等基因的表达,以抑制肝脏胆固醇合成、促进胆固醇分解,以及抑制小肠胆固醇吸收。胆汁酸是体内清除胆固醇的重要形式,对于维持胆固醇的稳态和防止胆固醇、甘油三酯和有毒代谢物的积累以及肝脏和其他器官的损伤是至关重要的。因此,为了进一步阐明黄连吴茱萸配伍的降脂机制,我们提出连萸配伍是否会影响这一重要过程。研究目的:以高脂血症模型小鼠为研究载体,以胆汁酸代谢为切入点,采用实时荧光定量PCR法、蛋白质免疫印迹法观察黄连吴茱萸配伍对胆汁酸代谢负反馈调节通路FXR/FGF15/FGFR4相关基因、蛋白表达的影响,用色谱-质谱分析法观察黄连吴茱萸配伍对胆汁酸代谢谱的影响,探讨黄连吴茱萸调控胆汁酸代谢发挥降脂效应的作用机制。研究方法:1.动物分组及给药48只雄性C57BL/6小鼠,普通饲料适应性喂养3天,称小鼠体重并记录,禁食12h,每只小鼠尾静脉取血约0.5ml,3500r/min离心15min分离血清,检测各组小鼠血清总胆固醇含量。根据测得血清总胆固醇值及小鼠体重,将小鼠随机分为6组,空白组（n=8）、模型组（n=8）、阿托伐他汀组（n=8）、连萸低剂量组（n=8）、连萸中剂量组（n=8）、连萸高剂量组（n=8）,使组间初始总胆固醇值及体重值无差异。空白组小鼠给予普通饲料饲养,其余各组小鼠给予高脂饲料饲养,实验过程中所有动物自由采食和饮水。制备好中药煎剂,每日根据各组动物体重给予相应药物灌胃,给药体积为1ml/100g,空白组和模型组大鼠均给予生理盐水灌胃,给药频率为1次/天,连续灌胃给药8周。2.血清脂质水平及炎性因子水平的检测采用酶化学法测定血清中总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、白介素6、白介素10、肿瘤坏死因子α的含量,观察黄连吴茱萸配伍对高脂血症模型小鼠血清脂质水平及炎性因子水平的影响。3.肝脏病理形态观察采用HE染色镜下观察黄连吴茱萸配伍对高脂血症小鼠肝脏病理形态的影响。4.FXR/FGF15/FGFR4通路相关基因表达的检测采用实时荧光定量PCR法检测黄连吴茱萸配伍对FXR、FGF15、FGFR4、CYP7A1基因表达水平的影响。5.FXR/FGF15/FGFR4通路相关蛋白表达的检测蛋白质免疫印迹法检测黄连吴茱萸配伍对FXR、FGF15、FGFR4、CYP7A1蛋白表达水平的影响。6.粪便胆汁酸代谢谱的检测采用色谱-质谱法观察黄连吴茱萸配伍对高脂血症小鼠粪便胆汁酸代谢谱的影响。研究结果:1.黄连吴茱萸配伍对高脂血症模型小鼠血脂水平的影响相较于空白组,模型组小鼠血清低密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯、总胆固醇水平明显升高（P<0.01）,高密度脂蛋白胆固醇水平明显降低（P<0.01）。相较于模型组,连萸低、中、高剂量组和阿托伐他汀组血清低密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯、总胆固醇水平明显降低,高密度脂蛋白胆固醇明显升高（P<0.05）。2.黄连吴茱萸配伍对高脂血症小鼠肝脏指数及病理形态的影响相较于空白组,模型组小鼠肝脏指数明显升高（P<0.01）;相较于模型组,连萸低、中、高剂量组和阿托伐他汀组小鼠的肝脏指数明显降低（P<0.01）。相较于空白组,模型组小鼠肝脏出现脂肪变性,见脂肪空泡,并伴有炎性细胞浸润;相较于模型组,连萸低、中、高剂量组和阿托伐他汀组可不同程度改善上述表现,其中连萸低、中、高剂量组优于阿托伐他汀组。3.黄连吴茱萸配伍对高脂血症小鼠炎性因子水平的影响相较于空白组,模型组小鼠血清白介素6、肿瘤坏死因子α水平明显升高（P<0.01）,白介素10水平明显降低（P<0.01）。相较于模型组,连萸低、中、高剂量组小鼠血清白介素6水平降低（P<0.05）;连萸低、中、高剂量组和阿托伐他汀组小鼠血清肿瘤坏死因子α水平明显降低（P<0.01）;连萸低、中剂量组小鼠血清白介素10水平明显升高（P<0.01）。4.黄连吴茱萸配伍对高脂血症小鼠FXR/FGF15/FGFR4通路靶基因的影响相较于空白组,模型组小鼠回肠FXR、回肠FGF15、肝脏FGFR4基因表达水平明显升高,肝脏CYP7A1、肝脏FXR基因表达水平明显降低（P<0.05）。相较于模型组,连萸低、中剂量组和阿托伐他汀组小鼠回肠FXR基因表达水平明显降低（P<0.05）;连萸低、中、高剂量组和阿托伐他汀组小鼠回肠FGF15基因表达水平明显降低（P<0.01）;连萸低、中、高剂量组和阿托伐他汀组小鼠肝脏FGFR4基因表达水平降低（P<0.01）;连萸低、中、高剂量组小鼠肝脏CYP7A1基因表达水平明显升高（P<0.05）;连萸中、高剂量组和阿托伐他汀组小鼠肝脏FXR基因表达水平明显升高（P<0.05）。5.黄连吴茱萸配伍对高脂血症小鼠FXR/FGF15/FGFR4通路靶蛋白的影响相较于空白组,模型组小鼠回肠FXR、回肠FGF15、肝脏FGFR4蛋白表达水平明显升高（P<0.01,P<0.01,P<0.05）,肝脏CYP7A1、肝脏FXR蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。相较于模型组,连萸低、中、高剂量组和阿托伐他汀组小鼠回肠FXR、FGF15蛋白表达水平明显降低（P<0.01,P<0.05）;连萸低、中、高剂量组小鼠肝脏FGFR4蛋白表达水平明显降低（P<0.05）;连萸低、高剂量组小鼠肝脏CYP7A1蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;连萸低、中、高剂量组小鼠肝脏FXR蛋白表达水平明显升高（P<0.05,P<0.01,P<0.01）。6.黄连吴茱萸配伍对高脂血症小鼠粪便胆汁酸代谢谱的影响（1）从胆汁酸的分类来看: 初级胆汁酸和次级胆汁酸:空白组小鼠初级胆汁酸占粪便总胆汁酸谱的42.39%,次级胆汁酸占粪便总胆汁酸谱的57.61%。模型组小鼠初级胆汁酸占粪便总胆汁酸谱的32.90%,次级胆汁酸占粪便总胆汁酸谱的67.10%。连萸中剂量组小鼠初级胆汁酸占粪便总胆汁酸谱的46.92%,次级胆汁酸占粪便总胆汁酸谱的53.08%。 游离胆汁酸和结合胆汁酸:空白组小鼠游离胆汁酸占粪便总胆汁酸谱的97.39%,结合胆汁酸占粪便总胆汁酸谱的2.61%。模型组小鼠游离胆汁酸占粪便总胆汁酸谱的98.34%,结合胆汁酸占粪便总胆汁酸谱的1.66%。连萸中剂量组小鼠初级胆汁酸占粪便总胆汁酸谱的94.15%,结合胆汁酸占粪便总胆汁酸谱的5.85%。（2）从差异胆汁酸来看,相较于空白组,模型组小鼠粪便胆汁酸12-KLCA、GDCA、HDCA、Apo CA、CDCA、DCA、Iso LCA、LCA表达上调（p<0.05）,TMCA、TUDCA、TCDCA、α-MCA表达下调（p<0.05）。相较于模型组,连萸中剂量组小鼠粪便胆汁酸7-KDCA、UDCA、CA、GCA上调（p<0.05）,12-KLCA、Apo CA、Iso LCA下调（p<0.05）。结论:1.高脂血症的中医病机相对复杂,脾胃升降失常是其关键病机,治当辛开苦降,升清降浊。黄连、吴茱萸配伍作为辛开苦降法的代表,具有明显的调脂、抗炎作用。2.黄连、吴茱萸配伍通过抑制FXR/FGF15/FGFR4通路,上调CYP7A1的表达,促进胆汁酸的合成,影响胆汁酸代谢发挥调脂作用。
李楠楠[10]（2019）在《中药木蝴蝶总黄酮抗肝肿瘤活性及作用机制研究》文中研究表明目的本研究是国家自然科学基金项目“基于微流控细胞生物芯片技术的木蝴蝶抗肝肿瘤活性物质发现方法研究”（项目编号:81874342）的一部分。本课题在实验室前期开展的木蝴蝶有效组分提取纯化及其药效筛选研究基础上,采用HPLC等现代分析仪器和方法对木蝴蝶抗肿瘤有效组分总黄酮类进行指纹图谱、含量测定及谱效关系研究,明确其抗肝肿瘤的药效物质基础;采用DEN诱导大鼠肝癌模型及微流控芯片技术,验证木蝴蝶总黄酮及木蝴蝶苷B的体内、外抗肝肿瘤作用;从代谢组学、基因组学、相关基因蛋白等多角度阐释木蝴蝶抗肝肿瘤有效组分总黄酮类抗肝肿瘤的作用机制,为中药木蝴蝶作为抗肝肿瘤药物的临床应用及其进一步开发研究提供实验依据和理论基础。方法1.采用HPLC法,开展木蝴蝶水、醇提取物的指纹图谱研究,并对木蝴蝶苷B进行含量测定;基于木蝴蝶水、醇提取物的指纹图谱,采用灰色关联度分析软件及Pearson相关性分析法,开展木蝴蝶总黄酮类成分与抗肝肿瘤作用的谱效关系研究。2.基于微流控芯片技术,采用Hoechst 33342/PI染色法,以细胞凋亡/坏死率为考察指标,开展木蝴蝶总黄酮及木蝴蝶苷B对人肝癌细胞HepG2增殖作用的影响研究;以细胞相对迁移率为考察指标,开展木蝴蝶总黄酮及木蝴蝶苷B对人肝癌细胞HepG2迁移作用的影响研究。3.采用DEN化学诱导法建立大鼠肝癌模型,以脏器指数、肝脏病理切片、血清中细胞因子的含量、AFP/ALT/AST等酶含量为指标,开展木蝴蝶总黄酮及木蝴蝶苷B体内抗肝肿瘤药效学研究。4.采用HPLC-QTOF-MS技术,并使用Agilent Mass Profiler Professional 12.6软件结合相关数据库,分析木蝴蝶总黄酮和木蝴蝶苷B干预后DEN肝癌大鼠血浆中代谢物的变化及可能参与的代谢通路,从代谢组学方面阐释木蝴蝶总黄酮及木蝴蝶苷B抗肝肿瘤的作用机制。5.应用Illumina二代测序仪及Agilent Microarray Scanner,分别进行木蝴蝶总黄酮及木蝴蝶苷B对DEN肝癌大鼠肝脏组织中转录组基因（mRNA）及非转录组基因（microRNA）表达的影响研究,寻找木蝴蝶总黄酮和木蝴蝶苷B干预后差异表达的mRNA和microRNA,并进行GO分析和代谢通路分析,从基因组学方面阐释木蝴蝶总黄酮及木蝴蝶苷B抗肝肿瘤的作用机制。6.采用PT-PCR和Western Blot法,开展木蝴蝶总黄酮及木蝴蝶苷B对DEN肝癌大鼠肝脏组织相关分子靶点mRNA和蛋白质表达的影响研究。结果1.建立了8个不同产地木蝴蝶水、醇提取物的指纹图谱;木蝴蝶苷B含量测定结果显示,不同产地木蝴蝶水提取物中木蝴蝶苷B的含量分别为13.98、12.94、20.34、16.83、15.78、15.37、18.44、15.78 mg·g-1,不同产地木蝴蝶醇提取物中木蝴蝶苷B的含量分别为17.65、26.45、30.99、27.62、23.46、22.62、30.42、24.03 mg·g-1;经灰色关联度软件分析可知,木蝴蝶总黄酮中5种主要单体成分对肝癌细胞增殖抑制作用的关联度顺序为:木蝴蝶苷B>白杨素-7-O-β-D葡萄糖酸酐>木蝴蝶苷A>黄芩素>白杨素。Pearson相关性分析结果显示,木蝴蝶总黄酮中5种主要单体成分对肝癌细胞增殖抑制作用的关联度顺序为:木蝴蝶苷B>黄芩素>木蝴蝶苷A>白杨素>白杨素-7-O-β-D葡萄糖酸酐。2.设计并制作了用于药效筛选研究的微流控芯片,应用该芯片进行的体外药效实验结果表明:木蝴蝶总黄酮和木蝴蝶苷B对人肝癌HepG2细胞均具有明显的增殖抑制作用,抑制率最高分别为78.42%、76.69%。设计并制作了用于细胞迁移研究的微流控芯片,应用该芯片进行的体外迁移实验结果表明:木蝴蝶总黄酮、木蝴蝶苷B均具有显着的抑制人肝癌HepG2细胞迁移的作用,相对迁移率最高分别为8.06%、8.85%。3.建立了DEN诱导大鼠肝癌模型,基于DEN大鼠肝癌模型的体内药效研究结果显示,空白组大鼠肝组织表面红润光滑、质地柔软,模型组大鼠肝组织表面密布瘤状结节,个别瘤体直径超过1 mm,木蝴蝶总黄酮和木蝴蝶苷B各组大鼠肝组织与模型组比较有不同程度的改善;木蝴蝶总黄酮和木蝴蝶苷B能不同程度的降低大鼠的脾指数,提高大鼠的胸腺指数;木蝴蝶总黄酮和木蝴蝶苷B能不同程度的降低大鼠血清中AFP、ALT、AST、TNF-α、IL-12的水平,能够增加大鼠血清中IL-2的水平。4.根据HPLC-QTOF-MS结果,借助相关数据库等分析鉴定木蝴蝶总黄酮及木蝴蝶苷B干预后大鼠血浆中内源性代谢物的变化,结果表明,木蝴蝶总黄酮干预后大鼠血浆中共有285种代谢物发生变化,其中上调的有41种,下调的有244种,如Arachidonic acid、Prostaglandins、N-arachidonoyl L-serine等,推测木蝴蝶总黄酮对DEN肝癌大鼠体内差异代谢物主要与色氨酸代谢、胆汁酸合成、花生四烯酸代谢、亚油酸代谢、丝氨酸代谢等途径有关;木蝴蝶苷B干预后大鼠血浆中共有201种代谢物发生变化,其中上调的有34种,下调的有167种,如Arachidonic acid、Prostaglandins、PA（16:0/18:1（11Z））、Prostaglandin E2（PGE2）等,推测木蝴蝶苷B对DEN肝癌大鼠体内差异代谢物主要与氨基酸代谢、能量代谢、胆汁酸合成、花生四烯酸代谢、Ca离子信号通路、磷脂酶信号通路、MAPK信号通路等途径有关。5.Illumina转录组测序的结果显示,木蝴蝶总黄酮干预组大鼠与模型组大鼠比较,有1491个基因发生变化,其中739个基因上调,752个基因下调;将给药后差异表达的基因进行相关通路注释和富集分析,结果显示木蝴蝶总黄酮干预后的差异表达基因与花生四烯酸代谢、Wnt signaling pathway、Angiogenesis pathway、PI3 kinase pathway、TCA cycle and respiratory electron transport等代谢或信号通路相关。Agilent Microarray Scanner芯片扫描结果显示,木蝴蝶总黄酮干预后有82个microRNA（miRNA）发生变化,其中有23个miRNA上调,59个miRNA下调;木蝴蝶苷B干预后有89个miRNA发生变化,其中有36个miRNA上调,53个miRNA下调。经木蝴蝶总黄酮、木蝴蝶苷B共同调控的miRNA有36个,其中有29个下调,7个上调;差异表达miRNA可能参与MAPK signaling pathway、NF-kappa B signaling pathway、TGF-beta signaling pathway、PI3K-Akt signaling pathway、TNF-αsignaling pathway等信号通路。5.RT-PCR和Western blot结果表明,木蝴蝶总黄酮及木蝴蝶苷B各给药组能不同程度的降低PI3K、p38 mRNA的表达,能增加Akt、PTEN、Caspase 9、Caspase 3 mRNA的表达;木蝴蝶总黄酮及木蝴蝶苷B各给药组能不同程度的降低PI3K、p38、p-p38、TGF-β、p-Akt蛋白质的表达,能增加PTEN、Caspase 9、Caspase 3蛋白质的表达。结论1.不同产地木蝴蝶水、醇提取物中木蝴蝶苷B含量最高的产地均为湖南张家界,且醇提取法得到提取物中的木蝴蝶苷B含量高于水提取法。各单体成分中与抗肝肿瘤药效相关性最大的为木蝴蝶苷B。2.木蝴蝶总黄酮及木蝴蝶苷B具有很好的体外抑制肝癌细胞增殖和迁移的作用。3.木蝴蝶总黄酮及木蝴蝶苷B具有很好的体内抗肝肿瘤作用,在提高肝癌患者生存质量,延长患者生存周期上显示出独特的优势。4.木蝴蝶总黄酮及木蝴蝶苷B对DEN肝癌大鼠体内代谢物有一定调节作用,可能与氨基酸代谢、能量代谢、胆汁酸合成、花生四烯酸代谢、Ca离子信号通路、磷脂酶信号通路、MAPK信号通路等途径有关。5.木蝴蝶总黄酮及木蝴蝶苷B对DEN肝癌大鼠体内转录组基因和非转录组基因均有一定的调节作用,可能与花生四烯酸代谢、Wnt signaling pathway、Angiogenesis pathway、PI3 kinase pathway、TCA cycle and respiratory electron transport、TGF-beta signaling pathway、PI3K-Akt signaling pathway、TNF-αsignaling pathway等代谢或信号通路相关。6.木蝴蝶总黄酮及木蝴蝶苷B促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖和转移的作用,可能与调节PI3K/Akt信号通路、p38 MAPK信号通路、TGF-β信号通路中相关分子靶点有关。
二、Caspase蛋白酶活化在牛磺酸脱氧胆酸诱导HepG2细胞凋亡中的作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Caspase蛋白酶活化在牛磺酸脱氧胆酸诱导HepG2细胞凋亡中的作用（论文提纲范文）
（1）星蒌承气汤治疗急性缺血性卒中痰热腑实证机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一章 星蒌承气汤药效物质基础及对缺血性卒中神经保护机制研究进展 |
| 1 大黄 |
| 1.1 中医认识 |
| 1.2 化学成分及神经保护作用 |
| 2 胆南星 |
| 2.1 中医认识 |
| 2.2 化学成分及神经保护作用 |
| 3 瓜蒌 |
| 3.1 中医认识 |
| 3.2 化学成分及神经保护作用 |
| 4 羌活 |
| 4.1 中医认识 |
| 4.2 化学成分及神经保护作用 |
| 5 芒硝 |
| 参考文献 |
| 第二章 基于肠道微生态理论的缺血性卒中病因与发病机制研究进展 |
| 1 肠道微生态与肠道微生态失调 |
| 2 菌-肠-脑轴 |
| 3 从肠到脑的上行通路 |
| 4 从脑到肠的下行通路 |
| 5 脑卒中相关危险因素与肠道菌群 |
| 6 卒中并发症的肠道微生态机制 |
| 7 结论 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 基于网络药理学与分子对接的星蒌承气汤治疗缺血性卒中的机制研究 |
| 1 研究资料 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 星蒌承气汤化学活性成分的检索与筛选 |
| 2.2 星蒌承气汤化学成分及缺血性卒中靶点筛选 |
| 2.3 交集基因蛋白互作网络(PPI)分析 |
| 2.4 基因本体论(Gene ontology,GO)功能富集和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析 |
| 2.5 可视化网络构建与分析 |
| 2.6 分子对接 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 星蒌承气汤潜在化学活性成分的检索与筛选结果 |
| 3.2 星蒌承气汤活性成分靶点及缺血性卒中靶点预测结果 |
| 3.3 GO富集分析及KEGG代谢通路富集分析结果 |
| 3.4 可视化网络构建与分析 |
| 3.5 分子对接 |
| 4 讨论 |
| 4.1 网络药理学在中医药现代化研究中的应用 |
| 4.2 基于网络药理学方法探讨星蒌承气汤活性成分 |
| 4.3 基于网络药理学方法探讨星蒌承气汤效应机制 |
| 5 小结 |
| 第三部分 实验研究 |
| 实验一 星蒌承气汤对中风急性期痰热腑实证小鼠神经保护作用及网络药理学关键靶点及通路实验验证 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器设备与耗材 |
| 1.4 实验药物的配置 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组与给药 |
| 2.2 模型制备 |
| 2.3 神经功能评分 |
| 2.4 除胶实验 |
| 2.5 TTC染色 |
| 2.6 取材及处理 |
| 2.7 TUNEL法检测皮层梗死周围细胞凋亡情况 |
| 2.8 脑组织ELISA |
| 2.9 脑组织Western blot |
| 2.10 统计分析 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 神经功能评分 |
| 3.2 除胶实验 |
| 3.3 脑梗死体积评价 |
| 3.4 对缺血侧脑组织细胞凋亡的影响 |
| 3.5 星蒌承气汤对缺血侧脑组织TNF-α的影响 |
| 3.6 星蒌承气汤对缺血侧脑组织AKT、p-AKt、PI3K及NF-κB蛋白表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 星萎承气汤是治疗中风病急性期痰热腑实证的具有确切临床疗效的代表方剂 |
| 4.2 化痰通腑法代表方星蒌承气汤脑保护作用及中医理论探讨 |
| 4.3 卒中模型神经功能评分探讨 |
| 4.4 卒中模型行为学选择 |
| 4.5 星蒌承气汤与细胞凋亡 |
| 4.6 网络药理学关键靼点及通路实验验证 |
| 5 小结 |
| 实验二 星蒌承气汤对中风急性期痰热腑实证小鼠菌-肠-脑轴影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器设备与耗材 |
| 1.4 实验药物的配置 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组与给药 |
| 2.2 模型制备 |
| 2.3 取材及处理 |
| 2.4 免疫组化 |
| 2.5 免疫荧光 |
| 2.6 ELISA检测 |
| 2.8 肠道菌群分析 |
| 2.9 盲肠内容物短链脂肪酸(SCFAs)检测 |
| 2.10 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 星蒌承气汤对中风痰热腑实证小鼠肠道菌群的影响 |
| 3.2 星蒌承气汤对中风痰热腑实证小鼠肠道菌群代谢产物短链脂肪酸及短链脂肪酸受体的影响 |
| 3.3 星蒌承气对菌-肠-脑轴神经-内分泌-免疫途径相关指标影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 基于脑肠互动理论探讨化痰通腑法治疗中风病的理论基础 |
| 4.2 星蒌承气汤对短链脂肪酸影响 |
| 4.3 星萎承气汤对菌-肠-脑轴自主神经途径影响 |
| 4.4 星蒌承气汤对菌-肠-脑轴神经内分泌途径影响 |
| 4.5 星萎承气汤对菌-肠-脑轴免疫途径影响 |
| 5 小结 |
| 实验三 星萎承气汤对中风急性期痰热腑实证伪无菌小鼠菌-肠-脑轴影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器设备与耗材 |
| 1.4 实验药物的配置 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组与给药 |
| 2.2 模型制备 |
| 2.3 神经功能评分 |
| 2.4 除胶实验 |
| 2.5 TTC染色 |
| 2.6 取材及处理 |
| 2.7 免疫组化、免疫荧光 |
| 2.8 ELISA检测 |
| 2.9 肠道菌群分析 |
| 2.10 盲肠内容物SCFAs分析 |
| 2.11 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 神经功能评分 |
| 3.2 除胶实验 |
| 3.3 脑梗死体积评价 |
| 3.4 肠道菌群 |
| 3.5 短链脂肪酸 |
| 3.6 星蒌承气汤对伪无菌小鼠菌-肠-脑轴神经-内分泌-免疫途径相关指标影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 伪无菌模型建立及评价 |
| 4.2 肠道菌群是星蒌承气汤发挥作用的重要靶点 |
| 4.3 星蒌承气汤治疗急性期缺血性卒中机制的初步探讨 |
| 5 小结 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（2）基于代谢组学的刺五加叶治疗缺血性脑卒中作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 第1章 引言 |
| 1.1 缺血性脑卒中 |
| 1.1.1 缺血性脑卒中概述 |
| 1.1.2 缺血性脑卒中发病机制及主要病理环节 |
| 1.1.3 缺血性脑卒中与肠道菌群的关系 |
| 1.1.4 缺血性脑卒中常用药物 |
| 1.2 刺五加叶主要化学成分及药理作用 |
| 1.2.1 刺五加叶概述 |
| 1.2.2 刺五加叶主要化学成分 |
| 1.2.3 刺五加叶主要药理作用 |
| 1.3 代谢组学 |
| 1.3.1 代谢组学概述 |
| 1.3.2 代谢组学研究方法 |
| 1.3.3 脂质组学研究方法 |
| 1.3.4 代谢组学在缺血性脑卒中研究中的应用 |
| 1.3.5 基于高效同位素标记衍生化的代谢组学研究 |
| 1.4 本论文的研究思路、研究目的及意义 |
| 1.4.1 研究思路 |
| 1.4.2 研究目的及意义 |
| 第2章 刺五加叶治疗缺血性脑卒中的血清脂质组学及其神经保护作用研究 |
| 2.1 实验部分 |
| 2.1.1 药品、试剂及仪器 |
| 2.1.2 刺五加叶主要活性组分的制备及成分分析 |
| 2.1.3 缺血性脑卒中大鼠模型建立 |
| 2.1.4 样品采集及处理 |
| 2.1.5 组织病理学检查 |
| 2.1.6 血清脂质代谢轮廓采集 |
| 2.1.7 数据分析 |
| 2.1.8 基于UPLC-TQ/MS的神经递质定量分析 |
| 2.1.9 基于UPLC-TQ/MS的神经递质定量分析方法学考察 |
| 2.2 结果与讨论 |
| 2.2.1 刺五加叶主要活性组分成分分析 |
| 2.2.2 组织病理学检查 |
| 2.2.3 血清脂质组学代谢轮廓分析 |
| 2.2.4 血清脂质组学潜在的生物标记物鉴定 |
| 2.2.5 血清脂质组学通路分析 |
| 2.2.6 神经递质定量研究 |
| 2.2.7 炎症因子和氧化应激水平研究 |
| 2.3 小结 |
| 第3 章 刺五加叶治疗缺血性脑卒中粪便代谢组学研究及其对微生物-肠-脑轴的影响 |
| 3.1 实验部分 |
| 3.1.1 药品、试剂及仪器 |
| 3.1.2 缺血性脑卒中大鼠模型建立 |
| 3.1.3 样品采集及处理 |
| 3.1.4 粪便代谢轮廓采集 |
| 3.1.5 数据分析 |
| 3.1.6 基于UPLC-TQ/MS的大鼠粪便胆汁酸定量分析 |
| 3.1.7 粪便菌群的16S r RNA测序 |
| 3.2 结果与讨论 |
| 3.2.1 粪便非靶向代谢组学代谢轮廓分析 |
| 3.2.2 粪便非靶向代谢组学潜在的生物标记物鉴定 |
| 3.2.3 粪便非靶向代谢组学通路分析 |
| 3.2.4 基于靶向代谢组学的大鼠粪便胆汁酸的定量研究 |
| 3.2.5 刺五加叶对大鼠粪便菌群组成的影响 |
| 3.3 小结 |
| 第4章 刺五加叶通过对益生菌的调节作用治疗缺血性脑卒中的机制验证 |
| 4.1 实验部分 |
| 4.1.1 药品、试剂及仪器 |
| 4.1.2 菌群培养及菌液制备 |
| 4.1.3 缺血性脑卒中大鼠模型建立 |
| 4.1.4 样品采集及处理 |
| 4.1.5 粪便菌群的16S r RNA测序 |
| 4.1.6 大鼠脑组织中神经递质的含量测定 |
| 4.1.7 炎症因子及氧化应激等生化指标检测 |
| 4.2 结果与讨论 |
| 4.2.1 益生菌对缺血性脑卒中大鼠粪便菌群组成的影响 |
| 4.2.2 益生菌对缺血性脑卒中大鼠脑组织中神经递质水平的影响 |
| 4.2.3 益生菌对缺血性脑卒中大鼠脑组织及血清炎症因子和氧化应激水平的影响 |
| 4.3 小结 |
| 第5章 刺五加叶治疗缺血性脑卒中的尿液代谢组学研究 |
| 5.1 实验部分 |
| 5.1.1 药品、试剂及仪器 |
| 5.1.2 缺血性脑卒中大鼠模型建立 |
| 5.1.3 样品采集及处理 |
| 5.1.4 尿液代谢轮廓采集 |
| 5.1.5 数据分析 |
| 5.1.6 ELISA法对通路分析进行验证 |
| 5.2 结果与讨论 |
| 5.2.1 尿液非靶向代谢组学代谢轮廓分析 |
| 5.2.2 尿液非靶向代谢组学潜在的生物标记物鉴定 |
| 5.2.3 尿液非靶向代谢组学通路分析 |
| 5.2.4 刺五加叶治疗缺血性脑卒中对体内代谢通路的影响验证 |
| 5.3 小结 |
| 第6章 基于高效同位素标记衍生化的刺五加叶治疗缺血性脑卒中尿液代谢组学研究 |
| 6.1 实验部分 |
| 6.1.1 药品、试剂及仪器 |
| 6.1.2 缺血性脑卒中大鼠模型建立 |
| 6.1.3 样品采集及处理 |
| 6.1.4 尿液样本同位素标记衍生化 |
| 6.1.5 尿液代谢轮廓采集 |
| 6.1.6 数据分析 |
| 6.2 结果与讨论 |
| 6.2.1 尿液高效同位素标记衍生化代谢组学代谢轮廓分析 |
| 6.2.2 尿液高效同位素标记衍生化代谢组学潜在的生物标记物鉴定 |
| 6.2.3 尿液高效同位素标记衍生化代谢组学结果的科学解释 |
| 6.3 小结 |
| 第7章 结论 |
| 本论文创新点 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（3）牛黄及其有效成分对神经血管单元的保护作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 上篇文献综述 |
| 综述一 缺血性中风背景下的神经血管单元 |
| 1. 缺血性中风的研究现状 |
| 2. 神经血管单元的组成 |
| 3. 在正常和低氧条件下的生理学 |
| 4. 缺血性脑卒中的实验模型 |
| 5. 基于神经血管单元的治疗策略 |
| 6. 参考文献 |
| 综述二 中药抗缺血性脑卒中的研究进展 |
| 一. 植物药 |
| 1.1 人参 |
| 1.2 栀子 |
| 1.3 姜黄 |
| 1.4 丹参 |
| 1.5 黄芪 |
| 1.6 川芎 |
| 1.7 地黄 |
| 1.8 黄连 |
| 二. 动物药 |
| 2.1 牛黄 |
| 2.2 麝香 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 下篇 实验研究 |
| 实验一 “神经血管单元”体外模型的建立以及缺氧/复氧模型的建立 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 实验二 牛黄及其有效成分对单独培养的神经元、星形胶质细胞、内皮细胞的细胞毒性 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验三 牛黄及其有效成分对脑神经血管单元的保护作用 |
| 1. 实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验四 不同配伍组分对脑神经血管单元的保护作用 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 试验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验五 牛磺酸和熊去氧胆酸对神经血管单元的作用机制 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 试验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验六 牛磺酸和牛磺熊去氧胆酸对脑神经血管单元的作用机制 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 试验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）高脂饮食对阿尔茨海默症的影响及黄连解毒汤的干预作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 1 阿尔茨海默症病机及药物研发现状 |
| 2 高脂饮食干预阿尔茨海默症的研究进展 |
| 3 胆固醇代谢对阿尔茨海默症的影响 |
| 3.1 胆固醇与阿尔茨海默症 |
| 3.2 胆汁酸与阿尔茨海默症 |
| 4 肠道菌群对阿尔茨海默症的影响 |
| 4.1 肠道菌群与阿尔茨海默 |
| 4.2 短链脂肪酸与阿尔茨海默症 |
| 5 miRNA对阿尔茨海默症的转录调控 |
| 6 黄连解毒汤对阿尔茨海默症的干预作用 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一章 高脂饮食对APP/PS1小鼠的影响 |
| 第一节 APP/PS1及高脂饲养APP/PS1小鼠模型研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结与讨论 |
| 第二节 高脂饮食对APP/PS1小鼠胆固醇代谢相关通路的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结与讨论 |
| 第二章 高脂饮食对APP/PS1转基因小鼠肠道菌群的影响 |
| 1 材料及方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结与讨论 |
| 第三章 黄连解毒汤对高脂饲养APP/PS1小鼠的干预作用 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结与讨论 |
| 第四章 高脂饮食对APP/PS1小鼠转录组影响及黄连解毒汤的干预作用 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结与讨论 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（5）固正消癌方对结肠癌糖代谢作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 理论研究 |
| 第一章 祖国医学对结肠癌的研究概述 |
| 1. 祖国医学对结肠癌病名的认识 |
| 2. 祖国医学对结肠癌病因病机的认识 |
| 3. 祖国医学对结肠癌的辨证论治 |
| 参考文献 |
| 第二章 现代医学对结肠癌糖代谢的研究概述 |
| 1. Warburg理论的回顾与发展 |
| 2. 肿瘤微环境与糖代谢 |
| 3. AMPK信号通路 |
| 参考文献 |
| 第三章 中医药与代谢组学的研究 |
| 1. 代谢组学概论 |
| 2. 结肠癌代谢组学的研究现状 |
| 3. 中医药与代谢组学的关系 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 第一章 固正消癌方对HT-29细胞糖代谢的调控作用 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 固正消癌方含药血清的制备 |
| 1.2 细胞系 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 人结肠癌HT-29细胞的复苏、培养、传代与冻存 |
| 2.2 细胞分组与给药 |
| 2.3 Transwell迁移与侵袭实验 |
| 2.4 ATP浓度测定 |
| 2.5 葡萄糖含量测定 |
| 2.6 乳酸水平检测 |
| 2.7 乳酸脱氢酶水平检测 |
| 2.8 细胞内、外pH检测 |
| 2.9 Western Blot实验 |
| 2.10 流式细胞检测细胞凋亡 |
| 3. 统计学方法 |
| 4. 结果 |
| 4.1 固正消癌方含药血清抑制HT-29细胞Transwell迁移、侵袭能力 |
| 4.2 固正消癌方含药血清下调HT-29细胞ATP浓度 |
| 4.3 固正消癌方含药血清减少HT-29细胞内葡萄糖含量 |
| 4.4 固正消癌方含药血清降低HT-29细胞乳酸水平 |
| 4.5 固正消癌方含药血清降低HT-29细胞乳酸脱氢酶含量 |
| 4.6 固正消癌方含药血清对HT-29细胞内、外pH的影响 |
| 4.7 固正消癌方含药血清影响HT-29细胞糖代谢相关蛋白的表达 |
| 4.8 固正消癌方含药血清诱导HT-29细胞的凋亡 |
| 5. 讨论 |
| 6. 结论 |
| 第二章 固正消癌方对HT-29细胞AMPK信号通路的影响 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 固正消癌方含药血清的制备 |
| 1.2 细胞系 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 人结肠癌HT-29细胞的复苏、培养、传代与冻存 |
| 2.2 细胞分组与给药 |
| 2.3 引物的设计与合成 |
| 2.4 CCK8法监测细胞抑制率 |
| 2.5 划痕实验 |
| 2.6 Transwell迁移与侵袭实验 |
| 2.7 Weste Blot实验 |
| 3. 统计学方法 |
| 4. 结果 |
| 4.1 固正消癌方含药血清通过AMPK通路抑制HT-29细胞增殖 |
| 4.2 固正消癌方含药血清通过AMPK通路弱化HT-29细胞的迁移 |
| 4.3 固正消癌方含药血清通过AMPK通路减弱HT-29细胞的Transwell迁移、侵袭 |
| 4.4 固正消癌方含药血清通过AMPK通路影响HT-29细胞糖代谢相关蛋白的表达 |
| 4.5 固正消癌方含药血清通过AMPK通路诱导HT-29细胞凋亡蛋白的表达 |
| 5. 讨论 |
| 6. 结论 |
| 第三章 固正消癌方对荷瘤裸鼠糖代谢的调控作用 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 中药煎液制备 |
| 1.2 动物与细胞系 |
| 1.3 荷瘤裸鼠模型的建立 |
| 1.4 主要试剂 |
| 1.5 主要仪器及用具 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 动物分组与给药 |
| 2.2 裸鼠肝、脾、肾HE染色 |
| 2.3 肿瘤组织免疫组化 |
| 2.4 瘤体组织Western Blot实验 |
| 2.5 裸鼠血清液相色谱、质谱联用代谢组学分析 |
| 3. 统计学方法 |
| 4. 结果 |
| 4.1 裸鼠一般情况 |
| 4.2 裸鼠肝、脾、肾HE染色 |
| 4.3 肿瘤组织免疫组化 |
| 4.4 肿瘤组织中糖代谢相关蛋白的表达 |
| 4.5 裸鼠血清糖代谢LC-MS分析 |
| 5. 讨论 |
| 6. 结论 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 博士期间取得的成果 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（6）杏鲍菇子实体多糖的提取纯化、结构表征及降脂活性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 前言 |
| 1.1 杏鲍菇研究概况 |
| 1.1.1 杏鲍菇简介 |
| 1.1.2 杏鲍菇营养成分及生物活性物质 |
| 1.2 杏鲍菇多糖的研究概况 |
| 1.2.1 杏鲍菇多糖简介 |
| 1.2.2 杏鲍菇多糖的提取 |
| (1) 化学提取法 |
| (2) 物理提取法 |
| (3) 生物提取法 |
| 1.2.3 杏鲍菇多糖的分离及纯化 |
| 1.2.4 杏鲍菇多糖的生物活性 |
| 1.2.5 杏鲍菇多糖的结构分析 |
| 1.2.6 杏鲍菇多糖结构与生理活性 |
| 1.3 杏鲍菇多糖降脂作用研究进展 |
| 1.4 代谢组学介绍 |
| 1.5 课题研究的目的意义和研究内容 |
| 1.5.1 课题研究的目的意义 |
| 1.5.2 课题研究的主要内容 |
| 2 杏鲍菇多糖的提取、分离、纯化及理化性质 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与设备 |
| 2.2.1 实验材料与试剂 |
| 2.2.2 实验仪器与设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 提取杏鲍菇粗多糖的单因素实验 |
| 2.3.2 响应面优化实验 |
| 2.3.3 杏鲍菇多糖的水合特性分析 |
| (1) 水溶性测定 |
| (2) 持水力(WHC)测定 |
| (3) 膨胀力(SWC)测定 |
| 2.3.4 杏鲍菇多糖的分离纯化 |
| (1) Sevage法脱蛋白 |
| (2) DEAE-52离子交换色谱柱分离纯化杏鲍菇多糖 |
| (3) 分子筛柱SephadexG-100分离PEP1、PEP2和PEP3 |
| 2.3.5 杏鲍菇多糖的颜色变化 |
| 2.3.6 杏鲍菇多糖含量的测定 |
| (1) 标准曲线绘制 |
| (2) 样品多糖含量测定 |
| 2.3.7 杏鲍菇多糖中蛋白质含量的测定 |
| (1) 标准曲线绘制 |
| (2) 样品含量测定 |
| 2.3.8 杏鲍菇多糖中糖醛酸含量的测定 |
| (1) 标准曲线绘制 |
| (2) 样品含量测定 |
| 2.3.9 杏鲍菇多糖中硫酸基含量的测定 |
| (1) 标准曲线绘制 |
| (2) 样品含量测定 |
| 2.3.10 数据处理与统计 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 单因素实验结果及分析 |
| (1) 提取温度对多糖得率的影响 |
| (2) 提取时间对多糖得率的影响 |
| (3) 提取料液比对多糖得率的影响 |
| 2.4.2 响应面分析方法优化工艺结果 |
| 2.4.3 杏鲍菇粗多糖的水合性分析 |
| 2.4.4 杏鲍菇多糖分离纯化 |
| 2.4.5 杏鲍菇多糖颜色测定结果 |
| 2.4.6 杏鲍菇多糖含量测定结果 |
| 2.4.7 多糖中蛋白质含量测定结果 |
| 2.4.8 多糖中糖醛酸含量测定结果 |
| 2.4.9 多糖中硫酸基含量测定结果 |
| 2.5 本章小结 |
| 3 杏鲍菇多糖的结构表征表征 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与设备 |
| 3.2.1 实验材料与试剂 |
| 3.2.2 实验仪器与设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 波谱分析 |
| 3.3.2 单糖组成分析(离子色谱法) |
| 3.3.3 甲基化分析 |
| 3.3.4 形貌特征分析 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 波谱分析 |
| 3.4.2 单糖组成分析 |
| 3.4.3 甲基化分析 |
| 3.4.4 形貌特征 |
| 3.5 本章小结 |
| 4 杏鲍菇多糖体外抗氧化和体内抗疲劳活性 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料与设备 |
| 4.2.1 实验材料与试剂 |
| 4.2.2 实验仪器与设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 杏鲍菇多糖体外抗氧化活性评价 |
| (1) 杏鲍菇多糖还原力的测定 |
| (2) 杏鲍菇多糖清除超氧阴离子能力 |
| (3) 杏鲍菇多糖清除羟自由基(·OH)能力 |
| (4) 杏鲍菇多糖清除DPPH自由基能力 |
| (5) 杏鲍菇多糖ABTS~+·自由基清除能力测定 |
| 4.3.2 杏鲍菇多糖体内抗疲劳活性评价 |
| (1) 动物实验和分组 |
| (2) 小鼠的竭力游泳实验 |
| 4.3.3 数据处理与统计 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 杏鲍菇多糖体外抗氧化活性结果 |
| (1) 杏鲍菇多糖还原力的测定结果 |
| (2) 羟基自由基(-OH)清除作用 |
| (3) DPPH自由基清除作用 |
| (4) 超氧阴离子自由基清除作用 |
| (5) ABTS~+自由基清除作用 |
| 4.4.2 杏鲍菇多糖体内抗疲劳活性结果 |
| (1) PEP对体重和器官指数的影响 |
| (2) PEP对生化参数相关疲劳的影响 |
| 4.5 本章小结 |
| 5 杏鲍菇多糖对高脂膳食诱导小鼠的降脂作用研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料与设备 |
| 5.2.1 实验材料与试剂 |
| 5.2.2 实验仪器与设备 |
| 5.2.3 实验动物及饲料配比 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 动物分组与处理 |
| 5.3.2 血样及标本采集 |
| 5.3.3 小鼠生理指标的检测 |
| 5.3.4 小鼠血清生化指标检测 |
| 5.3.5 组织形态学观察 |
| 5.3.6 数据处理 |
| 5.4 结果与讨论 |
| 5.4.1 PEP对小鼠生理指标的检测结果 |
| (1)小鼠生活情况观察 |
| (2) 小鼠体重的变化 |
| (3) 脏器和脂肪系数的变化 |
| 5.4.2 小鼠生化指标检测结果 |
| 5.4.3 小鼠组织形态学观察结果 |
| (1)杏鲍菇多糖对小鼠肝脏组织形态学观察结果 |
| (2) 杏鲍菇多糖对小鼠脂肪组织形态学观察结果 |
| 5.5 本章小结 |
| 6 基于代谢组学技术研究杏鲍菇多糖的降脂机制 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 实验材料与设备 |
| 6.2.1 实验动物 |
| 6.2.2 实验仪器、配件和试剂 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 采用LC-MS对小鼠血清样品进行代谢物分析 |
| (1) 样品前处理 |
| (2) 仪器方法 |
| 6.3.2 数据处理方法 |
| (1) 数据预处理 |
| (2) 主成分分析(PCA)和偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA) |
| (3) 显着性分析 |
| (4) 化合物筛选 |
| (5) 寻找代谢通路 |
| 6.4 结果与讨论 |
| 6.4.1 LC-MS分析各组小鼠血清样品结果 |
| (1) 正离子模式 |
| (a) 得分矩阵图 |
| (b) 载荷矩阵图 |
| (c) 代谢物 |
| (d) 代谢通路 |
| (2) 负离子模式 |
| (a) 得分矩阵图 |
| (b) 载荷矩阵图 |
| (c) 代谢物 |
| (d) 代谢通路 |
| 6.5 本章小结 |
| 7 基于AMPK/ACC途径研究杏鲍菇多糖的降脂机制 |
| 7.1 引言 |
| 7.2 实验材料与设备 |
| 7.2.1 实验材料与试剂 |
| 7.2.2 实验仪器与设备 |
| 7.3 实验方法 |
| 7.3.1 提取组织蛋白 |
| 7.3.2 BCA法测定蛋白含量 |
| 7.3.3 蛋白质变性 |
| 7.3.4 WB测定蛋白 |
| 7.3.5 实时荧光定量PCR |
| 7.4 结果与讨论 |
| 7.4.1 WB结果 |
| 7.4.2 荧光定量PCR结果 |
| 7.5 本章小结 |
| 8 结论与展望 |
| 8.1 结论与创新点 |
| 8.1.1 结论 |
| 8.1.2 创新点 |
| 8.2 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的主要成果 |
| 致谢 |
（7）Drp1在急性缺血缺氧损伤致线粒体质量失衡中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| Abstract |
| 摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 急性缺血缺氧损伤后多组织器官线粒体质量失衡的特征规律研究 |
| 引言 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 Drp1在急性缺血缺氧损伤致线粒体质量失衡中的作用及调控机制研究 |
| 引言 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 第三部分 干预Drp1对急性缺血缺氧损伤重要器官功能保护作用及临床意义研究 |
| 引言 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述一 Drp1在缺血缺氧损伤中的作用及机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 创伤休克血管低反应性研究进展 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（8）植物乳杆菌对小鼠肝脏脂代谢的调控与作用机制（论文提纲范文）
| 附件 |
| 摘要 |
| abstract |
| 主要符号对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 非酒精性脂肪肝 |
| 1.2 肠道微生物的结构与功能 |
| 1.3 NAFLD发生机制 |
| 1.4 肠道微生物失调与肝疾病 |
| 1.5 肠道微生物在NAFLD中的发生机制 |
| 1.5.1 肠道微生物与能量代谢 |
| 1.5.2 肠道微生物与内源性乙醇 |
| 1.5.3 肠道微生物与胆汁酸代谢 |
| 1.5.4 肠道微生物与胆碱代谢 |
| 1.5.5 肠道微生物与系统慢性炎症 |
| 1.5.6 肠道微生物与肠道渗透性 |
| 1.6 益生菌 |
| 1.7 本研究的目的和意义 |
| 1.8 技术路线与研究内容 |
| 1.8.1 技术路线 |
| 1.8.2 研究内容 |
| 第二章 降脂植物乳杆菌的筛选及其黏附性能研究 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验菌株、细胞 |
| 2.1.2 试剂盒和生化试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.1.4 培养基及主要溶液的配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 植物乳杆菌的准备 |
| 2.2.2 细胞培养 |
| 2.2.3 植物乳杆菌耐酸和耐胆盐特性 |
| 2.2.4 植物乳杆菌抗人工胃肠液的耐受性 |
| 2.2.5 菌株的抗病原菌特性筛选 |
| 2.2.6 植物乳杆菌表面疏水性的测定 |
| 2.2.7 植物乳杆菌自聚合能力的测定 |
| 2.2.8 植物乳杆菌对胆固醇降解实验 |
| 2.2.9 植物乳杆菌胆盐水解酶活性实验 |
| 2.2.10 植物乳杆菌对Caco-2细胞的黏附 |
| 2.2.11 FRT4与FRT10 基因组测序 |
| 2.3 统计学方法 |
| 2.4 结果与分析 |
| 2.4.1 植物乳杆菌的耐酸性和耐胆盐特性 |
| 2.4.2 植物乳杆菌对人工胃肠液的耐受性 |
| 2.4.3 植物乳杆菌抑菌特性 |
| 2.4.4 植物乳杆菌疏水能力的测定 |
| 2.4.5 植物乳杆菌自聚能力的测定 |
| 2.4.6 植物乳杆菌对Caco-2细胞的黏附能力 |
| 2.4.7 植物乳杆菌降解胆固醇的能力 |
| 2.4.8 植物乳杆菌胆盐水解酶活性 |
| 2.4.9 FRT4与FRT10 基因组测序结果 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 本章小结 |
| 第三章 植物乳杆菌对HepG2细胞脂质代谢与作用机制研究 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验菌株、细胞 |
| 3.1.2 试剂盒与生化试剂 |
| 3.1.3 主要仪器 |
| 3.1.4 培养基及主要溶液的配制 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 植物乳杆菌的培养及计数 |
| 3.2.2 HepG2细胞的培养 |
| 3.2.3 建立脂肪肝细胞脂肪变性模型的方法 |
| 3.2.4 植物乳杆菌及其代谢产物对HepG2细胞甘油三酯的影响 |
| 3.2.5 基因表达 |
| 3.2.6 凋亡检测 |
| 3.3 统计学方法 |
| 3.4 结果 |
| 3.4.1 HepG2细胞脂质变性模型的构建 |
| 3.4.2 植物乳杆菌及其代谢产物对HepG2细胞甘油三酯的影响 |
| 3.4.3 RT-PCR检测植物乳杆菌对HepG2 细胞脂质代谢情况 |
| 3.4.4 Annexin V/PI双染结果 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 第四章 植物乳杆菌对小鼠肝脏脂代谢的影响及调控机制 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验动物 |
| 4.1.2 实验菌种 |
| 4.1.3 试剂盒和生化试剂 |
| 4.1.4 主要仪器 |
| 4.1.5 培养基及主要溶液的配制 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 植物乳杆菌准备 |
| 4.2.2 动物实验 |
| 4.3 统计学分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 植物乳杆菌对高脂饮食小鼠采食量和生长性能的影响 |
| 4.4.2 植物乳杆菌对肝病理的影响 |
| 4.4.3 植物乳杆菌对血清生化指标影响 |
| 4.4.4 植物乳杆菌对肝生化指标的影响 |
| 4.4.5 植物乳杆菌添加对肝脏脂质相关基因表达的影响 |
| 4.4.6 植物乳杆菌对结肠紧密蛋白基因的影响 |
| 4.4.7 植物乳杆菌添加对肝脏炎症因子的影响 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 第五章 代谢组学研究植物乳杆菌对肝脏脂代谢的影响 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.1.1 实验样品 |
| 5.1.2 实验试剂 |
| 5.1.3 主要仪器 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 分析流程 |
| 5.2.2 色谱-质谱分析 |
| 5.3 统计学方法 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.4.1 高脂饮食对小鼠肝脏代谢组的影响 |
| 5.4.2 植物乳杆菌FRT4对高脂饮食小鼠代谢组的影响 |
| 5.4.3 植物乳杆菌FRT10对高脂饮食小鼠代谢组的影响 |
| 5.5 讨论 |
| 5.6 小结 |
| 第六章 植物乳杆菌调控小鼠脂质代谢的肠道微生态机制研究 |
| 6.1 实验材料 |
| 6.1.1 实验样品 |
| 6.1.2 实验试剂 |
| 6.1.3 实验设备 |
| 6.2 实验方法 |
| 6.2.1 盲肠内容物DNA提取,检测及测定 |
| 6.3 生物信息学分析流程 |
| 6.4 生物信息学分析方法 |
| 6.4.1 OTU分析 |
| 6.4.2 稀释曲线 |
| 6.4.3 Rank-abundance曲线 |
| 6.4.4 Alpha多样性分析 |
| 6.4.5 样本比较分析 |
| 6.4.6 物种组成分析 |
| 6.4.7 物种差异分析 |
| 6.5 统计学方法 |
| 6.6 实验结果 |
| 6.6.1 测序数据基本信息 |
| 6.6.2 稀释曲线与Rank-abundance曲线分析 |
| 6.6.3 添加植物乳杆菌对小鼠盲肠菌群微生物Alpha多样性的影响 |
| 6.6.4 添加植物乳杆菌对小鼠盲肠菌群微生物Beta多样性的影响 |
| 6.6.5 添加植物乳杆菌FRT4对小鼠盲肠物种多样性的影响分析 |
| 6.6.6 添加植物乳杆菌FRT10对小鼠盲肠物种多样性的影响分析 |
| 6.7 讨论 |
| 6.8 小结 |
| 第七章 代谢组学研究植物乳杆菌对小鼠盲肠内容物的影响 |
| 7.1 实验材料 |
| 7.1.1 实验样品 |
| 7.1.2 实验试剂 |
| 7.1.3 主要仪器 |
| 7.1.4 实验方法 |
| 7.2 数据统计与代谢通路分析 |
| 7.3 实验结果 |
| 7.3.1 差异代谢物 |
| 7.3.2 高脂饮食对小鼠盲肠微生物代谢组的影响 |
| 7.3.3 植物乳杆菌FRT4对高脂饮食小鼠盲肠微生物代谢组的影响 |
| 7.3.4 植物乳杆菌FRT10对高脂饮食小鼠盲肠微生物代谢组的影响 |
| 7.3.5 HF对CT组差异代谢物代谢通路分析 |
| 7.3.6 植物乳杆菌 FRT4 对 HF 组差异代谢物代谢通路分析 |
| 7.3.7 植物乳杆菌 FRT10 对 HF 组差异代谢物代谢通路分析 |
| 7.3.8 肠道微生物与代谢物关联分析 |
| 7.3.9 肠道内容物与肝代谢物关联分析 |
| 7.4 讨论 |
| 7.5 小结 |
| 第八章 全文结论 |
| 8.1 结论 |
| 8.2 创新点 |
| 8.3 有待进一步研究的问题 |
| 参考文献 |
| 附录A |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（9）基于FXR/FGF15/FGFR4通路研究黄连吴茱萸配伍调控胆汁酸代谢发挥降脂效应的作用机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 1 西医学对高脂血症的认识 |
| 1.1 流行病学研究 |
| 1.2 高脂血症的病因及发病机制 |
| 1.3 高脂血症的治疗 |
| 1.3.1 饮食运动治疗 |
| 1.3.2 药物治疗 |
| 1.4 胆汁酸代谢 |
| 1.4.1 胆汁酸是体内胆固醇的主要代谢途径 |
| 1.4.2 胆汁酸代谢与高脂血症的相关性 |
| 1.4.3 FXR/FGF15/FGFR4 是控制胆汁酸合成的关键通路 |
| 2 中医学对血脂的认识 |
| 2.1 膏脂的含义 |
| 2.2 膏脂为人体所必需的精微物质 |
| 2.3 膏脂的化生与脾胃关系密切 |
| 2.4 膏脂转输失常形成高脂血症 |
| 3 中医学对高脂血症的认识 |
| 3.1 中医对高脂血症病名的认识 |
| 3.2 中医对高脂血症病因的认识 |
| 3.2.1 过食肥甘厚味 |
| 3.2.2 过逸少劳 |
| 3.2.3 体质因素 |
| 3.2.4 情志因素 |
| 3.3 中医对高脂血症病机的认识 |
| 3.3.1 脾运失健 |
| 3.3.2 脾胃气虚 |
| 3.3.3 肝失疏泄 |
| 3.3.4 肾失气化 |
| 3.3.5 肝肾阴虚 |
| 3.3.6 痰瘀互结 |
| 3.4 中医对高脂血症的辨证分型 |
| 3.5 中医对高脂血症的治疗 |
| 3.5.1 饮食疗法 |
| 3.5.2 适量运动 |
| 3.5.3 针灸治疗 |
| 3.5.4 中药复方 |
| 3.5.5 其他 |
| 4 从脾胃论治高脂血症的依据 |
| 4.1 理论基础 |
| 4.2 临床经验 |
| 4.3 实验研究 |
| 5 辛开苦降法为治疗脾胃病的常用治法 |
| 5.1 辛开苦降法的含义 |
| 5.2 辛开苦降法调节脾胃气机升降 |
| 5.2.1 脾胃为气机升降之枢纽 |
| 5.2.2 脾胃病以寒热错杂证多见 |
| 5.3 历代医家对辛开苦降法的运用 |
| 6 黄连吴茱萸配伍为辛开苦降法的体现 |
| 6.1 黄连吴茱萸配伍的概述 |
| 6.2 古代医家对黄连吴茱萸的运用 |
| 6.3 黄连吴茱萸药理作用研究 |
| 6.3.1 黄连的药理作用 |
| 6.3.2 吴茱萸的药理作用 |
| 6.3.3 黄连吴茱萸配伍的药理作用 |
| 6.4 黄连吴茱萸的临床研究 |
| 6.4.1 黄连吴茱萸治疗高脂血症的临床研究 |
| 6.4.2 黄连吴茱萸配伍治疗消化系统疾病的临床研究 |
| 第二部分 实验研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 中药煎剂制备 |
| 2.2 高脂饲料制备 |
| 2.3 动物分组 |
| 2.4 给药方法 |
| 2.5 标本采集与处理 |
| 2.6 观察指标及检测指标 |
| 2.6.1 行为体征观察 |
| 2.6.2 血浆检测 |
| 2.6.3 肝指数(Hepatic index,HI) |
| 2.6.4 肝脏组织病理切片及HE染色 |
| 2.6.5 肝脏及回肠组织中相关基因检测 |
| 2.6.6 肝脏及回肠组织中相关蛋白检测 |
| 2.6.7 胆汁酸谱检测 |
| 2.7 统计学方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 动物一般情况观察 |
| 3.2 黄连吴茱萸配伍对高脂模型小鼠饲料消耗量的影响 |
| 3.3 黄连吴茱萸配伍对高脂模型小鼠体重的影响 |
| 3.4 黄连吴茱萸配伍对高脂模型小鼠血脂水平的影响 |
| 3.5 黄连吴茱萸配伍对高脂模型小鼠肝脏指数及病理形态的影响 |
| 3.5.1 对高脂模型小鼠HI的影响 |
| 3.5.2 对高脂模型小鼠肝脏形态的影响 |
| 3.5.3 对高脂模型小鼠肝脏组织形态的影响 |
| 3.6 黄连吴茱萸配伍对高脂血症小鼠血清炎性因子水平的影响 |
| 3.7 黄连吴茱萸配伍对高脂血症小鼠胆汁酸代谢通路相关基因的影响 |
| 3.7.1 总RNA质量检测 |
| 3.7.2 溶解曲线 |
| 3.7.3 对高脂血症小鼠肝脏CYP7A1、FGFR4、FXR基因表达的影响 |
| 3.7.4 对高脂血症小鼠回肠FXR、FGF15 基因表达的影响 |
| 3.8 黄连吴茱萸配伍对高脂血症小鼠胆汁酸代谢通路相关蛋白的影响 |
| 3.8.1 肝、肠组织蛋白浓度 |
| 3.8.2 对高脂血症小鼠肝脏CYP7A1、FGFR4、FXR蛋白表达的影响 |
| 3.8.3 对高脂血症小鼠回肠FXR、FGF15 蛋白表达的影响 |
| 3.9 黄连吴茱萸配伍对高脂血症小鼠胆汁酸代谢组学的影响 |
| 3.9.1 代谢物标准品XIC图 |
| 3.9.2 质控样本评价 |
| 3.9.3 胆汁酸成分 |
| 3.9.4 标准曲线结果 |
| 3.9.5 对胆汁酸谱不同种类的影响 |
| 3.9.6 差异胆汁酸 |
| 讨论 |
| 1 高脂血症模型评价 |
| 1.1 高脂血症模型选择 |
| 1.1.1 高脂饲料喂养法 |
| 1.1.2 脂肪乳剂灌胃法 |
| 1.1.3 复合因素造模法 |
| 1.2 高脂血症模型评价 |
| 2 黄连吴茱萸配伍对高脂血症小鼠血脂代谢的影响 |
| 2.1 对高脂血症小鼠血清脂质水平的影响 |
| 2.2 改善高脂血症小鼠肝脏脂肪变的作用 |
| 3 黄连吴茱萸配伍对高脂血症小鼠的抗炎作用 |
| 3.1 对血清促炎因子TNF-α、IL-6 水平的影响 |
| 3.2 对血清抗炎因子IL-10水平的影响 |
| 4 黄连吴茱萸配伍对高脂血症小鼠胆汁酸代谢的调节作用 |
| 4.1 对胆汁酸代谢谱的影响 |
| 4.1.1 对胆汁酸谱不同种类的影响 |
| 4.1.2 差异胆汁酸 |
| 4.2 对胆汁酸代谢通路的影响 |
| 4.2.1 胆汁酸经典合成途径 |
| 4.2.2 FXR/FGF15/FGFR4 通路 |
| 4.3 肝脏FXR |
| 5 黄连吴茱萸配伍治疗高脂血症作用探讨 |
| 结论 |
| 特色与创新 |
| 不足与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 中医治疗高血脂症的研究进展 |
| 参考文献 |
| 在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果(示例) |
（10）中药木蝴蝶总黄酮抗肝肿瘤活性及作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略语 |
| 前言 |
| 第一章 木蝴蝶抗肝肿瘤物质基础分析 |
| 第一节 木蝴蝶水提物指纹图谱的建立 |
| 第二节 木蝴蝶醇提物指纹图谱的建立 |
| 第三节 木蝴蝶水、醇提物木蝴蝶苷B的含量测定研究 |
| 第四节 木蝴蝶醇提物谱效关系研究 |
| 第五节 本章小结 |
| 第二章 基于微流控芯片木蝴蝶总黄酮类抗肝肿瘤体外药效学研究 |
| 第一节 基于药效芯片木蝴蝶总黄酮类对肝癌细胞增殖的影响研究 |
| 第二节 基于迁移芯片木蝴蝶总黄酮类对肝癌细胞迁移的影响研究 |
| 第三节 本章小结 |
| 第三章 基于DEN诱导大鼠肝癌模型木蝴蝶总黄酮类抗肝肿瘤体内药效学研究 |
| 第一节 DEN诱导大鼠肝癌模型的建立 |
| 第二节 基于DEN诱导大鼠肝癌模型木蝴蝶总黄酮类体内药效学研究 |
| 第三节 本章小结 |
| 第四章 基于代谢组学木蝴蝶总黄酮类抗肝肿瘤作用机制研究 |
| 第一节 基于代谢组学DEN肝癌大鼠模型评价 |
| 第二节 基于代谢组学木蝴蝶总黄酮抗肝肿瘤作用机制研究 |
| 第三节 基于代谢组学木蝴蝶苷B抗肝肿瘤作用机制研究 |
| 第四节 本章小结 |
| 第五章 基于基因组学木蝴蝶总黄酮类抗肝肿瘤作用机制研究 |
| 第一节 基于转录组测序木蝴蝶总黄酮类抗肝肿瘤差异基因筛选研究 |
| 第二节 基于非转录组测序木蝴蝶总黄酮类抗肝肿瘤差异基因筛选研究 |
| 第三节 本章小结 |
| 第六章 基于相关基因蛋白木蝴蝶总黄酮类抗肝肿瘤作用机制研究 |
| 第一节 基于相关基因木蝴蝶总黄酮类抗肝肿瘤作用机制研究 |
| 第二节 基于相关蛋白木蝴蝶总黄酮类抗肝肿瘤作用机制研究 |
| 第三节 本章小结 |
| 分析讨论 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 在学期间科研成绩 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
四、Caspase蛋白酶活化在牛磺酸脱氧胆酸诱导HepG2细胞凋亡中的作用（论文参考文献）
- [1]星蒌承气汤治疗急性缺血性卒中痰热腑实证机制研究[D]. 高强. 北京中医药大学, 2021(01)
- [2]基于代谢组学的刺五加叶治疗缺血性脑卒中作用机制研究[D]. 汪戎锦. 吉林大学, 2021(01)
- [3]牛黄及其有效成分对神经血管单元的保护作用研究[D]. 杜欣. 北京中医药大学, 2021(02)
- [4]高脂饮食对阿尔茨海默症的影响及黄连解毒汤的干预作用[D]. 樊小瑞. 北京中医药大学, 2021(02)
- [5]固正消癌方对结肠癌糖代谢作用机制研究[D]. 周肸. 南京中医药大学, 2021(01)
- [6]杏鲍菇子实体多糖的提取纯化、结构表征及降脂活性研究[D]. 赵圆圆. 陕西科技大学, 2020(05)
- [7]Drp1在急性缺血缺氧损伤致线粒体质量失衡中的作用及机制研究[D]. 段晨阳. 中国人民解放军陆军军医大学, 2020(07)
- [8]植物乳杆菌对小鼠肝脏脂代谢的调控与作用机制[D]. 蔡红英. 中国农业科学院, 2020(01)
- [9]基于FXR/FGF15/FGFR4通路研究黄连吴茱萸配伍调控胆汁酸代谢发挥降脂效应的作用机制[D]. 徐路. 成都中医药大学, 2020(01)
- [10]中药木蝴蝶总黄酮抗肝肿瘤活性及作用机制研究[D]. 李楠楠. 辽宁中医药大学, 2019(01)